蓝舌病Ⅰ型病毒VP5蛋白的表达纯化及免疫原性分析

论文摘要

为分析蓝舌病Ⅰ型病毒（BTV-1）VP5蛋白的免疫原性,本研究构建了载体PET-28a-VP5并转化BL21（DE3）,然后进行IPTG诱导表达,以及SDS-PAGE和Western-blot分析。结果显示,重组VP5蛋白相对分子质量约为62 kDa,与预期结果一致。进一步优化条件,发现IPTG为0.2 mmol/L、温度为25℃、诱导6 h时,重组蛋白在上清中表达量最高,通过Ni柱纯化获得的重组蛋白纯度约为75%。将纯化后的重组蛋白VP5分别以40μg/只和20μg/只免疫Balb/c小鼠,同时设置PBS为阴性对照,对三免后血清进行间接ELISA检测,发现高、低剂量免疫小鼠均能产生针对VP5蛋白的特异性抗体。用灭活BTV-1进行DOT-ELISA检测,发现其能与VP5蛋白免疫的小鼠血清发生特异性反应,说明利用大肠杆菌表达的重组蛋白VP5具有良好的免疫特性,这为进一步开展BTV相关研究奠定了基础。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 材料
•   1.2 方法
•     1.2.1 目的基因合成及引物设计
•     1.2.2 重组表达载体构建及鉴定
•     1.2.3 VP5重组蛋白表达及可溶性分析
•     1.2.4 VP5重组蛋白表达条件优化
•       1.2.4. 1 培养基成分优化
•       1.2.4. 2 诱导剂IPTG浓度优化
•       1.2.4.3诱导表达时间
•       1.2.4.4金属离子种类
•       1.2.4. 5 诱导温度
•     1.2.5 蛋白纯化
•     1.2.6 动物试验
•     1.2.7 免疫效果初步评价
•       1.2.7. 1 Dot-ELISA测定免疫血清与灭活BTV-1反应性
•       1.2.7. 2 间接ELISA测定免疫血清效价
• 2 结果
•   2.1 原核表达载体构建
•   2.2 重组蛋白初步表达及可溶性分析
•   2.3 重组蛋白表达条件优化
•   2.4 NI柱层析法纯化VP5蛋白
•   2.5 免疫效果初步评价
• 3 讨论
• 4 结论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 陈玉梅,党伟华,刘燕凯,周景明,刘红亮,郭亚楠,张改平,王爱萍

关键词: 蓝舌病型病毒,蛋白,蛋白表达,蛋白纯化,条件优化,免疫分析

来源: 中国动物检疫 2019年03期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 郑州大学生命科学学院

基金: 国家重点研发计划项目(2017YFD0502304-4),智汇郑州1125计划

分类号: S852.65

页码: 69-74+83

总页数: 7

文件大小: 2005K

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