导读:本文包含了基因敲入论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:基因,敲入,舞蹈病,内质网,蛋白,质粒,细胞。
基因敲入论文文献综述
姚璇,Meiling,Zhang,Xing,Wang,Wenqin,Ying,Xinde,Hu[1]（2019）在《Tild-CRISPR可在小鼠和人类细胞中实现高效、精确的基因敲入》一文中研究指出文章简介研究团队基于CRISPR/Cas9系统,设计了一种新的靶向整合策略Tild-CRISPR,通过PCR扩增或者精确酶切,获得含有800bp同源臂的转基因供体与Cas9 mRNA以及single-guide RNA一起注射到小鼠(本文来源于《科学新闻》期刊2019年02期）
张梦然[2]（2019）在《“基因魔剪”让癌症建模更准确高效》一文中研究指出科技日报北京4月16日电 （记者张梦然）据开放获取期刊《基因组医学》16日公开的一项研究，美国科学家报告了一种建立癌症小鼠模型的新方法——利用有“基因魔剪”之称的CRISPR/Cas9系统快速将癌症相关基因敲入小鼠的DNA中。该方法以前所未有的高效，满足(本文来源于《科技日报》期刊2019-04-17）
李岱素,潘慧[3]（2019）在《国际权威学术期刊《细胞》在线发表生物学领域的一项重大成果:世界首例神经疾病基因敲入猪在广东诞生》一文中研究指出精彩回放:广东科学家领衔的国际研究团队经过四年努力,首次利用基因"剪刀"(基因编辑技术CRISPR/Cas9)和体细胞核移植技术,精准地把人突变的亨廷顿基因"粘贴(敲入)"到猪的亨廷顿基因中,并成功培育出世界首例亨廷顿舞蹈病基因敲入猪,精准地模拟出亨廷顿舞蹈病这一人类神经退行性疾病。该项成果于北京时间2018年3月30日在线发表在世界生物学顶尖学术期刊《细胞》上。论文共同通讯(本文来源于《广东科技》期刊2019年02期）
张雪梅,高旭,马宁[4]（2019）在《基于CRISPR/Cas9技术的基因敲入/敲除策略》一文中研究指出成簇的规律间隔性短回文序列(CRISPR)基因编辑系统,因其设计简单操作方便和无种属限制,已成为一种广泛应用的基因组定点编辑工具,在复杂的基因组编辑,例如基因的人源化改造以及条件等位基因的构建中有所应用。在自然界中,CRISPR系统拥有多种类别。其中,CRISPR/Cas9系统是研究最深入、应用最成熟的一种。本文针对CRISPR/Cas9系统,分别从基因敲入/敲除片段的大小、同源臂长短、构型即递送方式等技术环节进行综述,阐述不同设计及操作条件下由CRISPR/Cas9系统介导的基因敲入/敲除的效率差异。(本文来源于《中国生物化学与分子生物学报》期刊2019年01期）
邹征伟,赖兴强,李伟强[5]（2018）在《基于episomal CRISPR/Cas9载体的基因敲入方法》一文中研究指出【目的】研究一种在哺乳动物细胞中高效的基因敲入方法,比较带有oriP-EBNA1序列的episomal CRISPR/Cas9载体与普通CRISPR/Cas9载体的基因敲入效率是否有差别。【方法】首先利用慢病毒载体构建稳定表达红色荧光蛋白DsRedE2的人胚肾细胞系(293FT)与人诱导多能干细胞系(hiPS);利用CRISPR/Cas9序列设计网站,设计和合成靶向DsRedE2的向导RNA(sgRNA),分别克隆至带有oriP-EBNA1的episomal CRISPR/Cas9敲除载体与普通CRISPR/Cas9敲除载体中,测序筛选插入正确片段的克隆;然后设计靶向DsRedE2的同源臂,把同源臂连接在绿色荧光蛋白(GFP)的两端,构建GFP敲入片段的载体。把两种敲除载体分别导入到DsRedE2-293FT与DsRedE2-hiPS细胞系中,在不同时间点通过荧光显微镜观察以及流式细胞分析比较细胞的敲除效率,同时利用PCR检测靶基因的敲除情况;在筛选获得有效的sgRNA片段后,把两种敲除载体和同源臂同时导入到DsRedE2-293FT与DsRedE2-hiPS细胞系中,在不同时间通过荧光显微镜观察以及流式细胞分析比较细胞的敲入效率,同时利用PCR检测DsRedE2序列中GFP的敲入情况。【结果】成功构建表达DsRedE2的293FT与hiPS细胞系;获得靶向DsRedE2的episomal CRISPR/Cas9敲除载体、普通CRISPR/Cas9敲除载体及带有GFP的同源臂载体;荧光显微镜观察与流式细胞分析结果显示,转染两种CRISPR/Cas9质粒均可以使DsRedE2阳性细胞明显减少,而且episomal CRISPR/Cas9质粒组的DsRedE2阳性细胞数量显着低于转染普通CRISPR/Cas9质粒组。同时,敲入实验证实episomal CRISPR/Cas9组的GFP阳性细胞数量比普通CRISPR/Cas9组更多;TA克隆测序证实打靶位点有敲除与敲入片段。【结论】episomal CRISPR/Cas9载体与普通CRISPR/Cas9载体在细胞上都能实现基因的敲除与敲入;带有oriP-EBNA1序列的episomal CRISPR/Cas9载体敲除和敲入的效率均比普通CRISPR/Cas9载体高。以上结果为利用episomal CRISPR/Cas9载体进行人多能干细胞的基因敲入研究和谱系追踪动物模型的建立提供了重要的实验基础。(本文来源于《中山大学学报(医学版)》期刊2018年05期）
黄轻飏[6]（2018）在《Skp2~(G72S/G72S)基因敲入小鼠模型的建立及表型分析》一文中研究指出细胞内蛋白质的降解途径主要为溶酶体途径和泛素蛋白酶体途径。泛素蛋白酶体系统包括泛素激活酶(E1)、泛素结合酶(E2)和泛素连接酶(E3)等。泛素化过程中的底物特异性主要由E3连接酶控制。目前已知约有600个E3连接酶,按蛋白质序列同源性特征主要分为叁个家族:HECT家族,RING finger家族和RBR家族。在RING类泛素E3连接酶中,SCF复合物受到广泛关注。SCF复合物由支架蛋白Cullin1,RING finger蛋白Rbx1/2,接头蛋白Skp1(S期激酶相关蛋白1)和F-box蛋白组成。F-box蛋白被划分为叁个亚家族:FBXW、FBXL和FBXO亚家族。这些F-box蛋白靶向范围广泛的蛋白底物,并参与调节如细胞周期、细胞增殖、细胞凋亡、血管生成和转移等细胞过程。Skp2属于FBXL家族,是目前研究最为广泛的F-box蛋白之一。Skp2在Ser64和Ser72残基处被Cdk2和Akt磷酸化,可以防止Cdh1与Skp2的结合,从而减弱Skp2泛素化和降解,促进Skp2稳定,触发SCF复合物形成及E3酶活,并且介导Skp2向胞质定位,促进细胞迁移和增殖。Skp2在小鼠中的过度表达导致肿瘤发展。同时,Skp2对调控细胞衰老也起到抑制作用。在Arf~(-/-)或Pten~(-/-)小鼠中Skp2的缺失促进淋巴瘤或前列腺癌细胞衰老。Skp2对生命活动的调控与其蛋白的磷酸化修饰息息相关。特别是Skp2的Ser72残基发生磷酸化修饰对其行使功能具有重要的作用。然而已有关于Skp2蛋白的Ser72磷酸化修饰功能的研究文献大都是在人类细胞或者动物细胞水平,在哺乳动物整体水平关于Skp2蛋白的Ser72磷酸化修饰的生物学作用还没有得到验证。Skp2的第72位氨基酸在其他高等哺乳动物中都是丝氨酸(Ser),而在小鼠中为甘氨酸(Gly),不能被Akt磷酸化,我们首次构建了Skp2~(G72S/G72S)定点突变小鼠,亦为Skp2的人源化小鼠。试图在动物整体水平上研究Skp2-G72S单氨基酸突变后对小鼠生理功能的影响,揭示小鼠中Skp2的Ser72残基发生磷酸化修饰的重要生物学功能。根据文献调研我们预测Skp2~(G72S/G72S)小鼠模型会有类似延缓细胞衰老的表型。本研究中,我们利用CRISPR-Cas9技术构建了Skp2~(G72S/G72S)定点突变小鼠;经过实验检测发现在动物整体水平上,与Skp2~(WT/WT)小鼠相比,Skp2~(G72S/G72S)小鼠在体型、体重上没有明显差异,对小鼠组织器官(大脑、肝、心、肺、肾、睾丸和胫骨)做HE染色检测病理表型,没有发现Skp2~(G72S/G72S)小鼠与Skp2~(WT/WT)小鼠有明显差异。对两种小鼠做了葡萄糖耐受实验和胰岛素耐受实验,结果Skp2~(G72S/G72S)小鼠与Skp2~(WT/WT)小鼠葡萄糖的代谢没有明显改变。在细胞和分子水平上,与Skp2~(WT/WT)小鼠相比,Skp2~(G72S/G72S)MEFs细胞的侵袭和迁移能力有增强,但在细胞增殖、衰老、凋亡以及细胞周期调控等方面没有明显差异;与Skp2~(WT/WT)MEFs相比,Skp2~(G72S/G72S)MEFs中Skp2的亚细胞定位没有改变;与Skp2~(WT/WT)小鼠相比,Skp2~(G72S/G72S)敲入小鼠中Skp2蛋白的下游底物如p27、cyclin E、p21、FoxO1和c-Myc等蛋白的稳定性增强;初步研究结果表明在细胞和分子水平起到关键调控作用的Skp2磷酸化修饰机制在生理水平上作用并不明显,这为Skp2在生理水平发挥功能的机制给出了新的参考,也为人源化小鼠的分子功能研究提供了新的思路和借鉴。可变剪接(alternative splicing,AS)可以从单个前体m RNA产生多种m RNA和蛋白质。可变剪接的主要类型有外显子跳跃、外显子互斥、5’可变剪接、3’可变剪接和内含子释放5种。由于它可以从单个基因位点产生具有不同甚至拮抗特性的产物,因此可变剪接极大地扩展了复杂基因组的编码能力。它是重要的生物学事件,影响到基因的各个关键细胞进程。可变剪接模式的改变对于正常发育和细胞分化至关重要,但这种改变也常常会导致包括癌症等在内的多种人类疾病的产生。CCAR1是一个核周磷酸化蛋白,是细胞生长和凋亡信号的调节子。前期研究发现CCAR1是SRSF5的剪接底物,可使得CCAR1产生全长(CCAR1 long)和15-22个外显子缺失(CCAR1 short)两种剪接转录本。细胞学实验初步表明敲低CCAR1L,细胞增殖变快,克隆形成能力变强;而敲低CCAR1S后细胞凋亡增多,克隆形成能力变慢。但两种剪接体发挥生物学功能的机制尚不清楚。IP-MS是目前鉴定蛋白质相互作用,发掘组织特异性,网络特异性分子功能族群的重要技术手段,可识别特定靶标的多个蛋白结合分子,得到的信息可用于预测分子在病理和生理过程中的新功能和角色。RNA-Seq用于分析不断变化的细胞转录组,揭示在给定时刻生物样品中RNA的存在和数量。它有助于查看其他基因剪接转录本,转录后修饰,基因融合,突变/SNPs以及基因表达随时间推移的变化,或不同组别或治疗中基因表达的差异。为了探究CCAR1L和CCAR1S在生理水平具有相互拮抗功能的机制,我们构造了两种亚型蛋白的单一过表达稳定株,利用IP-MS技术检测出CCAR1L和CCAR1S的相互作用蛋白图谱,通过GO分析发现CCAR1L的特异相互作用蛋白主要参与对细胞凋亡通路、细胞自噬、对热应激反应等的调控。相反,CCAR1S的特异性相互作用蛋白主要集中在对细胞增殖、细胞生长和细胞周期等的调控,进一步,我们对筛选出的CCAR1L/S特异性结合蛋白通过co-IP实验进行了真实性验证。发现CCAR1L特异性与RBM10、p14ARF、GSDMA等促凋亡蛋白结合;CCAR1S特异性与Cullin4B、hn RNPK等促增殖蛋白结合。同时,我们还在CCAR1L或CCAR1S敲除的细胞中进行了RNA测序(RNA-seq)以揭示CCAR1S和CCAR1L的不同作用。KEGG pathway分析发现当CCAR1L敲除时,差异表达基因(DEGs)主要存在于PI3K-Akt,c AMP和凋亡通路中,而当CCAR1S敲除时,DEGs主要存在于MAPK,TNF和Hippo通路中。我们利用RT-PCR技术验证了CCAR1L和CCAR1S DEGs的表达水平,发现在CCAR1L敲低细胞系中上调DEGs主要功能是STAT1、ATF3等促进细胞生长的基因;下调DEGs有TP53AIP1、Fox O1等促进细胞凋亡的基因;相反,在CCAR1S敲低细胞系中,上调DEGs主要是TGFBR3、TNFSF9等抑制细胞生长的基因。下调DEGs主要是PCNA、Myo9A等促进细胞增殖的基因,我们的研究首次揭示了CCAR1L和CCAR1S两种亚型控制细胞命运的不同功能的机制,加深了对可变剪接精细调控生命活动规律的了解。(本文来源于《军事科学院》期刊2018-05-31）
朱超[7]（2018）在《不同年龄CASQ2~(R33Q/R33Q)基因敲入鼠触发性心律失常离子和分子机制研究》一文中研究指出背景:遗传性心律失常(Inherited arrhythmogenic diseases,IADs)可导致心源性猝死(Sudden cardiac death,SCD),严重危害人类生命健康。其中儿茶酚胺敏感性室速(Catecholaminergic polymorphic ventricular tachycardia,CPVT)是一种少见但猝死风险较高的遗传性心律失常疾病,其无器质性心脏结构改变,常表现为尖端扭转型室速或多形型室速,导致患者晕厥,甚至猝死。未接受治疗情况下,随年龄增长至40岁其猝死率可高达30%-50%。目前研究发现,CPVT致病基因主要包括RYR2基因突变和CASQ2基因突变。CASQ2突变可影响肌浆网钙储功能,并与其它互作蛋白形成四聚体影响RYR2功能,导致细胞内钙离子稳态失衡,造成心肌细胞离子流紊乱,诱导恶性心律失常发生。前期我们发现不同年龄组CASQ2R33Q/R33Q基因敲入鼠迟后除极(Delayed afterdepolarization,DAD)、触发活动(Triggeractivity,TA)发生率不同。因此,对其导致恶性心律失常的离子、分子机制进行研究。目的:研究CASQ2R33Q/R33Q基因敲入鼠随年龄增加DAD、TA发生率增加的离子和分子机制,为探讨触发性心律失常和CPVT发生机制提供理论依据。方法:以3个月组、9个月组、12个月组CASQ2R33Q/R33Q基因敲入鼠及野生型小鼠为研究对象。通过HE、Masson染色观察心肌结构及纤维化改变,心脏超声评估心功能,荧光染色观察T管结构,透射电镜观察jSR与T管偶联结构改变。应用Langendorff灌流装置进行心室肌细胞急性分离,应用膜片钳技术记录单个心室肌细胞动作电位(AP)及ICa,L电流、Iti电流改变,观察DAD、TA的发生。采用共聚焦显微镜及IonOptix单细胞收缩与离子同步检测技术观察心室肌细胞钙离子转移、钙火花、钙波。通过Western Blotting技术分析钙调节相关蛋白表达。结果:(1)CASQ2R33Q/R33Q基因敲入鼠9个月组、12个月组较3个月组及同龄野生型对照组的DAD、TA发生率显着增加(P<0.05)。通过膜片钳技术在-60 mV电压下记录导致DAD的净内向Iti电流:9个月组(-2.1±0.2 pA/pF)、12个月组(-2.2±0.1 pA/pF)电流密度显着高于 3 个月组(-0.9±0.1 pA/pF)(P<0.05)。(2)CASQ2R33Q/R33Q基因敲入鼠各年龄组未见心肌纤维排列紊乱和纤维化,与同龄对照组相比心脏结构大小及心功能未见明显差异。(3)CASQ2R33QR33Q基因敲入鼠jSR与T管超微结构偶联异常,与3个月组及同龄对照组相比,12个月组jSR肿胀、断裂加重,电镜下观察致密颗粒物质显着减少。(4)ICa,L电流在CASQ2R33Q/R33Q基因敲入鼠9个月组(-12.1±0.5pA/pF)和12个月组(-11.9±0.4pA/pF)显着高于3个月组(-5.4±0.2pA/pF)(P<0.01),ICa,L通道失活后恢复速率加快,且Cav1.2蛋白表达显着增加。(5)CASQ2R33Q/R33Q基因敲入鼠9个月组、12个月组较3个月组及同龄对照组的钙释放幅值显着降低、钙释放延迟时间明显增加,给予ISO刺激后,自发性钙释放、钙火花及钙波的发生率增加显着。(6)随年龄增加,CASQ2R33Q/R33Q基因敲入鼠CASQ2蛋白表达量显着下调,CaMKII及P-RYR2蛋白表达量显着增加,而钙循环相关蛋白RYR2、SERCA2a及NCX1.1蛋白表达未见显着差异。结论:(1)随年龄增加,CASQ2R33Q/R33Q基因突变导致DAD、TA发生率显着增加。(2)CASQ2R33Q/R33Q基因突变未影响心脏结构和功能,但对jSR与T管偶联结构损伤加重,为钙循环紊乱提供了超微结构基础。(3)随年龄增加,CASQ2R33Q/R33Q基因突变导致CASQ2蛋白表达降低,促进RYR2磷酸化。(4)随年龄增加,CASQ2R33Q/R33Q基因突变导致ICa,L通道失活后恢复时间加快及Cav1.2蛋白表达增加,ICa,L电流升高。(5)CASQ2R33Q/R33Q基因突变导致肌浆网钙释放紊乱,随年龄增加自发性钙释放、钙火花及钙波显着增加,钙回吸收延迟,胞内钙离子超载。上述多种因素导致Iti电流,可能是致恶性心律失常发生的离子流和分子机制。(本文来源于《中国人民解放军医学院》期刊2018-05-23）
孙晓琳[8]（2018）在《利用基因敲入小鼠模型研究LPL致病突变引起代谢异常的分子机制》一文中研究指出目的:本课题组前期发现了一个LPL突变基因,拟在动物水平上研究该突变基因型和表型之间的关系,并对其发病的相关分子机制进行深入的研究,为突变基因造成的疾病提供精准的诊断,也为靶向基因治疗药物开发提供有力的依据。方法:提取小鼠的组织进行DNA检测,通过一代测序进行基因型的鉴定。区分野生型和突变型的小鼠,分组进行喂养。通过取小鼠的血清,检测小鼠基础糖脂代谢的指标。通过IPGTT实验观察小鼠糖耐量的表现,通过western blot检测突变对心肌和肝脏组织中bip和Akt的表达的影响,通过透射电镜观察突变对心肌和骨骼肌超微结构的影响。结果:通过一代测序鉴定小鼠的基因型,得到野生型和突变型的小鼠。与野生型小鼠相比,突变组小鼠的血清脂代谢指标无明显改变,而糖代谢指标出现了差异。突变组的血清胰岛素水平明显升高,IPGTT实验突变组的小鼠血糖升高更快,峰值也更高。同时我们通过油红o染色发现肝脏出现明显的脂质沉积。通过western blot发现,与野生型的小鼠相比,在心肌突变的小鼠内质网应激的标志性蛋白bip明显升高,而在肝脏中两组小鼠的bip表达无明显的差异,表明突变组发生了内质网应激。另外,在心肌组织中,与对照组小鼠相比突变组小鼠Akt的磷酸化水平明显降低,而总的Akt水平两组间无明显的差异。表明有胰岛素抵抗的发生。电镜下,心肌和骨骼肌出现线粒体的改变。结论:我们利用LPL致病突变基因敲入模型发现LPL C310R突变导致显着糖耐量异常,同时发现肝脏发生明显脂质沉积,这可能是导致糖耐量异常的主要原因。同时我们发现LPL突变引起心肌内质网应激和胰岛素抵抗,加剧心肌代谢异常LPL突变可能产生蛋白毒性,从而引起内质网应激和胰岛素抵抗,进而影响整个机体糖脂代谢紊乱。(本文来源于《青岛大学》期刊2018-05-17）
[9]（2018）在《亨廷顿舞蹈病基因敲入猪培育成功》一文中研究指出我国科学家领衔的国际研究团队经过4年努力,首次利用基因编辑技术CRISPR/Cas9和体细胞核移植技术(SCNT),成功培育出世界首例亨廷顿舞蹈病基因敲入猪,精准地模拟出了人类神经退行性疾病。"亨廷顿舞蹈病"是由单基因突变导致的神经退行性疾病,是一个理想的疾病模式,也是研究多基因突变病症的基础。老年痴呆、帕金森病、肌萎缩侧索硬化症等都属于神经退行性疾病。这些疾病由于缺乏合适的动物模型进行药物筛(本文来源于《科学24小时》期刊2018年05期）
朱基彦[10]（2018）在《利用CRISPR/Cas9系统介导的基因敲入构建R778L类型肝豆状核变性疾病小鼠模型》一文中研究指出肝豆状核变性是一类罕见的常染色体隐性遗传的铜代谢紊乱疾病,致病基因是ATP7B。由于ATP7B基因发生碱基突变、插入或者删除引起ATP7B蛋白功能受损甚至失活,进而导致机体铜离子淤积,引发肝脏损伤和神经系统受损。在亚洲地区,最普遍的类型是R778L,但是对于该类突变的发病机制尚不清楚,建立针对R778L这一类型的动物模型是十分必要的。CRISPR/Cas9为代表的第叁代基因编辑技术已经广泛应用于各项生命研究中,其中一项重要的应用就是构建疾病模型。CRISPR/Cas9介导的基因敲如为我们构建针对R778L突变的小鼠模型提供了可能。首先,我们通过BLAST比对了人和小鼠中ATP7B基因和蛋白的序列,发现二者均高度保守,这在进化的角度提供了利用小鼠作为模式动物进行肝豆状核变性建模的理论支撑。其中,人类ATP7B基因R778L的突变对应小鼠的R780L突变。其次,我们通过CRISPR/Cas9系统进行小鼠受精卵显微注射,成功获得携带目的点突变的小鼠。经过交配纯化背景,我们获得纯合的R780L突变小鼠。紧接着,我们从病理和生理两个角度,检测R780L小鼠是否能够模拟肝豆状核变性的症状。实验结果证明,R780L小鼠存在明显的肝脏铜离子淤积以及血清ALT、AST的升高。最后,我们通过Deep sequence检测了潜在脱靶位点的情况,未发现有可检测出的脱靶效应。综合看来,我们利用CRISPR/Cas9介导的基因敲入成功构建了针对人R778L类型的R780L突变小鼠。这为R778L类型肝豆状核变性后续发病机制的阐明以及基因治疗均提供了合适的载体。当然,我们的研究还处于初步阶段,关于R778L具体的分子探讨还未阐明。值得提出的是,之前针对肝豆状核变性的动物模型大多是敲除模型,这对于肝豆状核变性这类高度异质性的疾病来说是不合适的,我们期望通过我们的工作呼吁更多的针对特定突变类型来建立精确的动物模型,这样才有可能解决肝豆状核变性基因型与表型不匹配这一领域难题。(本文来源于《北京协和医学院》期刊2018-05-01）
基因敲入论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
科技日报北京4月16日电 （记者张梦然）据开放获取期刊《基因组医学》16日公开的一项研究，美国科学家报告了一种建立癌症小鼠模型的新方法——利用有“基因魔剪”之称的CRISPR/Cas9系统快速将癌症相关基因敲入小鼠的DNA中。该方法以前所未有的高效，满足
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
基因敲入论文参考文献
[1].姚璇,Meiling,Zhang,Xing,Wang,Wenqin,Ying,Xinde,Hu.Tild-CRISPR可在小鼠和人类细胞中实现高效、精确的基因敲入[J].科学新闻.2019
[2].张梦然.“基因魔剪”让癌症建模更准确高效[N].科技日报.2019
[3].李岱素,潘慧.国际权威学术期刊《细胞》在线发表生物学领域的一项重大成果:世界首例神经疾病基因敲入猪在广东诞生[J].广东科技.2019
[4].张雪梅,高旭,马宁.基于CRISPR/Cas9技术的基因敲入/敲除策略[J].中国生物化学与分子生物学报.2019
[5].邹征伟,赖兴强,李伟强.基于episomalCRISPR/Cas9载体的基因敲入方法[J].中山大学学报(医学版).2018
[6].黄轻飏.Skp2~(G72S/G72S)基因敲入小鼠模型的建立及表型分析[D].军事科学院.2018
[7].朱超.不同年龄CASQ2~(R33Q/R33Q)基因敲入鼠触发性心律失常离子和分子机制研究[D].中国人民解放军医学院.2018
[8].孙晓琳.利用基因敲入小鼠模型研究LPL致病突变引起代谢异常的分子机制[D].青岛大学.2018
[9]..亨廷顿舞蹈病基因敲入猪培育成功[J].科学24小时.2018
[10].朱基彦.利用CRISPR/Cas9系统介导的基因敲入构建R778L类型肝豆状核变性疾病小鼠模型[D].北京协和医学院.2018
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