转录辅激活因子和乙酰基转移酶p300在心脏成纤维细胞衰老相关纤维化中的作用

论文摘要

目的:探讨转录辅激活因子和乙酰基转移酶p300在心脏成纤维细胞（CFs）衰老相关纤维化中的作用。方法:不同月龄的C57BL/6小鼠处死后取左心房组织或原代分离的CFs,Western blot检测p300蛋白,纤维化相关因子I型胶原蛋白α1链（Col1A1）、基质金属蛋白酶2（MMP-2）和转化生长因子β（TGF-β）,以及衰老相关蛋白p53和p21的表达。将Cre酶转染来自p300+/+和p300flox/+小鼠的原代培养CFs,筛选建立稳定敲除p300的CFs,PCR检测细胞基因型,Western blot检测沉默效率;衰老相关β-半乳糖苷酶（SA-β-Gal）染色观察敲除p300对CFs衰老率的影响,细胞计数观察细胞增殖能力。结果:随着月龄增加,小鼠左心房组织p300、Col1A1、MMP-2、TGF-β、p53和p21表达增加（P<0.05）。随着小鼠CFs传代代数增加,SA-β-G染色显示细胞衰老率增加,同时p300、Col1A1、MMP-2、TGF-β、p53和p21蛋白表达明显增加（P<0.05）。与野生型组相比,敲除p300的CFs随着代数的增加,未见衰老细胞,且细胞增殖能力明显强于对照组（P<0.05）。结论:心房组织中,p300可能参与CFs衰老相关纤维化。

论文目录

• 材 料 和 方 法
•   1 动物
•   2 主要试剂
•   3 主要方法
•     3.1 细胞培养、质粒转染和克隆获取
•     3.2 PCR鉴定细胞基因型
•     3.3 Western blot实验
•     3.4 SA-β-Gal染色
•     3.5 活细胞计数
•   4 统计学处理
• 结 果
•   1 不同月龄小鼠心脏组织p300及衰老和纤维化相关蛋白表达
•   2 不同代数C57BL/6小鼠心脏成纤维细胞中p300、衰老相关蛋白及纤维化相关蛋白的表达
•   3 稳定敲除p300的心脏成纤维细胞株的建立
•   4 p300敲除小鼠心脏成纤维细胞的衰老率明显低于对照组
•   5 p300敲除小鼠心脏成纤维细胞的生长速度明显快于对照组
• 讨 论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 高小燕,李昕,韦鉴钦,Nanette Hahr BISHOPRIC,王钊煜,周慧珊,饶芳,邓春玉

关键词: 蛋白,心脏成纤维细胞,细胞衰老,纤维化

来源: 中国病理生理杂志 2019年12期

年度: 2019

分类: 医药卫生科技

专业: 心血管系统疾病

单位: 华南理工大学医学院,广东省心血管病研究所心内科广东省人民医院医学研究部广东省医学科学院,迈阿密大学米勒医学院分子心脏病学及分子和细胞药理学系

基金: 国家自然科学基金资助项目(No.81670314,No.81870254),广州市科技计划项目(No.201804010059)

分类号: R541.75

页码: 2113-2120

总页数: 8

文件大小: 2541K

下载量: 145