猪繁殖与呼吸综合征病毒Nsp2蛋白纳米抗体的筛选及其鉴定

论文摘要

为制备猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）非结构蛋白2 （Nsp2）的纳米抗体,本研究将截短表达的Nsp2重组蛋白免疫骆驼后分离骆驼外周血淋巴细胞,利用RT-PCR扩增其VHH基因,将VHH基因插入p CANTAB 5E噬菌体载体,构建双峰驼重链抗体可变区文库。利用噬菌体展示技术经过3轮淘选,共筛选得到44株Nsp2特异性纳米抗体;经ELISA检测,结果显示44株Nsp2特异性纳米抗体均能与Nsp2蛋白特异性反应。本研究首次筛选到PRRSV Nsp2特异性纳米抗体,为Nsp2蛋白的相关研究提供了必要的研究工具,同时为开发新型抗PRRSV药物奠定一定的基础。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 质粒、菌株和实验动物
•   1.2 主要试剂
•   1.3 P RRS V Ns p2重组蛋白在大肠杆菌中的表达及纯化
•   1.4 双峰驼免疫及Ns p2抗体效价测定
•   1.5 VHH噬菌体抗体文库的构建
•   1.6 Ns p2特异性重组噬菌体的淘选和富集
•   1.7 重组纳米抗体的诱导表达及ELIS A检测
•     1.7.1 重组纳米抗体的诱导表达
•     1.7.2 可溶性重组纳米抗体的ELISA检测
•     1.7.3 Nsp2特异性纳米抗体的测序分析
•   1.8 Ns p2纳米抗体的特异性试验
• 2 结果
•   2.1 Ns p2重组蛋白在大肠杆菌中的表达纯化与抗原性检测
•   2.2 VHH噬菌体抗体文库的构建
•   2.3 Ns p2特异性纳米抗体的淘选和富集
•   2.4 Ns p2特异性纳米抗体的诱导表达及测序鉴定结果
•   2.5 Ns p2纳米抗体的特异性试验结果
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 宋欢,孙明霞,尹坤,温永俊,刘永刚,蔡雪辉

关键词: 猪繁殖与呼吸综合征病毒,纳米抗体,非结构蛋白

来源: 中国预防兽医学报 2019年04期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所,中国农业科学院特产研究所,内蒙古农业大学

基金: 国家重点研发计划(2017YFD0500604)

分类号: S852.651

页码: 385-390

总页数: 6

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