Hsp70在小鼠体外早期胚胎发育中的表达

论文摘要

为探究热休克蛋白Hsp70在小鼠体外早期胚胎发育中的表达情况以及Hsp70在胚胎发育中的作用机理,本试验采集8～12周龄SPF小白鼠的卵巢,在体式显微镜下采集卵母细胞并培养成熟,用0. 1%透明质酸酶消化卵丘卵母细胞复合体后,放入SrCl2+CB液中进行5 h（37℃）的孤雌激活,然后移入G1培养液进行培养。取培养至2细胞期、4～8细胞期、9～16细胞期、桑椹期和囊胚期的小鼠胚胎提取总RNA,通过实时荧光定量PCR检测Hsp70在各个时期的表达情况,免疫荧光染色检测其在各个时期小鼠胚胎的表达定位。实时荧光定量PCR结果表明,Hsp70在小鼠体外早期胚胎的2细胞期、4～8细胞期、9～16细胞期、桑椹期、囊胚期都有表达,但在2细胞期胚胎和4～8细胞期胚胎的相对表达水平较高,在9～16细胞期胚胎、桑椹期胚胎和囊胚期胚胎的相对表达水平较低。免疫荧光染色结果显示,Hsp70定位于各个时期胚胎的细胞核和细胞质中,但9～16细胞期以后Hsp70主要定位于细胞核中。综上所述,Hsp70对小鼠体外早期胚胎的发育具有潜在的调控作用,这为进一步明确热休克蛋白Hsp70在胚胎抗热应激中的作用及机理研究提供了理论依据。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 材料
•   1.2 方法
•     1.2.1 超排及处理
•     1.2.2 小鼠卵母细胞的采集及体外成熟培养
•     1.2.3 小鼠卵母细胞的孤雌激活及其胚胎的发育培养
•     1.2.4 引物设计
•     1.2.5 小鼠早期胚胎RNA的提取和反转录
•     1.2.6 小鼠Hsp70基因在不同时期孤雌激活胚胎中的扩增
•     1.2.7 Real-time Q-PCR测定Hsp70基因在不同时期孤雌激活胚胎中的表达情况
•     1.2.8 间接免疫荧光染色检测Hsp70在不同时期孤雌激活胚胎中的分布
•   1.3 数据统计与分析
• 2 结果与分析
•   2.1 小鼠胚胎体外培养结果
•   2.2 小鼠Hsp70基因在不同时期孤雌激活胚胎中的扩增
•   2.3 Real-time Q-PCR测定Hsp70基因在不同时期孤雌激活胚胎中的表达情况
•   2.4 间接免疫荧光染色检测Hsp70在不同时期孤雌激活胚胎中的分布
• 3 讨论
• 4 结论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 仇晓飞,何翃闳,张同享,韩小红,刘敏清,潘阳阳,余四九,徐庚全

关键词: 小鼠,早期胚胎,表达

来源: 核农学报 2019年09期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学

单位: 甘肃农业大学动物医学院/甘肃省牛羊胚胎工程技术研究中心

基金: 国家重点研发计划(2018YFD0502303),甘肃省农牧厅项目(GCLM2016007),甘肃农业大学盛彤笙科技创新基金资助(GSAU-STS-1614)

分类号: Q78

页码: 1717-1723

总页数: 7

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