导读:本文包含了蛋白偶联受体激酶论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:受体,激酶,蛋白,肿瘤,衰老,细胞,巨噬细胞。
蛋白偶联受体激酶论文文献综述
付治卿,高文谦,张方圆,谭国娟,韩春光[1]（2019）在《G蛋白偶联受体激酶2与血清可溶性ST2对老年心肌梗死后心力衰竭预警的意义》一文中研究指出目的分析75岁以上老年急性非ST段抬高型心肌梗死(NSTEMI)患者外周血淋巴细胞G蛋白偶联受体激酶2(GRK2)与血清可溶性ST2(sST2)水平在心力衰竭(心衰)预警中的意义。方法选取75岁以上老年男性急性NSTEMI患者80例作为急性心肌梗死(AMI)组,平均年龄(85.4±3.2)岁;选取同期体检的健康老年男性30例作为对照组,平均年龄(84.8±2.9)岁。测定2组患者GRK2、血清sST2水平,并行超声心动图检测LVEF、左心室收缩末期容积(LVESV)、左心室舒张末期容积(LVEDV)。AMI组患者在发病后3、6、12、24个月时进行随访。结果AMI组患者GRK2的表达、血清sST2水平均高于对照组[3.60 vs 0.72,(30.63±1.36)μg/L vs (26.87±0.55)μg/L,P<0.01],LVEF低于对照组[(50.87±4.58)%vs (55.15±5.87)%,P<0.01]。AMI组GRK2在发病后3、6、12、24个月随访时逐渐增高(P<0.05,P<0.01),sST2水平在发病后6、12、24个月随访时显着增高(P<0.05),LVEF在发病后6、12、24个月随访时显着降低(P<0.01)。结论 75岁以上老年男性急性NSTEMI患者GRK2对AMI后心衰的预警作用优于sST2。(本文来源于《中华老年心脑血管病杂志》期刊2019年08期）
李瑞瑞[2]（2019）在《G蛋白偶联受体激酶4（GRK4）诱导人鼻咽癌CNE2细胞衰老及其抗肿瘤研究》一文中研究指出目的:探讨G蛋白偶联受体激酶4(G protein-coupled receptor kinase 4,GRK4)诱导人鼻咽癌CNE2细胞衰老的机制及其抗肿瘤效应。方法:1.将pEGFP-GRK4质粒转染人鼻咽癌CNE2细胞,24h后流式细胞仪分选CNE2/GRK4(-)和CNE2/GRK4(+)细胞群,Western blot和免疫荧光染色验证分选后细胞GRK4的表达情况;MTT法和流式细胞术检测分选后细胞的增殖和周期分布情况;β半乳糖苷酶染色法验证分选后细胞的衰老表型;与CNE2/GRK4(-)细胞相比,实时荧光定量PCR方法检测分选后CNE2/GRK4(+)细胞的77个衰老相关基因的差异表达情况,Western blot验证差异表达基因及其它与细胞生长相关的分子表达情况。对分选后细胞进行RNA-Seq测序。2.利用Tet-On 3G诱导表达系统建立诱导性表达GRK4基因的CNE2细胞株,即GRK4-Tet-On 3G/CNE2稳定细胞系,不同浓度的顺铂处理稳定细胞系细胞,流式细胞术检测细胞周期分布。SPSS 21.0进行统计学分析。结果:1.流式细胞仪分选得到CNE2/GRK4(-)和CNE2/GRK4(+)细胞。GRK4过表达能显着抑制CNE2细胞增殖,诱导细胞G_0/G_1期阻滞,并伴随细胞衰老表型的出现;实时荧光定量PCR检测结果显示,CNE2/GRK4(+)细胞中出现12个衰老相关基因的异常表达(P<0.05/0.01),其中CDK6、CITED2、GADD45A、p15、p21、p57、RBL1、TERT、THBS1和TP63 10个衰老相关基因的mRNA水平显着升高(P<0.05);PLAU、RBL2这2个基因的mRNA水平显着降低。Western blot检测蛋白水平表达情况,CNE2/GRK4(+)细胞中SIRT1、Cyclin D2及Cyclin D3水平降低,而p21及CDK6水平升高,未检测到p53和磷酸化的p38 MAPK。mRNA水平有1894个差异表达基因,进行GO分析和KEGG通路富集分析。2.Western blot鉴定成功建立GRK4-Tet-On 3G/CNE2稳定细胞系,以Dox诱导GRK4表达,顺铂处理条件下,Dox诱导组的细胞出现S期阻滞,伴随大量的凋亡细胞(Pre-G_1期)。结论:本研究首次证实GRK4具有抑制肿瘤细胞增殖、诱导细胞周期阻滞及细胞衰老的生物学效应,其分子机制可能是与p53非依赖、p38非依赖等有关的复杂的信号通路有关,并且初步证实GRK4能够增强DDP的抗肿瘤作用。构建GRK4-Tet-On3G/CNE2稳定细胞系和完成转录组测序为深入探讨GRK4诱导肿瘤细胞衰老和与之相关的信号通路提供了有价值的信息。(本文来源于《桂林医学院》期刊2019-06-01）
杨洋[3]（2019）在《G蛋白偶联受体激酶5通过NF-κB信号通路促进胶质瘤细胞生物学活性》一文中研究指出背景胶质瘤约占颅内原发性恶性肿瘤的80%,其中胶质母细胞瘤(Glioblastoma multiforme,GBM)的恶性度最高。尽管近些年来化疗药物的研发取得重大进展。胶质母细胞瘤的治疗方案仍以手术切除联合放化疗为主。由于胶质母细胞瘤具有恶性侵袭、快速增殖和血管增生等特点,胶质母细胞瘤患者的中位生存期只有14个月左右。G蛋白偶联受体(G protein-coupled receptor,GPCR)是种类最多的一类受体超家族,以6次跨膜螺旋结构为特征,介导多种配体,与多种肿瘤的发生发展密切相关。G蛋白偶联受体激酶(G-protein-coupled receptor kinases,GRKs)属于丝氨酸/苏氨酸激酶家族,通过磷酸化作用结合并激活G蛋白偶联受体,导致其脱敏。根据其序列同源性,人们将7个GRK亚型(GRK1-7)分为3组。GRK1亚家族包括GRK1和GRK7,GRK2亚家族,包括GRK2和GRK3;以及GRK4亚家族包括GRK4,GRK5和GRK6。GRK1和GRK7主要分布于视网膜,介导光感传导。GRK2、3、5、6分布广泛,在心、脑、肺和肾等组织均有表达。GRK4分布较局限,主要存在于睾丸,可使精子表面GPCR磷酸化。在脑组织部分区域以及肾脏也有少量的GRK4表达。研究显示GRK家族成员的表达和活性在多种病理过程中发生了改变。这其中,GRK5是被研究最多的成员之一。GRK5既可通过使GPCR或非GPCR受体(PDGFR、PGE2R、TSH)脱敏的机制抑制肿瘤进展,又可以通过作用于非受体底物(NPM1、AUKA、p53)促进肿瘤生长。GRK5在不同的组织分布及亚细胞定位可能表现出不同的激酶活性。值得注意的是,在包括胶质瘤在内的许多肿瘤中,都存在10号染色体q24区域的染色体易位,提示该区域基因改变可能与肿瘤发生进展有关。由于GRK5恰好位于10号染色体的q24区域上,提示GRK5表达变化可能与胶质瘤的发生发展有关。但目前GRK5在胶质瘤方面的研究很少。核转录因子-κB家族(nuclear factor-kappa B,NF-κB)的各转录因子在人体各组织内广泛表达,可以调节肿瘤的细胞进展,细胞增殖和细胞凋亡。最近有研究显示,NF-κB可以调控胶质母细胞瘤的分泌。抑制NF-κB通路可导致IL8,IL6,CCL2,IL-1β和CXCL14等细胞因子/趋化因子的下调,进而抑制与他们有关的通路。GRK5是NF-κB信号通路的重要调节基因,可以增强通路的活性。另一方面,p50和p65反过来也可以直接与细胞核中的GRK5 DNA相结合,从而上调GRK5水平。那么GRK5与NF-κB信号通路的相互作用在胶质瘤中是否存在?对胶质瘤细胞生物学活性是否产生影响?目前尚未发现相关报道。这也促使我们去探究GRK5表达与NF-κB信号通路在胶质瘤中的作用。本研究首先从胶质瘤细胞系和临床组织标本中GRK5及肿瘤相关指标的表达、分布特点和亚细胞定位入手,发现GRK5的“癌基因”属性;然后建立GRK5 knockdown稳转细胞系,通过体内外实验研究GRK5表达下调对胶质瘤细胞生物学活性的影响;最后探讨GRK5-NF-κB信号通路在胶质瘤中的生物学功能及调控机制。以期通过上述研究获得对GRK5在胶质瘤中的生物学功能和作用机理的新认识,为揭示胶质瘤恶性进展的分子机制提供新思路,以及针对GRK5-NF-KB信号通路的胶质瘤早期诊断和靶向药物研发提供新目标。目的第一部分:GRK5在胶质瘤中的表达与定位1.不同病理级别胶质瘤组织中GRK5的表达情况;2.GRK5在胶质瘤组织中的亚细胞定位及分布特点;3.GRK5与胶质瘤干细胞的关系。第二部分:胶质瘤中GRK5的功能研究及GRK5-NF-KB信号通路的内在关系1.GRK5在胶质瘤细胞系中的表达及GRK5 konckdown(简称GRK5-kd)稳转细胞系的建立;2.体内外实验研究GRK5对胶质瘤细胞生物学活性(包括增殖、迁移、侵袭和凋亡等)的影响;3.研究GRK5与NF-κB信号通路在胶质瘤中的相互关系,以及对NF-κB下游产物的影响。方法第一部分:GRK5在胶质瘤中的表达与定位1.通过免疫印迹、real-time PCR和免疫组化检测10例正常脑组织和1 10例不同病理级别的胶质瘤组织中GRK5的表达水平的差异;2.通过免疫组化、免疫荧光观察分析不同级别胶质瘤组织中GRK5的亚细胞定位、分布特点以及与肿瘤血管的关系;3.通过免疫荧光双重染色观察GRK5与肿瘤干细胞标记物CD133的共表达。第二部分:胶质瘤中GRK5的功能研究及GRK5-NF-κB信号通路的内在关系1.通过免疫印迹和real-time PCR检测U87、U251和T98G叁种细胞系中GRK5表达水平的差异,筛选出适宜后续功能实验的最佳细胞系。2.建立慢病毒包装的GRK5-kd和GRK5-NC的稳转细胞系,利用CCK-8法、划痕实验和Matrigel侵袭实验和流式细胞仪等方法,用以检测各组细胞的增殖、迁移,侵袭和凋亡等细胞生物学活性的变化,通过建立裸鼠移植瘤模型研究体内环境下GRK5表达变化对胶质瘤增殖的影响。3.利用GRK5 knockdown和NF-κB刺激剂PMA(佛波醇酯)的介入,通过免疫印迹法检测GRK5与NF-κB相关通路蛋白的内在关系。再通过ELISA试剂盒定量分析GRK5下调对NF-κB通路下游细胞因子/趋化因子的影响。结果第一部分:GRK5在胶质瘤中的表达与定位1.qRT-PCR数据显示,与正常脑组织相比,GRK5在胶质瘤组织中异常增高,GRK5在高级别胶质瘤(WHOⅢ/Ⅳ)中的表达水平显着高于低级别胶质瘤(WHO Ⅱ)。免疫印迹结果显示,与正常脑组织相比,GRK5在不同级别胶质瘤组织中蛋白表达水平升高。级别越高的胶质瘤样本中GRK5的表达更高。2.免疫组化显示GRK5主要集中在细胞胞浆表达,胞核内未见明显染色。其胞浆富集程度在低级别胶质瘤中相对较低,染色较浅,而在高级别胶质瘤胞浆中则显着深染。进一步分析后发现GRK5的表达与病理级别呈正相关性。通过将GRK5和Ki-67的表达分析比较后发现,在胶质瘤组织中,GRK5和Ki-67的表达亦呈正相关性。3.通过观察分析胶质瘤中GRK5和血管标记物CD34的表达后发现,GRK5阳性表达常常定位于肿瘤血管附近,特别是在高级别胶质瘤组织中该现象尤为明显。相关性研究显示胶质瘤样本中GRK5和CD34的表达呈正相关。4..免疫荧光双染结果显示,GRK5和肿瘤干细胞标记物CD133在WHO Ⅲ和WHO ⅣⅣ胶质瘤中普遍存在共表达,大多数CD133阳性表达的细胞可同时观察到GRK5阳性表达。第二部分:胶质瘤中GRK5的功能研究及GRK5-NF-κB信号通路的内在关系1.在胶质瘤细胞系U87、U251和T98G中,U251细胞系中的表达水平相对最高。因此我们选择U251细胞系构建慢病毒包装的GRK5 knockdown(实验组)和GRK5-NC(空质粒对照组)稳转细胞系。2.通过Transwell实验发现GRK5下调导致胶质瘤细胞穿膜能力变差;划痕实验的结果则显示GRK5下调后胶质瘤细胞迁移速度减慢。3.通过CCK-8实验检测在体外环境下组间胶质瘤细胞增殖能力的变化。结果显示,GRK5下调后肿瘤细胞的增殖能力显着降低。为进一步检测GRK5下调对模拟体内环境下胶质瘤细胞增殖的影响,我们建立了裸鼠皮下移植瘤模型。皮下注射胶质瘤细胞后,每只小鼠均形成了固态的皮下移植瘤。移植瘤生长曲线显示GRK5下调后肿瘤在体内的生长速度减慢。GRK5下调的皮下肿瘤与阴性对照组和空白对照组的皮下肿瘤相比,尺寸更小,重量更轻。提示下调GRK5可抑制胶质瘤细胞在体内外的增殖能力。4.通过流式细胞术分析各组细胞中的凋亡细胞数的变化。Annexin V-PE/7-AAD双染U251细胞,流式细胞仪检测磷脂酰丝氨酸的外化。分析结果显示:GRK5-KD组的胶质瘤细胞凋亡率达(42.35±3.56)%,明显多于阴性对照组(4.45±0.51)%和空白对照组(2.68±0.3 1)%。Bcl-2具有抑制细胞凋亡的作用,Bcl-2家族在已知的许多凋亡通路中都发挥重要作用,通过免疫印迹实验检测分析各组胶质瘤细胞发现,GRK5下调可抑制胶质瘤细胞中Bcl-2的蛋白水平。上述结果表明GRK5在胶质瘤中具有抑制肿瘤细胞凋亡的作用。5.利用GRK5 knockdown和NF-κB刺激剂PMA,通过免疫印迹法检测GRK5与NF-κB通路在胶质瘤中的相互关系。研究结果显示,PMA处理24h之后,磷酸化IκBα(pIκBα)、p50和p65蛋白表达上调,GRK5蛋白水平亦随之升高,提示在胶质瘤细胞中,NF-κB通路蛋白的活化可上调GRK5的蛋白水平。进一步研究发现,GRK5的下调可抑制胶质瘤细胞中pIκBα、p65和p50的表达;重新加入NF-κB刺激剂PMA后,被抑制的pIκBα、p50和p65表达被上调,此时预先knockdown的GRK5蛋白水平也随之升高。该部分研究表明GRK5和NF-κB信号通路在胶质瘤细胞中存在协同促进作用。6.为了进一步分析GRK5下调对NF-κB下游的细胞因子/趋化因子的影响,我们挑选了 CCL2,IL6和IL8作为研究对象。利用ELISA定量分析了 GRK5下调后胶质母细胞瘤细胞基质中叁种因子的表达变化。数据分析结果显示,GRK5下调后,NF-κB下游的CCL2,IL6和IL8的表达水平亦随之降低。而加入NF-κB刺激剂PMA可重新上调CCL2,IL6和IL8的蛋白水平。结论第一部分:GRK5在胶质瘤中的表达与定位1.GRK5在胶质瘤组织中异常高表达,并且与胶质瘤病理级别呈正相关性。2.GRK5可能与胶质瘤的血管生成以及维持胶质瘤干细胞的致瘤潜能有关。第二部分:胶质瘤中GRK5的功能研究及GRK5-NF-KB信号通路的内在关系1.下调GRK5表达可抑制胶质瘤细胞增殖、迁移和侵袭能力,并诱导细胞凋亡增加。GRK5在胶质瘤的发病及进展中可能发挥癌基因的作用。2.GRK5与经典的肿瘤信号通路NF-κB在胶质瘤中存在协同促进作用。3.下调GRK5可抑制NF-κB通路的下游细胞因子/趋化因子的表达水平。(本文来源于《山东大学》期刊2019-05-23）
李瑞瑞,蒋晓山[4]（2019）在《非视紫质G蛋白偶联受体激酶对肿瘤的调控作用》一文中研究指出G蛋白偶联受体激酶(G protein-coupled receptor kinases, GRKs)通过特异性地磷酸化活化状态的G蛋白偶联受体(G protein-coupled receptors, GPCRs)终止GPCR信号转导、以及磷酸化非GPCR等参与广泛细胞生理和病理活动。近些年有关GRKs与肿瘤发生和演进的关系研究取得了长足进展,但详细的分子机制有待进一步揭示。本文讨论非视紫质GRKs对多种肿瘤细胞的不同调控作用,以期为深入开展该领域研究提供新思路。(本文来源于《肿瘤防治研究》期刊2019年04期）
杨雪枝[5]（2019）在《G蛋白偶联受体激酶2介导PGE2-EP4-cAMP-CREB信号转导异常参与CIA小鼠巨噬细胞极化及CP-25的作用》一文中研究指出类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)是一种以滑膜炎和软骨破坏为主要病理特征的系统性的自身免疫疾病。RA发病机制尚不明确,但已有大量的研究表明,巨噬细胞参与了RA的发生和发展。RA患者滑膜中大量浸润的巨噬细胞,被视为是RA的早期标志,且与疾病活动度相关。根据表型和功能,巨噬细胞主要分为M1型促炎型巨噬细胞和M2型抗炎型巨噬细胞。正常生理状态下,巨噬细胞的表型处于动态平衡。但是在RA患者以及关节炎动物模型中,多种因素会打破这种平衡,引起M1/M2型巨噬细胞数量和比例的失衡,导致M1型巨噬细胞不断增多,从而加剧炎症反应。然而,目前临床上并没有特定针对巨噬细胞的药物。文献报道,前列腺素E2(prostaglandin E2,PGE2)能够通过c AMP-CREB/CRTC通路,激活Krüppel样因子4(Krüppel-like factor4,KLF4)转录因子,促进M2型巨噬细胞极化。课题组前期研究发现,PGE2水平在佐剂性关节炎(adjuvant-induced arthritis,AA)大鼠血清中升高,在AA滑膜细胞中,PGE2不断刺激下,G蛋白偶联受体激酶2(G protein-coupled receptor kinase 2,GRK2)转膜增加,EP4受体过度脱敏,环磷酸腺苷(cyclic adenosine monophosphate,c AMP)水平降低。GRK2是G蛋白偶联受体(G protein-coupled receptors,GPCRs)的负性调节剂,可特异性地活化GPCRs,使其磷酸化,从而介导受体脱敏,但PGE2介导的巨噬细胞上的EP受体过度脱敏,尤其是EP4受体的过度脱敏尚未见报道。RA患者以及关节炎动物模型中,M1/M2型巨噬细胞的比例失衡是否与巨噬细胞中EP受体的过度脱敏有关,也尚未见报道。芍药苷-6-氧-苯磺酸酯(CP-25),是我们所研发的一种具有抗炎免疫调节作用的新型活性化合物,能够改善AA大鼠/胶原诱导性关节炎(collagen-inducedarthritis,CIA)小鼠模型临床表现,调节巨噬细胞细胞因子平衡。前期研究发现,CP-25能够通过抑制AA大鼠滑膜细胞中的GRK2转膜,恢复EP4的膜表达,升高c AMP水平,从而抑制AA大鼠滑膜细胞的异常增殖。但CP-25对巨噬细胞M1/M2比例的失衡是否具有作用,作用机制如何,尚不清楚。目的:观察PGE2及其信号对CIA小鼠巨噬细胞和Raw264.7细胞极化的影响及CP-25对巨噬细胞极化的作用和作用机制,为揭示PGE2及其信号转导参与RA中巨噬细胞M1/M2比例失衡以及GRK2作为CP-25的作用靶点调控巨噬细胞极化提供实验依据。方法:用鸡Ⅱ型胶原和完全弗氏佐剂制备CIA小鼠炎症模型,原代培养CIA小鼠腹腔巨噬细胞(Peritoneal macrophage,PM)和骨髓源巨噬细胞(bone marrow derived macrophage,BMM);用Western blot法检测巨噬细胞中i NOS,Arg1,p-CREB,CREB水平以及EP4和GRK2的膜表达;QRT-PCR法检测巨噬细胞IRF4,IRF5,Mincle,YM-1,IL-10,TNF-α和EP m RNA各亚型的表达;流式细胞术检测巨噬细胞表型CD86,CD206和F4/80的表达,巨噬细胞表面EP4和GRK2的表达以及巨噬细胞吞噬作用;ELISA法检测PGE2和c AMP的水平;CP-25(35 mg/kg)灌胃给药,依那西普(4.5mg/kg)腹腔注射,进行多发性关节炎指数评分;激光共聚焦显微观察法检测EP4和GRK2在巨噬细胞上的分布;免疫共沉淀法检测巨噬细胞上EP4和GRK2的相互作用;高内涵成像仪观察巨噬细胞中EP4和GRK2的表达;si RNA瞬时沉默Raw264.7中GRK2基因表达;CRISPR/Cas 9敲除Raw264.7中GRK2基因表达;用CRISPR/Cas 9技术构建GRK2 KO小鼠,取GRK2 KO小鼠PM和BMM;结果:1.CIA小鼠巨噬细胞中M1/M2的比例变化选取CIA小鼠PM,结果显示,与正常组对比,模型组中巨噬细胞M1标记i NOS水平上升,M2标记Arg1水平降低;CD86/CD206的比例升高;巨噬细胞吞噬作用增强。IRF5,Mincle和TNF-α的m RNA水平升高,RF4,YM1和IL-10的m RNA水平降低。我们还检测了CIA小鼠BMM中i NOS和Arg1的水平,结果显示,与正常组对比,模型组中巨噬细胞i NOS水平上升,Arg1水平降低。2.PGE2及其信号对CIA小鼠巨噬细胞极化的影响为了探究PGE2-EP-c AMP-CREB在巨噬细胞极化中的作用,我们检测了PGE2及其信号的表达。与正常组对比,模型组中血清和PM上清中PGE2水平升高,EP4受体膜表达降低,GRK2膜表达升高,c AMP和p-CREB水平降低。c AMP类似物dbc AMP能够降低正常组和模型组小鼠PM中M1/M2的比例,PGE2(1μM)能够降低正常组小鼠PM的M1/M2比例,对模型组小鼠PM极化无显着性作用。提示PGE2对正常组和模型组小鼠PM极化作用的不同,可能与PGE2的浓度、EP受体敏感性和细胞极化状态等有关。那么PGE2的四个EP受体是哪个发挥作用的呢?结果显示,EP2和EP4受体的总表达升高,EP4受体的m RNA水平升高。提示EP2和EP4受体可能参与小鼠CIA的发病进程。为进一步明确PGE2是通过哪个受体调控c AMP-CREB,我们用EP2受体激动剂和EP4受体激动剂同样条件下刺激正常组和模型组PM,EP4受体激动剂与PGE2(1μM)有相似的结果,提示PGE2可能通过EP4受体调控c AMP-CREB。PGE2刺激下正常组小鼠PM中EP4受体膜表达升高,GRK2膜表达升高,模型组小鼠PM中EP4受体膜表达无显着性变化,GRK2膜表达升高。提示EP4的过度脱敏,GRK2转膜增加,可能与PGE2对模型组小鼠PM极化作用失调有关。利用激光共聚焦,发现PM中的EP4受体和GRK2主要分布在胞膜和胞质中,Merge图提示PM中的EP4受体和GRK2存在相互作用;我们进一步通过免疫共沉淀法,发现在正常组中,GRK2和EP4受体间存在相互作用,模型组中GRK2和EP4受体的相互作用增强。3.PGE2及其信号对Raw264.7细胞极化的影响体外刺激诱导M1和M2型巨噬细胞。与M0组对比,M1组中EP4受体膜表达降低,GRK2膜表达升高,c AMP和p-CREB水平降低。M2组中EP4受体膜表达升高,GRK2膜表达降低,c AMP和p-CREB水平升高。c AMP类似物dbc AMP能够降低M0,M1和M2型巨噬细胞中M1/M2的比例。PGE2刺激M0组中,PGE2(100n M,1μM)组CD86/CD206降低,EP4膜表达升高,c AMP水平升高;PGE2刺激M1组中,PGE2(1μM,10μM)组CD86/CD206升高,EP4膜表达降低,c AMP水平降低;PGE2刺激M2组中,PGE2(10n M,100n M,1μM,10μM)组CD86/CD206降低,EP4膜表达升高,c AMP水平升高。激光共聚焦显微镜观察M0,M1和M2型巨噬细胞,发现EP4和GRK2主要分布在胞浆和胞膜,Merge图提示EP4和GRK2存在一定的相互作用;免疫共沉淀法显示,与M0组对比,M1组中GRK2-EP4的相互作用增强,M2组中GRK2-EP4的相互作用无显着性变化。4.GRK2对巨噬细胞极化的影响及对EP4过度脱敏的作用为进一步探讨GRK2对巨噬细胞上EP4受体过度脱敏的影响及GRK2对巨噬细胞极化的影响,用si RNA沉默GRK2基因表达后,发现GRK2 si RNA干扰后的Raw264.7细胞M1/M2比例降低。用CRIPR/Cas9敲除GRK2基因后,发现Raw264.7-GRK2-/-细胞中CD86/CD206比例降低。用PGE2(10μM)不同时间点刺激Raw264.7细胞,结果显示,Raw264.7中CD86/CD206逐渐降低,20 min达到最低值,1h后与对照组相比差异无统计学意义。用PGE2(10μM)不同时间点刺激GRK2 si RNA沉默的Raw264.7细胞,GRK2 si RNA沉默的Raw264.7细胞中CD86/CD206逐渐降低,30 min达到最低值,2h后与对照组相比差异无统计学意义。PGE2(10μM)刺激下,Raw264.7-GRK2-/-细胞中CD86/CD206逐渐降低,2h达到最低值,12h时无显着性差异。随着PGE2(10μM)刺激时间的延长,EP4受体的膜表达逐渐升高,2h处达到最高值,之后下降,12h的EP4受体膜表达与对照组无显着性差异。5.CP-25通过抑制GRK2膜转位恢复PGE2-EP4-c AMP-CREB正常信号转导调控巨噬细胞极化治疗小鼠CIACP-25(35mg/kg)可明显降低CIA小鼠的多发性关节炎指数评分,表明CP-25对CIA小鼠具有治疗作用。CP-25(35mg/kg)可不同程度降低血清和PM上清中PGE2的水平,降低CIA小鼠PM和BMM中i NOS水平,升高Arg1水平;使CD86/CD206的比例升高;巨噬细胞吞噬作用减弱。IRF5,Mincle和TNF-α的m RNA水平降低,RF4,YM1和IL-10的m RNA水平升高。CP-25(35mg/kg)能够升高EP4受体的膜表达,降低GRK2的膜表达,减弱EP4-GRK2间的相互作用。结论:1.CIA小鼠巨噬细胞中M1/M2比例升高,CP-25(35mg/kg)能够降低M1/M2的比例,恢复M1和M2的平衡。2.CIA小鼠血清和PM上清中PGE2水平升高,PGE2不断刺激下,PM中EP4受体过度脱敏,c AMP水平和p-CREB表达减少。PGE2-EP4-c AMP-CREB信号通路介导了CIA小鼠巨噬细胞向M1型极化。3.CIA小鼠巨噬细胞的GRK2异常升高,与EP4受体共表达,GRK2介导EP4受体过度脱敏参与CIA小鼠巨噬细胞PGE2-EP4-c AMP-CREB信号异常导致M1型巨噬细胞极化。4.CP-25抑制GRK2膜转位,恢复EP4受体的敏感性,增加c AMP水平和p-CREB表达,从而促进M2型巨噬细胞极化,调控巨噬细胞M1/M2的比例平衡。(本文来源于《安徽医科大学》期刊2019-02-01）
赵帅华[6]（2018）在《G-蛋白偶联受体5及酪蛋白激酶2α在宫颈癌组织中的表达情况及其对预后预测价值研究》一文中研究指出目的探讨G-蛋白偶联受体5及酪蛋白激酶2α在宫颈癌组织中的表达情况及其对预后预测价值。方法选择安阳地区医院2010年2月至2013年2月经病理活检确诊为宫颈癌的132例患者作为观察组,并选择我院同期确诊为慢性宫颈炎患者120例作为对照组,对两组患者的G-蛋白偶联受体5及酪蛋白激酶2α的阳性表达情况进行观察,并对上述指标在不同宫颈癌组织中的阳性表达情况进行统计分析。同时,对宫颈癌患者进行随访,随访时间为5年,对宫颈癌患者上述指标不同阳性表达程度的5年生存率及中位生存时间进行比较。结果观察组患者G-蛋白偶联受体5及酪蛋白激酶2α的阳性表达率显著高于对照组(P <0. 01),G-蛋白偶联受体5及酪蛋白激酶2α在中低分化宫颈癌组织中的阳性表达率显著高于高分化宫颈癌组织(P <0. 01),在肿瘤分期Ⅲ+Ⅳ期宫颈癌组织中的阳性表达率显着高于Ⅰ+Ⅱ期宫颈癌组织(P <0. 05),在存在淋巴结转移的宫颈癌组织中的阳性表达率显着高于无淋巴结转移的宫颈癌组织(P <0. 01)。G-蛋白偶联受体5及酪蛋白激酶2α与肿瘤分化呈显著负相关(P <0. 05),与肿瘤分期及淋巴结转移呈显着正相关(P <0. 05),G-蛋白偶联受体5及酪蛋白激酶2α在宫颈组织中强阳性表达的患者的5年生存率及中位生存时间显着低于弱阳性及阳性患者(P <0. 05)。结论 G-蛋白偶联受体5及酪蛋白激酶2α的表达增强与宫颈癌的发生发展密切相关,且对宫颈癌患者的预后评估上有着重要的意义。(本文来源于《医药论坛杂志》期刊2018年10期）
吴婧婧[7]（2018）在《G蛋白偶联受体激酶2调控M2巨噬细胞β2肾上腺素受体信号在肝细胞癌中的作用》一文中研究指出原发性肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)约占原发性肝癌的90%,是一种高度恶性肿瘤,全球肿瘤相关死因第二位。由于HCC的病因尚未完全明确,并且缺乏特效的药物与治疗手段,HCC患者复发率高,预后较差。因此,关于HCC的新治疗方法迫切需要。肿瘤微环境是指肿瘤发生发展过程中所处的局部生物环境,主要包括免疫细胞、新生血管细胞、肿瘤相关成纤维细胞以及一些细胞外基质等。巨噬细胞为单核细胞谱系的单核吞噬白细胞,根据功能不同分为两型,即M1和M2型巨噬细胞。肿瘤微环境中浸润的巨噬细胞称为肿瘤相关巨噬细胞(tumor associated macrophages,TAM),以M2型为主。研究表明,TAM与肿瘤进展相关。肝脏内分布大量的自主神经,包括交感神经和副交感神经。交感神经系统激活并释放去甲肾上腺素和肾上腺素,能够激活肿瘤细胞或宿主基质细胞的β肾上腺素能受体(β-adrenergic receptor,β-AR),促进多种实体肿瘤的生长和转移。β2-AR是β-AR的亚型,属于G蛋白偶联受体(G protein-coupled receptor,GPCR),具有七个跨膜螺旋的共同特征。有文献研究表明,β2-AR在肝癌中过表达,激活β2-AR可促进肝癌进展。同时,β2-AR也在巨噬细胞表面分布,激活小鼠体内β2-AR可调控巨噬细胞表型,使其向M2型分化。然而,肝癌M2巨噬细胞中β2-AR的激活对肝癌的影响及其相关机制尚不清楚。G蛋白偶联受体激酶2(G protein-coupled receptor kinase 2,GRK2)属于GRK家族,是体内一类重要的激酶,分布广泛。GRK2的主要作用是使激动剂结合的GPCR磷酸化和脱敏。本实验室前期研究表明,抑制GRK2的表达可明显促进肝癌细胞系HepG2生长。GRK2是否通过调控M2巨噬细胞中的β2-AR参与HCC进程,目前不清楚。本研究首先收集肝癌患者及肝内胆管结石患者石蜡标本,以及肝癌患者新鲜肝组织标本,通过研究肝癌患者石蜡切片中CD163和CD206的共表达及肝癌患者新鲜肝组织标本中CD163和CD206的表达,探讨M2巨噬细胞与HCC的相关性;通过研究肝癌患者石蜡切片中β2-AR和CD163及GRK2和CD163的共定位,探讨M2巨噬细胞中β2-AR和GRK2的表达与HCC的关系。其次,体外特异性激动M2巨噬细胞的β2-AR,将肝癌细胞系HepG2和SMMC-7721和M2巨噬细胞上清共培养,检测肝癌细胞功能变化;进一步使用GRK2 siRNA转染M2巨噬细胞,检测干扰M2巨噬细胞GRK2表达对肝癌细胞的影响,以及M2巨噬细胞β2-AR下游信号通路的变化,分析GRK2调控M2巨噬细胞的β2-AR影响HCC的机制。目的:收集临床HCC患者肝癌石蜡切片及新鲜肝癌组织,观察M2巨噬细胞在肝癌中的表达,以及β2-AR、GRK2分别与M2巨噬细胞的共定位情况,并与患者临床特征进行分析。体外诱导M2巨噬细胞,特异性激动β2-AR,与两种肝癌细胞共培养,并进一步下调M2巨噬细胞GRK2的表达,明确M2巨噬细胞中GRK2调控β2-AR信号在肝癌中的作用及相关机制。方法:整体实验,收集行肝癌切除术的80例HCC患者,10例肝内胆管结石(对照)的组织石蜡标本,以及20例肝癌患者新鲜肝组织标本和其中6例相应的癌旁组织(对照),统计患者临床资料。根据美国癌症分期联合委员会(American Joint Committee on Cancer,AJCC)2010年制定的TNM(Tumor Node Metastasis)分期标准,分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期,其中Ⅰ+Ⅱ期患者共34人,Ⅲ+Ⅳ期患者共46人。通过免疫荧光双染法标记CD163、CD206(M2巨噬细胞标记物),通过Western blot法检测人肝癌新鲜组织中CD163和CD206的表达;通过免疫荧光双染法分别标记β2-AR和CD163以及GRK2和CD163,Image-Pro Plus计算β2-AR和GRK2分别与CD163的共表达情况,比较对照组、Ⅰ+Ⅱ期肝癌及Ⅲ+Ⅳ期肝癌共表达的变化。体外实验,选取人THP-1细胞系,诱导M2巨噬细胞,用免疫荧光双染法标记CD163、CD206进行鉴定。选用人肝癌细胞株HepG2和SMMC-7721,收集经选择性β2-AR激动剂特布他林(terbutaline,Terb)刺激的M2巨噬细胞分泌的上清液,与肝癌细胞共培养。MTT、划痕和Transwell实验分别检测肝癌细胞增殖、迁移和侵袭能力;转染GRK2 siRNA后,收集经Terb刺激的M2巨噬细胞上清,与肝癌细胞共培养,再次用MTT、划痕和Transwell实验检测肝癌细胞功能变化。分别收集GRK2 siRNA染前后,经Terb刺激的M2巨噬细胞分泌的上清液,抗体蛋白芯片法检测各组中细胞因子的变化;Western blot和流式法检测GRK2 siRNA转染前后,Terb刺激不同时间点M2巨噬细胞膜上β2-AR表达的变化;ELISA试剂盒检测GRK2 siRNA转染前后,Terb刺激不同时间点M2巨噬细胞中cAMP表达的变化;Wsetern blot法检测GRK2 siRNA转染前后,M2巨噬细胞β2-AR下游信号通路分子PKA、CREB、p-CREB、STAT3、p-STAT3表达变化。结果:1.M2巨噬细胞在肝癌组织中的表达免疫荧光双染结果表明,Ⅰ+Ⅱ期肝癌患者肝组织切片CD163和CD206的共表达比对照组上升,在Ⅲ+Ⅳ期肝癌患者肝组织切片中进一步升高。同时,Western blot结果表明,Ⅰ+Ⅱ期肝癌患者新鲜肝组织中CD163和CD206的表达比对照组升高,在Ⅲ+Ⅳ期肝癌患者新鲜肝组织中进一步升高。2.β2-AR和CD163,GRK2和CD163的在肝癌组织切片中的共表达及与患者临床特征的关系免疫荧光双染结果表明,β2-AR和CD163的共表达在晚期肝癌患者中升高;而GRK2和CD163的共表达在晚期肝癌组中减少。SPSS 16.0软件分析共表达与患者临床特征关系的结果表明,β2-AR和CD163,GRK2和CD163的共表达均与性别、年龄、肿瘤包膜是否完整、是否有肝炎病毒感染无关。而β2-AR与CD163的共表达在肿块较大或有血管受侵的患者中升高,在有局部淋巴结转移的患者中未见明显变化;GRK2与CD163的共表达在肿块较大或有血管受侵、有局部淋巴结转移的患者中降低。3.M2巨噬细胞的诱导和鉴定人THP-1细胞经PMA(320 nmol/L,24 h)和IL-4(20 ng/mL,24 h)、IL-13(20ng/mL,24 h)诱导后,由圆形悬浮细胞变为类圆形或纺锤形贴壁细胞。免疫荧光双染结果表明,>90%的诱导后细胞均有CD163和CD206共表达。4.Terb对M2巨噬细胞吞噬功能的影响流式结果显示,M2巨噬细胞的吞噬功能比THP-1吞噬功能明显提升。经Terb刺激后,M2巨噬细胞吞噬功能下降,当Terb浓度达到10~-55 mol/L时,吞噬功能下降最为明显。故后续实验Terb浓度选为10~-55 mol/L。5.激动M2巨噬细胞的β2-AR促进肝癌细胞增殖、迁移、侵袭,下调GRK2表达进一步促进了肝癌细胞功能Terb激动M2巨噬细胞的β2-AR后,通过MTT、划痕实验和Transwell实验,分别将M2巨噬细胞上清与肝癌细胞系HepG2、SMMC-7721共培养。结果表明,激动M2巨噬细胞的β2-AR,促进肝癌细胞的增殖、迁移、侵袭。进一步将GRK2siRNA转染M2巨噬细胞,发现下调M2巨噬细胞的GRK2表达,进一步促进了共培养的肝癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力。6.下调β2-AR激动的M2巨噬细胞中GRK2,增加其培养上清中促肿瘤因子的分泌为了进一步探讨下调M2巨噬细胞GRK2表达,对M2巨噬细胞上清液中细胞因子分泌的影响,采用抗体芯片检测了其培养上清液中的细胞因子水平。结果显示,GRK2 siRNA+Terb组中IL-6、MMP-9、VEGF的表达较Terb组明显上升。7.下调β2-AR激动的M2巨噬细胞中GRK2表达延缓细胞膜上β2-AR的内化Western blot和流式结果显示,GRK2 siRNA+Terb组和Terb组细胞膜β2-AR的表达在Terb刺激10 min达峰值,但GRK2 siRNA组比Terb组的表达有明显提升。同时,GRK2 siRNA+Terb组中M2巨噬细胞胞膜β2-AR的表达在达峰后的下降比Terb组明显减慢,提示下调M2巨噬细胞中GRK2表达,延缓细胞膜上β2-AR的内化,使其在胞膜上作用时间延长。8.下调β2-AR激动的M2巨噬细胞中GRK2表达,促进β2-AR下游信号通路激活为了进一步明确M2巨噬细胞中β2-AR被激活后,下游信号通路的变化,采用ELISA试剂盒检测了cAMP的变化。结果显示,下调M2巨噬细胞中GRK2表达后,cAMP的表达在Terb刺激5 min时比Terb单独作用组明显升高,并在Terb作用10 min时达峰值,表达量约是Terb单独作用组峰值的2倍。在Terb作用15 min时,GRK2 siRNA+Terb组的表达量仍明显高于Terb组。同时,Western blot实验结果显示,GRK2 siRNA+Terb组中PKA、p-CREB和p-STAT3的表达明显高于Terb组。提示下调M2巨噬细胞中GRK2表达,激活了β2-AR/cAMP/PKA/CREB和β2-AR/cAMP/IL-6/STAT3信号通路,可能与肝癌进展相关。结论:1.CD163和CD206的共表达在HCC患者肝组织切片中增多,且Ⅲ+Ⅳ期患者比Ⅰ+Ⅱ期患者更明显,CD163和CD206的表达在HCC患者新鲜肝癌组织中增多,且Ⅲ+Ⅳ期患者比Ⅰ+Ⅱ期患者更明显。提示晚期HCC患者肝组织中M2巨噬细胞的数量增多。2.β2-AR和CD163的共表达在Ⅲ+Ⅳ期肝癌组织中上升,GRK2和CD163的共表达在Ⅲ+Ⅳ期肝癌组织中下降。β2-AR和CD163的共表达在肿块直径大或有TNM分期晚的患者中上升;GRK2和CD163的共表达在上述临床特征患者及有区域淋巴结转移患者中降低。提示M2巨噬细胞的β2-AR和GRK2异常表达可能参与HCC的进展。3.特异性激动M2巨噬细胞的β2-AR,与其上清共培养的肝癌细胞系HepG2和SMMC-7721的增殖、迁移和侵袭能力增强。下调β2-AR激动的M2巨噬细胞中GRK2的表达,进一步促进与其上清共培养的HepG2、SMMC-7721肝癌细胞的增殖、迁移和侵袭。提示GRK2可调控M2巨噬细胞的β2-AR促进肝癌细胞的生长和转移。4.下调β2-AR激动的M2巨噬细胞中GRK2的表达,激活β2-AR/cAMP/PKA/CREB和β2-AR/cAMP/IL-6/STAT3信号通路,使M2巨噬细胞分泌促肿瘤细胞因子增多,促进了肝癌细胞的恶性生物学行为。(本文来源于《安徽医科大学》期刊2018-10-01）
马明祥,胡兴国,祁乐,曾因明[8]（2018）在《脊髓G蛋白偶联受体激酶2在持续性术后痛中的表达变化》一文中研究指出目的观察脊髓G蛋白耦联受体激酶2(GRK2)在大鼠持续性术后痛中的表达变化。方法雄性SD大鼠40只,按随机数字表法将大鼠分为2组(n=20):假手术组和皮肤/肌肉切口和牵拉模型组(SMIR组);采用Flatters法制备大鼠SMIR模型;分别于术前1 d(T_0),术后3 (T_1)、7 d(T2)、14 d(T3)、21 d(T4)用von Frey细丝法测定机械缩足反应阈值(MWT);在相应时间点行为学测定后随机抽取4只大鼠处死,取L_4～L_6节段脊髓组织,Western blot法检测脊髓GRK2表达。结果 T_(1～4)时,SMIR组MWT较T_0时明显下降,脊髓GRK2蛋白表达较T_0时明显下调(P均<0. 05);与假手术组比较,SMIR组在T_(1～4)时MWT和脊髓GRK2蛋白表达较低,差异均有统计学意义(P <0. 05)。结论脊髓GRK2表达水平下调与大鼠SMIR持续性术后痛的发生、发展有关。(本文来源于《中国医师杂志》期刊2018年09期）
孙家兰,黄澍,来小音,朱玮,胡荣郭[9]（2018）在《阿尔茨海默病患者外周血淋巴细胞中G蛋白偶联受体激酶5水平与疾病及程度间相关性探讨》一文中研究指出目的 :探讨外周血淋巴细胞中G蛋白偶联受体激酶5(G protein-coupled receptor kinase-5,GRK5)水平与阿尔茨海默病(Alzheimer′s disease,AD)患者认知障碍间的相关性。方法:选择2015年1月至2017年12月期间我院住院和门诊的AD患者,根据简易智能精神状态量表(mini-mental state examination,MMSE)评分分为轻度AD(27例)和中-重度AD组(37例),另选择30名健康体检者作为对照。应用酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测所有研究对象外周血淋巴细胞中的GRK5蛋白表达情况,进行组间比较,并分析外周血GRK水平与患者疾病间的相关性。结果:轻度[(7.58±0.50)ng/m L]及中-重度AD组[(4.37±0.26)ng/m L]外周血淋巴细胞中GRK5水平与对照组[(15.65±0.74)ng/m L]相比,差异均有统计学意义(P<0.001);轻度AD组与中-重度AD组相比,差异亦有统计学意义(P<0.001);线性回归分析显示,外周血淋巴细胞中GRK5蛋白水平与MMSE评分呈显着正相关(R2=0.678 1)。结论 :AD患者存在GRK5水平下降;外周血淋巴细胞GRK5可能作为早期诊断AD的一种新型生物标志物。(本文来源于《诊断学理论与实践》期刊2018年04期）
黄希仕[10]（2018）在《G蛋白偶联受体激酶6（GRK6）的胞核定位机制研究》一文中研究指出目的:G蛋白偶联受体激酶(G protein-coupled receptor kinases,GRKs)磷酸化被配体激活的G蛋白偶联受体(G protein-coupled receptors,GPCRs),负性调控GPCRs信号通路。新近的研究发现,某些GRKs分子如GRK6等通过磷酸化或非磷酸化的方式直接调控细胞核内的底物分子。定位于细胞核是GRKs直接调控胞核内底物的前提,但目前对GRKs,包括GRK6的胞核定位机制尚不清楚。本研究旨在通过筛选GRK6的核定位序列(Nuclear localization sequences,NLSs)和关键基团,以及介导胞核转运的核转运受体两个方面揭示GRK6核定位调控机制。方法:通过预测并构建缺失突变子初筛GRK6的NLSs。对初筛得到的NLS区域的碱性氨基酸做点突变,通过瞬时转染、细胞影像技术、细胞组分分析等手段分析GRK6的亚细胞分布,确定NLS的关键基团;采用钙离子移动实验检测GRK6野生型(阳性对照)及其突变子对内源性毒蕈碱M3受体介导的细胞内钙释放的抑制作用测定其激酶活性;采用RNA干扰技术(RNA interference,RNAi)分别沉默候选的十个核转运受体,结合显微镜技术筛选介导GRK6胞核转运的核转运受体,并在此基础上进一步通过双分子荧光互补技术(Bimolecular fluorescence complementation,BiFC)及免疫共沉淀方法(Co-Immunoprecipitation,Co-IP)验证核转运受体与GRK6之间的相互作用。结果:K~(389)、K~(390)、K~(391)碱性氨基酸的单位点突变显着抑制GRK6胞核定位能力,这些位点的突变均未破坏GRK6对内源性毒蕈碱M3受体介导的细胞内钙释放的抑制作用;沉默核转运受体11(Importin-11,IPO11)可以减弱GRK6的胞核定位能力;双分子荧光互补实验及免疫共沉淀均检测到GRK6与IPO11发生相互作用的信号。结论:K~(389),K~(390),K~(391)是GRK6胞核定位所必需的关键基团,关键基团的突变未破坏其激酶活性,GRK6的胞核转运受到IPO11的调控。(本文来源于《桂林医学院》期刊2018-06-01）
蛋白偶联受体激酶论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的:探讨G蛋白偶联受体激酶4(G protein-coupled receptor kinase 4,GRK4)诱导人鼻咽癌CNE2细胞衰老的机制及其抗肿瘤效应。方法:1.将pEGFP-GRK4质粒转染人鼻咽癌CNE2细胞,24h后流式细胞仪分选CNE2/GRK4(-)和CNE2/GRK4(+)细胞群,Western blot和免疫荧光染色验证分选后细胞GRK4的表达情况;MTT法和流式细胞术检测分选后细胞的增殖和周期分布情况;β半乳糖苷酶染色法验证分选后细胞的衰老表型;与CNE2/GRK4(-)细胞相比,实时荧光定量PCR方法检测分选后CNE2/GRK4(+)细胞的77个衰老相关基因的差异表达情况,Western blot验证差异表达基因及其它与细胞生长相关的分子表达情况。对分选后细胞进行RNA-Seq测序。2.利用Tet-On 3G诱导表达系统建立诱导性表达GRK4基因的CNE2细胞株,即GRK4-Tet-On 3G/CNE2稳定细胞系,不同浓度的顺铂处理稳定细胞系细胞,流式细胞术检测细胞周期分布。SPSS 21.0进行统计学分析。结果:1.流式细胞仪分选得到CNE2/GRK4(-)和CNE2/GRK4(+)细胞。GRK4过表达能显着抑制CNE2细胞增殖,诱导细胞G_0/G_1期阻滞,并伴随细胞衰老表型的出现;实时荧光定量PCR检测结果显示,CNE2/GRK4(+)细胞中出现12个衰老相关基因的异常表达(P<0.05/0.01),其中CDK6、CITED2、GADD45A、p15、p21、p57、RBL1、TERT、THBS1和TP63 10个衰老相关基因的mRNA水平显着升高(P<0.05);PLAU、RBL2这2个基因的mRNA水平显着降低。Western blot检测蛋白水平表达情况,CNE2/GRK4(+)细胞中SIRT1、Cyclin D2及Cyclin D3水平降低,而p21及CDK6水平升高,未检测到p53和磷酸化的p38 MAPK。mRNA水平有1894个差异表达基因,进行GO分析和KEGG通路富集分析。2.Western blot鉴定成功建立GRK4-Tet-On 3G/CNE2稳定细胞系,以Dox诱导GRK4表达,顺铂处理条件下,Dox诱导组的细胞出现S期阻滞,伴随大量的凋亡细胞(Pre-G_1期)。结论:本研究首次证实GRK4具有抑制肿瘤细胞增殖、诱导细胞周期阻滞及细胞衰老的生物学效应,其分子机制可能是与p53非依赖、p38非依赖等有关的复杂的信号通路有关,并且初步证实GRK4能够增强DDP的抗肿瘤作用。构建GRK4-Tet-On3G/CNE2稳定细胞系和完成转录组测序为深入探讨GRK4诱导肿瘤细胞衰老和与之相关的信号通路提供了有价值的信息。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
蛋白偶联受体激酶论文参考文献
[1].付治卿,高文谦,张方圆,谭国娟,韩春光.G蛋白偶联受体激酶2与血清可溶性ST2对老年心肌梗死后心力衰竭预警的意义[J].中华老年心脑血管病杂志.2019
[2].李瑞瑞.G蛋白偶联受体激酶4（GRK4）诱导人鼻咽癌CNE2细胞衰老及其抗肿瘤研究[D].桂林医学院.2019
[3].杨洋.G蛋白偶联受体激酶5通过NF-κB信号通路促进胶质瘤细胞生物学活性[D].山东大学.2019
[4].李瑞瑞,蒋晓山.非视紫质G蛋白偶联受体激酶对肿瘤的调控作用[J].肿瘤防治研究.2019
[5].杨雪枝.G蛋白偶联受体激酶2介导PGE2-EP4-cAMP-CREB信号转导异常参与CIA小鼠巨噬细胞极化及CP-25的作用[D].安徽医科大学.2019
[6].赵帅华.G-蛋白偶联受体5及酪蛋白激酶2α在宫颈癌组织中的表达情况及其对预后预测价值研究[J].医药论坛杂志.2018
[7].吴婧婧.G蛋白偶联受体激酶2调控M2巨噬细胞β2肾上腺素受体信号在肝细胞癌中的作用[D].安徽医科大学.2018
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[10].黄希仕.G蛋白偶联受体激酶6（GRK6）的胞核定位机制研究[D].桂林医学院.2018
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