人IFN-λ1的克隆表达及其在不同种属细胞中的抗病毒活性分析

论文摘要

目的测定IFN-λ1在CaCo2、Vero、BHK-21、MDCK等4种不同种属来源细胞中的抗病毒活性。方法利用RT-PCR技术从人结直肠腺癌细胞（CaCo2）中扩增获得人IFN-λ1 （HuIFN-λ1）基因,然后克隆至真核表达载体pCDNA3.1-Flag-HA中,通过质粒转化、阳性菌落筛选、质粒提取及测序,获得重组质粒pCDNA3.1-HuIFN-λ1;利用脂质体将其转染293细胞,48 h后通过Western blot检测HuIFN-λ1瞬时表达情况,取转染后上清分别作用于CaCo2、Vero、BHK-21、MDCK等四种不同种属来源细胞进行HuIFN-λ1抗病毒活性分析。结果从人结直肠腺癌细胞中扩增获得HuIFN-λ1基因,大小为600 bp,并在293细胞内成功表达HuIFN-λ1,表达产物能抑制VSVG在CaCo2、Vero、BHK-21、MDCK中的增殖,流式细胞仪检测经HuIFN-λ1处理的上述细胞荧光率分别为73.69%、80.12%、71.73%、69.47%。结论重组表达的人IFN-λ1蛋白对4种不同种属来源的细胞均存在一定的抗病毒活性,为研究人IFN-λ1在宿主抗病毒免疫和黏膜免疫中的作用机制及其应用奠定了基础。

论文目录

• 材料与方法
•   1 材料
•     1.1 细胞、病毒及载体
•     1.2 试剂
•   2 方法
•     2.1 引物设计及合成
•     2.2 HuIFN-λ1基因的克隆及序列分析
•     2.3 重组表达质粒构建与鉴定
•     2.4 Western blot检测HuIFN-λ1的表达
•     2.5 抗病毒活性验证
•       2.5.1 HuIFN-λ1最佳稀释度的确定
•       2.5.2 HuIFN-λ1在不同细胞上的抗病毒活性检测
• 结 果
•   1 HuIFN-λ1基因的扩增、克隆及鉴定分析
•   2 重组表达质粒构建与鉴定
•   3 HuIFN-λ1在293细胞中的表达鉴定
•   4 重组HuIFN-λ1抗病毒活性检测
•     4.1 最佳稀释度的确定
•     4.2 HuIFN-λ1对不同细胞的抗病毒活性
• 讨 论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 陈竞,许汪,宋利娜,郝鹏飞,姜宇航,付婷婷,金鑫,金宁一,李昌

关键词: 人结直肠腺癌细胞,抗病毒活性

来源: 中国病原生物学杂志 2019年10期

年度: 2019

分类: 医药卫生科技,基础科学

专业: 生物学,基础医学

单位: 延边大学农学院,军事医学研究院军事兽医研究所

基金: 国家重点研发计划资助项目(No.2017YFD0501002),国家自然科学基金项目(No.31702210)

分类号: R392

DOI: 10.13350/j.cjpb.191010

页码: 1166-1170

总页数: 5

文件大小: 1230K

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