猪PKM2基因在肺炎支原体感染3D4/21细胞后的互作蛋白质鉴定与分析

论文摘要

通过构建含有HA标签的PKM2过表达质粒转染3D4/21细胞,利用免疫共沉淀（Co-IP）与液相色谱-质谱联用（LC-MS/MS）技术分析与鉴定猪PKM2基因在肺炎支原体感染猪肺泡巨噬细胞3D4/21后的互作蛋白质,并对这些互作蛋白质进行GO与KEGG通路分析。结果显示肺炎支原体感染3D4/21细胞后,PKM2在mRNA水平和蛋白质水平上表达上调,其表达水平呈现剂量与时间依懒性。免疫共沉淀反应结果显示IP与IgG组共鉴定到72个蛋白质,这2组鉴定到的蛋白质数分别为60和19,其中7个蛋白质在2组中同时鉴定到。GO分析结果表明IP组的互作蛋白质主要参与了NAD代谢过程、NADH代谢过程、肌原纤维组装、NADH再生和葡萄糖代谢丙酮酸等生物过程,其中大多数与能量代谢有关。KEGG pathway分析结果表明互作蛋白质参与了致病性大肠杆菌感染、军团杆菌病、糖酵解/糖异生、丙酮酸代谢和癌症中的中枢碳代谢等通路,这些通路与细菌感染和能量代谢有关。

论文目录

• 1 材料和方法
•   1.1 细胞、菌株与质粒
•   1.2 试 剂
•   1.3 RNA提取、反转录与定量PCR
•   1.4 pcDNA3.1-PKM2-HA质粒构建
•   1.5 细胞培养与质粒转染
•   1.6 Western blot检测
•   1.7 免疫共沉淀（CO-IP）
•   1.8 PKM2互作蛋白的LC-MS/MS与鉴定
•   1.9 GO与KEGG分析
• 2 结果与分析
•   2.1 PKM2基因在肺炎支原体感染3D4/21细胞后的表达规律
•   2.2 pcDNA3.1-PKM2-HA重组质粒的鉴定
•   2.3 PKM2-HA在3D4/21细胞中的过表达检测
•   2.4 PKM2-HA蛋白的免疫共沉淀验证
•   2.5 PKM2互作蛋白质的质谱鉴定与分析
•   2.6 PKM2互作蛋白质参与的GO分析
•   2.7 PKM2互作蛋白质参与的KEGG pathways分析
• 3 讨 论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 赵为民,涂枫,王丽,任守文,付言峰,李碧侠,徐小波,陈哲,方晓敏

关键词: 基因,肺炎支原体,互作蛋白质,免疫共沉淀

来源: 江苏农业学报 2019年06期

年度: 2019

分类: 农业科技

专业: 畜牧与动物医学

单位: 江苏省农业科学院畜牧研究所/江苏省农业种质资源保护与利用平台,农业部种养结合重点实验室

基金: 国家自然科学基金项目(31601928),江苏省农业重大新品种创制项目(PZCZ201733),江苏省农业科学院基本科研业务专项[ZX(15)4002]

分类号: S858.28

页码: 1381-1389

总页数: 9

文件大小: 2539K

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