共表达PDI1、MDH1和HAC1基因对重组毕赤酵母分泌表达葡糖氧化酶的影响

论文摘要

葡糖氧化酶（GOD）可催化葡萄糖生成过氧化氢和葡萄糖酸,在工业上被广泛应用。在构建的一株整合多拷贝GOD基因且含有HAC1表达单元的重组毕赤酵母G/GMH1的基础上,共表达分子伴侣二硫键异构酶基因PDI1和苹果酸脱氢酶基因MDH1,考察PDI1、MDH1基因与HAC1共表达后对GOD分泌表达的影响。这些基因共表达后对重组菌的生长无明显影响。PDI1和MDH1分别与HAC1共表达后,重组菌G/GMH1-PDI1和G/GMH1-MDH1的胞外GOD产量达到11 731. 9U/g DCW和1 1047. 6U/g DCW,比出发菌提高了17. 3%和10. 4%,前者达到了目前所报道摇瓶培养的最高单位菌体酶活水平。而三基因共表达重组菌G/GMH1-PDI1-MDH1的GOD产量略有下降。在所构建的菌株中,GOD基因的转录水平仅在G/GMH1-PDI1-MDH1中略有提高,与酶产量的提高无直接关系。与出发菌相比,共表达基因的转录水平在新构建的菌中有不同程度的升高,说明这些基因被成功转录。PDI1和MDH1基因转录在G/GMH1-PDI1和G/GMH1-MDH1中分别被上调,可能与GOD产量提高有关。虽然GOD、HAC1、PDI1和MDH1基因在G/GMH1-PDI1-MDH1中均被上调,但并未促进酶产量的提高。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 材料
•     1.1.1 质粒与菌株
•     1.1.2 培养基
•   1.2 方法
•     1.2.1 培养方法
•     1.2.2 目的基因克隆
•     1.2.3 表达载体的构建
•     1.2.4 G/GMH1毕赤酵母感受态的的制备
•     1.2.5 重组GOD工程菌的构建与表达
•     1.2.6 菌体干重的测定
•     1.2.7 GOD酶活测定
•     1.2.8 重组菌胞内外蛋白质的SDS-PAGE分析
•     1.2.9 Real-time polymerase chain reaction（RT-PCR）
• 2 结果与分析
•   2.1 共表达质粒的鉴定
•   2.2 共表达重组菌的构建
•   2.3 PDI1、MDH1与HAC1基因共表达对GOD产量的影响
•   2.4 共重组菌的GOD、PDI、MDH1、HAC1基因转录水平的变化
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 张文玉,魏东升,钱江潮

关键词: 重组毕赤酵母,葡糖氧化酶,基因

来源: 中国生物工程杂志 2019年10期

年度: 2019

分类: 基础科学

专业: 生物学

单位: 华东理工大学生物反应器国家重点实验室

基金: 中央高校基本科研业务费专项(22221818014)资助项目

分类号: Q78

DOI: 10.13523/j.cb.20191004

页码: 24-33

总页数: 10

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