猪流行性腹泻病毒细胞适应毒LJB-03株在三种Vero细胞上增殖效果的比较

论文摘要

为探究猪流行性腹泻病毒（PEDV）细胞适应毒LJB-03株在3种Vero细胞上的增殖特性,分别以正常Vero细胞、适应无血清培养基的Vero细胞和稳定表达跨膜丝氨酸蛋白酶2 （TMPRSS2）的Vero/TMPRSS2细胞（繁殖PEDV时无须添加胰酶）为宿主细胞,繁殖PEDV LJB-03株,观察这3种细胞接毒后的病变特点和病变时间,利用空斑法比较其增殖特性,并以间接免疫荧光和电镜技术鉴定病毒的增殖。结果表明,PEDV LJB-03株在正常Vero细胞和适应无血清培养基的Vero细胞上增殖时需添加的胰酶最佳质量浓度为7ug/m L;在这3种细胞上增殖时的最佳感染复数均为0.01;PEDV LJB-03株在3种细胞上效价达到峰值的时间均为36 h,其中在正常Vero细胞上病毒效价最高为7.17×107PFU/m L,在Vero/TMPRSS2细胞上病毒效价为3.33×107PFU/m L,在无血清Vero细胞上的病毒效价为2.85×107PFU/m L。综上所述,正常Vero细胞上PEDV LJB-03株的病毒效价可达其他2种细胞的2倍以上,但在培养病毒时正常Vero细胞需添加胰酶和血清,因此,适应无血清培养基的Vero细胞与Vero/TMPRSS2细胞在培养PEDV LJB-03株时更具有潜力。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 病毒与细胞
•   1.2 主要试剂
•   1.3 病毒效价的测定
•   1.4 最适胰酶质量浓度的确定
•   1.5 病毒感染三种细胞适宜感染复数的确定
•   1.6 病毒在三种细胞上一步生长曲线的绘制
•   1.7 病毒的间接免疫荧光试验鉴定
•   1.8 细胞中感染病毒的超薄切片法电镜检测
•   1.9 病毒的直接负染法电镜观察
• 2 结果
•   2.1 最适胰酶质量浓度的确定
•   2.2 病毒感染三种细胞适宜MOI的确定
•   2.3 病毒在三种Vero细胞上一步生长曲线的绘制
•   2.4 病毒LJB-03株在三种细胞中增殖的间接免疫荧光试验鉴定
•   2.5 PEDV LJB-03感染的Vero细胞的超薄切片观察
•   2.6 病毒的负染电镜观察
• 3 讨论
• 4 结论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 郭卫龙,解伟纯,侯星宇,李智力,姜艳平,崔文,王丽,乔薪瑗,周晗,徐义刚,李一经,唐丽杰

关键词: 猪流行性腹泻病毒,细胞适应毒,细胞,增殖

来源: 中国兽医科学 2019年03期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 东北农业大学动物医学学院

基金: “十三五”国家重点研发计划项目(2017YFD0501105),国家自然科学基金资助项目(31472226)

分类号: S852.651

DOI: 10.16656/j.issn.1673-4696.2019.0036

页码: 301-308

总页数: 8

文件大小: 5973K

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