低氧诱导因子1α与骨形态发生蛋白6协同过表达骨髓间充质干细胞在低氧环境下的成骨和成血管效应

论文摘要

背景:目前认为低氧诱导因子1α是维持机体细胞内氧稳态的最重要调控因子之一,骨形态发生蛋白6是成骨活性最强的骨形态发生蛋白之一,实验拟构建二者共表达的骨髓间充质干细胞系,以研究细胞在低氧状态下的耐受及功能受益问题。目的:探讨体外模拟低氧环境下低氧诱导因子1α和骨形态发生蛋白6协同过表达骨髓间充质干细胞的成骨和成血管生物学特性。方法:分离培养鉴定SD大鼠骨髓间充质干细胞,将已构建好的携带有骨形态发生蛋白6和低氧诱导因子1α双基因的腺病毒真核表达载体共同感染骨髓间充质干细胞,在体积分数为21%O2,2%O2条件下分别进行培养,并以常氧状态下未转染的骨髓间充质干细胞作为对照组,RT-qPCR检测各组细胞HIF-1α、VEGF、BMP-6、GLUT-1、SIRT-1、OCN、RUNX2、AKP的m RNA水平。各组骨髓间充质干细胞与人脐静脉内皮细胞共培养后,观察体外小管形成能力;各组骨髓间充质干细胞经成骨诱导培养基干预后,碱性磷酸酶染色及茜素红染色鉴定成骨效果。结果与结论:（1）流式细胞仪检测结果显示第4代骨髓间充质干细胞高表达CD29、CD90、CD44,低表达CD45、CD11、CD34;（2）低氧组骨髓间充质干细胞VEGF、GLUT-1、SIRT-1、OCN、RUNX2、AKP m RNA表达水平高于常氧组（P<0.01）;（3）低氧组小管形成数量要明显高于对照组,差异有非常显著性意义（P<0.01）;（4）低氧组细胞出现更多的钙结节及圆形矿化结节;（5）上述结果表明,低氧诱导因子1α与骨形态发生蛋白6协同过表达骨髓间充质干细胞在体外低氧环境下具有更强的血管生成及成骨分化能力。

论文目录

• 0引言Introduction
• 1 材料和方法Materials and methods
•   1.1 设计
•   1.2 时间及地点
•   1.3 材料
•     1.3.1 实验动物
•     1.3.2 实验试剂
•   1.4 实验方法
•     1.4.1 大鼠骨髓间充质干细胞的分离培养和鉴定
•     1.4.2 腺相关病毒载体构建和体外转染
•     1.4.3 RT-qPCR检测转染后骨髓间充质干细胞中低氧诱导因子1α和骨形态发生蛋白6的表达
•     1.4.4 氧张力设置及实验分组
•     1.4.5 体外血管生成实验
•     1.4.6 体外成骨实验
•   1.5 主要观察指标
•   1.6 统计学分析
• 2 结果Results
•   2.1 骨髓间充质干细胞鉴定结果
•   2.2 RT-qPCR检测转染后骨髓间充质干细胞中低氧诱导因子1α和骨形态发生蛋白6的表达
•   2.3 RT-qPCR检测不同氧张力下骨髓间充质干细胞中成骨和成血管相关基因的表达
•   2.4 体外小管形成实验结果
•   2.5 体外成骨实验结果
• 3 讨论Discussion

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 廖红兴,张志辉,刘展亮,黄健,谌业光,黄映梅,钟志雄

关键词: 骨髓间充质干细胞,低氧诱导因子,骨形态发生蛋白,低氧,成骨能力,成血管能力,广东省自然科学基金

来源: 中国组织工程研究 2019年17期

年度: 2019

分类: 医药卫生科技,基础科学

专业: 生物学,基础医学

单位: 梅州市人民医院骨科中心,梅州市人民医院胸痛中心

基金: 广东省自然科学基金(2014A030307006),项目负责人:廖红兴,广东省医学科学技术研究基金项目(A2017306),项目负责人:廖红兴,广东省梅州市社会发展科技计划项目(2017B023),项目负责人:廖红兴~~

分类号: R329.2

页码: 2644-2650

总页数: 7

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