PPAR-α调控fad3小鼠肌卫星细胞能量代谢机制研究

论文摘要

N-3多不饱和脂肪酸（N-3 PUFA）在糖、脂与蛋白代谢中发挥重要作用,具有缓解胰岛素抵抗、抗炎症和保护心血管等作用。为研究N-3 PUFA在肌肉组织与肌细胞能量代谢中可能的作用机制,本试验以fad3转基因小鼠为材料,分析其肌肉、肝脏与脂肪组织中N-3PUFA组成变化;利用fad3转基因肌卫星细胞与添加外源DHA的对照组肌卫星细胞,分析N-3 PUFA对三羧酸循环（TCA）关键调节酶基因表达的影响及对PPARs基因和蛋白表达的影响;利用PPAR-α激活剂或抑制剂研究对PPARs基因和蛋白表达及对TCA关键限速酶基因的影响;通过蛋白质谱、CHIP-seq等研究手段分析N-3 PUFA的作用机制。主要结果如下:（1）转基因小鼠的fad3基因呈组织特异性表达,肝脏和肌肉组织中显著表达,尤其降低了肌肉与肝脏中的短链与中链脂肪酸总量;fad3诱使N-3 PUFA含量增加,N-6 PUFA含量下降,促进N-6 PUFA转化为N-3 PUFA;（2）在fad3小鼠肌卫星细胞中,N-3 PUFA水平明显提升;（3）蛋白质谱数据显示,fad3转基因细胞和添加100ng/ml DHA的对照组细胞中的脂肪酸代谢能力增强,线粒体氧化磷酸化和三羧酸循环（TCA）相关蛋白表达明显降低;（4）定量PCR结果表明,N-3 PUFA的增加使TCA相关基因如Idh2、Ogdh、Sdha和Mdh2的表达显著降低;（5）蛋白质谱发现,N-3 PUFA影响了PPAR蛋白通路,PPAR-α基因在fad3肌卫星细胞中的表达显著升高,而PPAR-β和PPAR-γ无明显变化;PPAR-α蛋白在fad3细胞或DHA的肌卫星细胞的表达显著降低,尤其是细胞核中的表达量明显减少,而PPAR-β和PPAR-γ无明显变化;（6）添加PPAR-α抑制剂MK886,抑制了PPAR-α表达,降低了TCA关键限速酶基因如Idh2、Ogdh、Sdha和Mdha2的表达;PPAR-α激活剂WY14643,提高PPAR-α蛋白表达,促进TCA关键限速酶表达的增加;（7）CHIP-seq结果表明,胞质内增多的N-3 PUFA会抑制PAPR-α与线粒体能量代谢相关基因的DNA序列的结合。上述结果表明,fad3催化体内N-6 PUFA转化为N-3 PUFA,显著提高体内N-3 PUFA含量,胞质内增多的N-3 PUFA抑制了PPAR-α与细胞线粒体能量代谢相关基因的DNA序列的结合,影响肌卫星细胞线粒体能量代谢。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 缩略词表
• 第一章 文献综述：N-3多不饱和脂肪酸调节能量代谢机制研究进展
•   1.多不饱和脂肪酸对脂质代谢的影响
•   2.多不饱和脂肪酸对糖代谢的影响
•   3.多不饱和脂肪酸对三羧酸循环的影响
•   4.小结
• 第二章 试验研究
•   1.前言
•   2.材料和方法
•     2.1 材料
•     2.2 方法
•   3.结果
•     3.1 fad3 转基因小鼠鉴定
•     3.2 小鼠肌卫星细胞的原代培养
•     3.3 肌卫星细胞的fad3表达
•     3.4 卫星细胞的脂肪酸分析
•     3.5 肌肉卫星细胞蛋白质谱
•     3.6 与TCA相关基因的表达
•     3.7 PPAR相关基因和蛋白的表达
•     3.8 PPAR干扰剂与TCA基因表达
•     3.9 CHIP-seq
•   4.讨论
•   5.结论
• 参考文献
• 致谢

文章来源

类型: 硕士论文

作者: 陈晨

导师: 李光鹏

关键词: 基因,循环,技术

来源: 内蒙古大学

年度: 2019

分类: 基础科学

专业: 生物学

单位: 内蒙古大学

分类号: Q952

总页数: 69

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