重组Humicola insolens角质酶的高密度发酵优化

论文摘要

在采用前期已构建的重组菌E. coli BL21（DE3）/pET20b（+）-hic进行高密度发酵制备角质酶时发现,在高诱导强度发酵时,菌体浓度下降明显。同时,通过测定纯化重组角质酶的磷脂水解活性,考察验证了重组酶对宿主细胞的损伤作用。重组酶的磷脂酰乙醇胺活性为9. 8U/mg（NPB水解比活力为1 047. 6 U/mg）,在卵黄平板出现了明显的反应圈现象。在此基础上尝试了高菌体浓度结合高诱导强度的发酵策略,以进一步提高重组酶在3L罐中的表达水平。优化后的最佳条件及结果为:OD600为75时,恒速流加0. 8g/（L·h）的乳糖溶液,发酵24h后,酶活达到最大值4 788. 0U/ml,约为摇瓶发酵酶活的28倍,与OD600为50时、流加0. 2 g/（L·h）进行诱导的发酵策略（酶活2 233. 0 U/ml）相比,提高幅度约为114. 0%,发酵时间缩短40. 0%。

论文目录

• 1材料与方法
•   1.1菌株与培养基
•   1.2培养方法
•   1.3分析方法
•     1.3.1蛋白质纯化方法
•     1.3.2酶活力测定方法
•     1.3.3磷脂酶活性测定
• 2结果与分析
•   2.1诱导强度对重组菌高密度发酵的影响
•   2.2角质酶对重组菌生长产生不良影响的原因分析
•     2.2.1重组角质酶的分离纯化
•     2.2.2重组角质酶的磷脂水解活性测定
•   2.3高诱导菌体浓度和高诱导强度的发酵策略对重组菌高密度发酵的影响
•     2.3.1菌体浓度OD600为75时的诱导强度优化
•     2.3.2菌体浓度OD600为95诱导时的诱导强度优化
• 3结论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 黄燕,孙益荣,吴敬,宿玲恰

关键词: 角质酶,磷脂酶活性,高密度发酵

来源: 中国生物工程杂志 2019年01期

年度: 2019

分类: 基础科学,工程科技Ⅰ辑

专业: 一般化学工业

单位: 江南大学食品科学与技术国家重点实验室,江南大学生物工程学院工业生物技术教育部重点实验室,江南大学教育部食品安全国际合作联合实验室

基金: 国家杰出青年基金(31425020),高等学校学科创新引智计划(B170210)资助项目

分类号: TQ925

DOI: 10.13523/j.cb.20190108

页码: 63-70

总页数: 8

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