刘德鹏郝英敏姜玉芳
（山东省莱州市疾病预防控制中心山东莱州261400）
【摘要】目的：提供一种生产成本低、使用方便、结果准确的湿式大肠菌群快检纸片。方法：对依据“食（饮）具用大肠菌群快速检验纸片质量标准”要求加工生产的湿式大肠菌群快检纸片与干式大肠菌群快检纸片进行质量检测和对比试验。结果：湿式大肠菌群快检纸片与干式大肠菌群快检纸片的质量均符合“食（饮）具用大肠菌群快速检验纸片质量标准”的规定要求，经过400份食（饮）具的检测对比试验，两种快检纸片检测的阳性符合率为97.2%(69/71),阴性符合率为99.4%(329/331),总符合率为99.5%(398/400),说明两种快检纸片的检测结果一致。结论：湿式大肠菌群快检纸片与干式大肠菌群快检纸片相比具有以下优点：易制备；经济成本低；使用方便，操作时省时省力，可减少或避免因加盐水湿润纸片过程中被空气污染引起假阳性的机会；该产品的湿度一致，可减少或避免因加盐水多或少而引起的结果不易判断或结果不一致；是一种具有经济效益和社会效益的成品培养基，完全可以替代干式大肠菌群快检纸片，为消毒食（饮）具中大肠菌群的检测方法的进一步完善提供了科学依据。
【关键词】湿式；干式；大肠菌群快检纸片；成品培养基
【中图分类号】R446【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2015）28-0340-02
【Abstract】PurposeToprovidetheWetColiformquickcheckpaperwithalowproductioncost,easytouse,accurateresults.MethodsQualitytestingandcomparisontestingbetweentheWetColiformquickcheckpaperandDryColiformquickcheckpaperwhichrequestprocessingproductionbasedon"dinneranddrinkingsetwithcoliformrapidtestpaperqualitystandards".ResultTheQualityoftheWetColiformquickcheckpaperandDryColiformquickcheckpaperbothmeettherequirementsof"dinneranddrinkingsetwithcoliformrapidtestpaperqualitystandards".Thedetectioncomparisontestafter400dinneranddrinkingsets,thepositivecoincidenceratesofthetwokindofquickcheckpaperwere97.2%(69/71),thenegativecoincidencerateswere99.4%(329/331),thetotalcoincidencerateswere99.5%(398/400),witchmeansthetestresultsofthetwokindofquickcheckpaperwereconsistent.ConclusionTheWetColiformquickcheckpapercomparewiththeDryColiformquickcheckpaperhasthefollowingadvantages:easypreparation;Loweconomiccost;easytouse,operatingconvenient,canreduceoravoidethechanceoffalsepositivescausedbytheairpollutionduetotheprocessofwetingthequickcheckpaper.Themoistureoftheproductareconsistent,canreduceoravoidetheresultsarehardtojudgeorinconsistentresultscausedbyheamountofsaline;Itisakindoffinishedmediumwitheconomicandsocialbenefits,cansubstitutetheDryColiformquickcheckpapertotally,provideascientificbasistoimprovethedisinfectionofdinneranddrinkingsetwithcoliformdetectionmethod.
【Keywords】Wet;Dry;Coliformquickcheckpaper;Finishedmedium
目前，GB14934-94食（饮）具消毒卫生标准[1]中大肠菌群的国家标准检验方法规定所使用的干式大肠菌群快检纸片，属于半成品培养基，其生产加工程序复杂，经济成本高，使用时需先加无菌盐水浸湿适当的时间，操作麻烦，费时费力，工作效率低，并且易被空气污染引起假阳性，如浸湿湿度过高或过低，还可导致结果不易判断或产生假阳性或假阴性结果，与目前卫生监督检测工作的需要不相适应。
为了减少或消除干式大肠菌群快检纸片的上述缺点，在不改变干式大肠菌群快检纸片的原理和培养基成分的情况下，依据“食（饮）具用大肠菌群快速检验纸片质量标准”[2]的规定要求，研制出可直接用于消毒食（饮）具或其它物体表面的大肠菌群快速检验的湿式大肠菌群快检纸片，属于成品培养基，曾获得过国家实用新型及外观设计专利，并通过国家卫生部食检所的质量检测，已在全国推广使用。现将湿式与干式大肠菌群快检纸片的加工、使用、质量检测、对比试验等报告如下。
1.加工方法
干式大肠菌群快检纸片的加工方法按“食（饮）具用大肠菌群快速检验纸片质量标准”要求进行。
湿式大肠菌群快检纸片的加工方法：其纸片、培养基、塑料袋、铝箔袋按“食（饮）具用大肠菌群快速检验纸片质量标准”要求加工，然后将20张纸片呈梯形排列装入铝箔袋内再加入20ml培养基封口后经过高温灭菌即可。
2.使用方法
使用湿式大肠菌群快检纸片时，无菌操作将铝箔袋从撕裂口打开，用镊子取出纸片贴在被检物物体表面上30s，然后取下放入无菌塑料袋内，置37°温箱内培养，其培养温度、时间、结果判定、报告方式均与干式大肠菌群快检纸片相同。
干式大肠菌群快检纸片的使用方法按“食（饮）具用大肠菌群快速检验纸片质量标准”要求进行。
3.无菌试验
将制备好的湿式大肠菌群快检纸片产品按1%随机抽样，无菌操作，取湿式大肠菌群快检纸片置于无菌塑料袋内，然后用手压平，置于36℃培养箱培养18～24小时，取出观察纸片的颜色均正常无变化，说明无菌生长，为无菌试验合格。
将制备好的干式大肠菌群快检纸片产品按1%随机抽样，无菌操作，用无菌生理盐水浸湿后取出置于无菌塑料袋内，然后用手压平，置于36℃培养箱18～24小时，取出观察纸片颜色均正常无变化，说明无菌生长，为无菌试验合格。
4.特异性的检测
“食（饮）具用大肠菌群快速检验纸片质量标准”规定：大肠菌群快检纸片的特异性应使用大肠菌3株，沙门氏菌、志贺氏菌和金黄色葡萄球菌各一株进行检测，3株大肠菌呈典型阳性反应，即纸片上出现红色斑点，其周围变黄或整个纸片变黄，其它3株不出现阳性反应或被抑制。
按上述要求，我们选用了普通大肠菌3株（24h乳糖产酸产气），鼠伤寒沙门氏菌、福氏志贺氏菌和金黄色葡萄球菌各1株，分别在营养琼脂平板上培养后制成不同浓度的生理盐水混悬液，用取菌针分别接种在湿式大肠菌群快检纸片和浸湿的干式大肠菌群快检纸片上，置37℃培养18h，观察结果，两种大肠菌群快检纸片的结果均为：3株大肠菌均呈典型阳性反应，鼠伤寒沙门氏菌和福氏志贺氏菌出现红晕，其纸片颜色不变，金黄色葡萄球菌无任何反应，说明湿式大肠菌群快检纸片与干式大肠菌群快检纸片的特异性检测结果均符合质量标准规定，为特异性检测合格。
5.保质期试验
将制备好的湿式大肠菌群快检纸片与干式大肠菌群快检纸片产品均按2%随机抽样，置20℃以下干燥避光保存，分别于12、24个月后取出，按照上述无菌和特异性检测方法进行检测，其结果均与质量标准规定一致，说明湿式大肠菌群快检纸片与干式大肠菌群快检纸片的保质期至少24个月，均符合“食（饮）具用大肠菌群快速检验纸片质量标准”规定，为保质期试验检测合格。
6.对比试验
应用湿式大肠菌群快检纸片与干式大肠菌群快检纸片进行现场应用对比试验。为了便于比较，用两种快检纸片采同一件餐具，餐具的种类包括碗和盘，其中消毒过的200件，未消毒200件，共400件，其结果见表1。
由表1可见：400件餐具中两种快检纸片检测结果相符有392份，包括均阳性66件，均阴性326件；8份检测结果不相符，其中5件干式快检纸片阳性，3件湿式快检纸片阳性。两种快检纸片符合率98.00%（392/400），阳性符合率为97.2%（69/71），阴性符合率为99.4%（329/331)，总符合率为99.5%（398/400），说明两种快检纸片的检测结果一致。
7.讨论
由上述可见，湿式大肠菌群快检纸片原理、培养基成分和结果判断均与干式大肠菌群快检纸片一样，其各项质量指标均符合“食（饮）具用大肠菌群快速检验纸片质量标准”的规定要求，两种大肠菌群快检纸片的现场应用对比试验的检测结果总符合率为99.5%，经过多年实际应用，湿式大肠菌群快检纸片与干式大肠菌群快检纸片相比具有以下优点：易制备，其加工程序简单，不需特殊设备，一般实验室即可生产，经济成本低；使用方便，结果准确，该纸片属于成品培养基，不需准备盐水、平皿和吸管或注射器等辅助用品，便于携带，操作时省时省力，工作效率高；操作时间短，可减少或避免因加盐水湿润纸片过程中被空气污染引起假阳性的机会；易储存运输，常温保存即可，该产品的保质期至少24个月；特别是该产品的湿度一致，可减少或避免因加盐水过多或过少而引起的结果不易判断或结果不一致或假阴性；因不需要准备盐水、平皿和吸管或注射器等物品，为检验工作者大大减轻了其加工、洗刷、消毒等繁杂工作量。
综上所述，湿式大肠菌群快检纸片具有较大实用价值和推广价值，是一种具有较大经济效益和社会效益的快速成品检测试剂，为消毒食饮具或其它物体表面的大肠菌群的统一快速检测方法的进一步完善提供了科学依据。
【参考文献】
[1]GB14934-94，食（饮）具消毒卫生标准（S).
[2]卫生部食品卫生监督检验所（高庆仪，王林)起草，食（饮）具用大肠菌群快速检验纸片质量标准（S).