利用CRISPR-Cas9敲除Tyr基因制作白化C57BL/6N小鼠

论文摘要

目的为了获得白化的C57BL/6N小鼠,扩大其在皮肤移植和胚胎干细胞方面研究中的应用。方法通过体外设计合成Cas9 mRNA和系列sgRNA （single guide RNAs）,注射到小鼠的受精卵内,破坏合成C57BL/6N小鼠黑色素生成必须的酪氨酸酶（tyrosinase, TYR）基因序列的第1和第2外显子,产生基因突变,获得F0代白化的C57BL/6N小鼠,然后经过重复回交和自交,形成白化C57BL/6N小鼠近交系。结果经过注射两对sgRNA,成功的获得了F0代的白化小鼠,在Tyr基因的第1和第2外显子中均发生了缺失突变,小鼠可以将突变基因传递给后代,并在其后代中产生了纯合的白色C57BL/6N小鼠,最后对白化小鼠突变类型进行了分析。结论通过CRISPR-Cas9技术破坏了小鼠Tyr基因,成功地建立了白化C57BL/6N小鼠近交系,为将来的嵌合体制作、组织移植提供了新的研究工具。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 材料
•     1.1.1 实验动物
•     1.1.2 实验试剂
•   1.2 方法
•     1.2.1 Cas9-mRNA的体外合成
•     1.2.2 sgRNA的体外合成
•     1.2.3 小鼠受精卵的获得
•     1.2.4 小鼠受精卵的显微注射
•     1.2.5 注射后受精卵的胚胎移植
•     1.2.6 新生小鼠和F1代小鼠的基因型鉴定
•     1.2.7 白化C57BL/6N小鼠的繁殖和种系维持
•     1.2.8 白化C57BL/6N小鼠的下颌骨测定
• 2 结果
•   2.1 Cas9 mRNA和 sgRNA的合成
•   2.2 F0代小鼠的获得和鉴定
•   2.3 F1代小鼠的获得和鉴定
•   2.4 F2代小鼠的获得和持续回交
•   2.5 白化C57BL/6N小鼠的下颌骨测定
• 3 结论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 常秋荣,刘丽丽,王会阳,付丽,邢凤英,李垚,陈学进,李善刚

关键词: 白化,基因敲除,小鼠

来源: 中国实验动物学报 2019年04期

年度: 2019

分类: 基础科学,医药卫生科技

专业: 生物学

单位: 上海交通大学医学院实验动物科学部,昆明理工大学灵长类转化医学研究院

基金: 国家重点研发计划(2016YFC1304805),上海市科研计划项目(15140901700)~~

分类号: Q78

页码: 493-500

总页数: 8

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