猪圆环病毒3型Rep蛋白的表达与多克隆抗体制备

论文摘要

为研究猪圆环病毒3型(PCV3)Rep基因在大肠杆菌中表达产物的反应原性和免疫原性,本试验对Rep基因进行原核表达和纯化,鉴定表达产物与PCV3阳性血清的反应性;制备重组Rep蛋白的多克隆抗体,Western blot鉴定多克隆抗体与重组Rep蛋白的特异性识别能力,通过ELISA测定多克隆抗体的效价。结果显示,Rep在大肠杆菌中获得大量表达,且主要以包涵体形式存在,重组蛋白相对分子质量约为32 000,经纯化后得到单一条带。表达的重组Rep蛋白可以与PCV3阳性血清发生反应。制备的大鼠抗Rep血清与表达的重组Rep蛋白发生特异性反应,且效价大于1∶32 000。表明本试验表达的Rep具有良好的免疫原性和反应原性,为PCV3的ELISA诊断试剂盒研制提供依据。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 试剂及材料
•   1.2 PCV-3 Rep基因的克隆
•   1.3 重组质粒pET30a（+）-Rep的构建
•   1.4 重组质粒pET30a（+）-Rep的表达与表达产物的鉴定
•   1.5 重组Rep蛋白可溶性表达分析和纯化
•   1.6 重组Rep蛋白多克隆抗体的制备
•   1.7 多克隆抗体反应性和滴度检测
• 2 结果
•   2.1 目的基因的扩增
•   2.2 重组质粒pET30a（+）-Rep的鉴定
•   2.3 表达产物的鉴定
•     2.3.1 SDS-PAGE分析
•     2.3.2 Western blot分析
•   2.4 重组Rep蛋白可溶性表达分析和纯化分析
•     2.4.1 重组Rep蛋白可溶性表达分析
•     2.4.2 重组Rep蛋白纯化分析
•   2.5 多克隆抗体的反应性和滴度检测
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 连凯琪,周玲玲,张明亮,张杰,王英杰,宋玉伟,王双山

关键词: 蛋白,包涵体,原核表达,蛋白纯化

来源: 中国兽医学报 2019年11期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 安阳工学院生物与食品工程学院/河南省动物疫病防控与营养免疫院士工作站/河南省兽用生物制品研发与应用国际联合实验室

基金: 国家自然科学基金青年基金资助项目(31802170),河南省高等学校重点研发资助项目(19B230001),安阳工学院博士科研启动基金资助项目(BSJ2016008)

分类号: S852.651

DOI: 10.16303/j.cnki.1005-4545.2019.11.02

页码: 2107-2111

总页数: 5

文件大小: 632K

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