公共引物论文_段欠欠

导读:本文包含了公共引物论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:引物,脑膜炎,白血病,基因,口腔,细菌性,论文。

公共引物论文文献综述

段欠欠^[1]（2015）在《公共引物介导的多重PCR技术在细菌性脑膜炎诊断中的应用研究》一文中研究指出第一部分：一种高效筛选公共引物的方法目的：设计一种筛选公共引物的方法。方法：将3条正向引物和3条反向引物序列连接于一段人类β-actin基因序列两端,将连接片段导入pMD19-T载体构建重组质粒,利用此质粒模板进行9对引物的敏感性检测。步骤包括：引物设计、插入序列的选择、酶切转化、质粒提取、敏感性检测。结果：区别9对公共引物的敏感性,筛选出灵敏性较高的公共引物对。结论：该方法操作简单、高效和快速,可用于公共引物的高效筛选。第二部分：筛选检测细菌性脑膜炎的公共引物目的：筛选出一条适用于细菌性脑膜炎检测的多重PCR体系的公共引物。方法：通过特异性比较,挑选出3条公共引物。运用高效筛选公共引物的方法,对3对公共引物进行敏感性检测。结果：UP1、UP2和UP3的特异性均较高,但敏感性分别为10~2,10~6,10~3拷贝。结论：本次实验筛选出的UP1可优先用于多重PCR体系的构建。第叁部分：细菌性脑膜炎多重PCR检测体系的设计与鉴定目的：以导致细菌性脑膜炎的常见六种细菌为检测靶标,建立新型具有高通量的“公共引物”介导的多重PCR检测体系,研发适用于临床的细菌性脑膜炎的检测试剂盒。方法：包括叁部分：(1)质粒模板的构建：对目的模板和载体双酶切以后连接转化,重组质粒进行菌落PCR和测序鉴定；(2)多重体系的建立：设计特异性引物和嵌合引物；确定扩增体系和反应条件；体系特异性检测；体系敏感性检测；(3)临床标本的检测：提取CSF基因组DNA,用构建的UP-M-PCR体系进行检测。结果：嵌合引物和UP-M-PCR体系扩增靶标序列时无非特异性带产生,S. agalactiae, L. monocytogenes, S. pneumoniae, N. meningitis, H. influenza和S.aureu的多重体系敏感性检测结果分别为10~2,10~3,10,10~2,10~2和10~4拷贝。运用UP-M-PCR体系进行临床标本的检测时,成功检出3例标本。结论：本课题构建的UP-M-PCR检测体系具有较高的特异性和敏感性,可用于检测细菌性脑膜炎病原体的检测,具有临床应用价值。(本文来源于《苏州大学》期刊2015-11-01）

胡颖熹^[2]（2015）在《一种基于公共引物介导的白血病分子诊断技术研究》一文中研究指出目的:本课题利用公共引物介导的多重RT-PCR技术,以常见的白血病融合基因作为检测靶标,目的在于研究建立新型的、系统的、提高PCR检测通量的方法体系,研发适用于临床的常见白血病融合基因检测试剂盒。方法:本课题包括设计公共引物的设计与鉴定、重迭延伸法构建质粒模板、多重检测体系的建立和临床样本检测。(1)用Primer Premier5.0软件以非人基因组为模板进行基础公共引物的设计;采用NCBI网站Primer-blast功能进行公共引物与人基因组、人c DNA的特异性的理论比对;理论设计和筛选的公共引物分别与人基因组和人c DNA进行特异性温度梯度PCR实验验证;将实验验证后的公共引物序列连接到人类一段GAPDH基因的两端,插入到载体中构建质粒,利用含公共引物的质粒模板检测公共引物扩增的敏感性;(2)文献检索和数据库筛选本课题多重体系的白血病融合基因检测靶标;通过重迭延伸法将位于人c DNA上不同位置的两个基因片段通过PCR技术扩增获得后连接在一起,插入载体构建包含检测靶标融合基因的突变型质粒模板:BCR/ABL e1a2型和e13a2型、PML/RARαL型和S型、E2A/PBX1 I型、AML1/ETO、E2A/HLF、TEL/AML1、TEL/ABL和CBFβ/MYH11 A型,另有一包含SIL/TAL1型融合基因的质粒模板通过直接合成法获得;(3)利用Primer Premier5.0设计检测靶标基因特异性引物,将公共引物连接在靶标特异引物的5’末端构成嵌合引物,利用NCBI网站Primer-blast功能进行嵌合引物的比对、修改和筛选,同时利用MFE2.0软件进行体系多重引物的比对和修改;本课题针对常见的白血病融合基因设计了2个多重检测体系,体系1针对BCR/ABL、AML1/ETO、PML/RARα和E2A/PBX1融合基因型;体系2在体系1基础上添加检测靶标E2A/HLF、TEL/AML1、TEL/ABL、CBFβ/MYH11和SIL/TAL1;通过构建的包含白血病融合基因的突变型质粒模板进行体系特异性和敏感性检测。将PCR扩增得到的产物用琼脂糖凝胶电泳检测后通过紫外凝胶成像系统分析结果,进行多重体系的构建和优化;(4)收集正常人及白血病患者的外周血,根据TRIzol一步抽提法获得人total RNA,6随机引物和MMLV逆转录酶进行逆转录反应获得c DNA;采用本课题构建的多重体系进行临床标本的检测,同时对比临床检测结果分析和评价公共引物介导的多重RT-PCR体系。结果:本课题成功建立了筛选公共引物的方法体系;设计了叁对公共引物,通过与人基因组、人c DNA的理论和PCR实验比对,结果均无产物;其中一对公共引物与包含公共引物序列的质粒载体进行敏感性PCR检测时,检测结果可达100个拷贝,选取该公共引物用于课题后期构建多重检测体系。采用重迭延伸技术成功构建了十个包含白血病融合基因的突变型质粒模板;本课题设计的两个针对常见白血病融合基因的多重检测体系均可特异、敏感地检测白血病融合基因。体系1可有效检测针对BCR/ABL、AML1/ETO、PML/RARα和E2A/PBX1这4种融合基因的6个突变型质粒模板,即BCR/ABL e1a2型、PML/RARαS型、E2A/PBX1 I型、BCR/ABL e13a2型、PML/RARαL型和AML1/ETO型,其敏感性检测结果依次为103,102,102,10,103和102拷贝。体系2针对BCR/ABL、AML1/ETO、PML/RARα、E2A/PBX1、E2A/HLF、TEL/AML1、TEL/ABL、CBFβ/MYH11和SIL/TAL1这9种融合基因的11个突变型检测模板,即BCR/ABL e13a2型、TEL/AML1型、BCR/ABLe1a2型、PML/RARα的L型、PML/RARαS型、AML1/ETO、E2A/PBX1 I型、E2A/HLF型、TEL/ABL型、CBFβ/MYH11A型和SIL/TAL1型,其敏感性检测结果依次为:102,102,103,103,103,103,103,103,103,104,104拷贝。运用这两个多重体系对55例临床标本进行检测时,检测结果均与医院临床诊断结果一致。结论:本课题构建的基于公共引物介导的多重RT-PCR检测体系可有效提高多重PCR检测通量,对常见白血病融合基因的临床诊断具有较高的敏感性和特异性。(本文来源于《苏州大学》期刊2015-04-01）

高文涛,杨淑华,欧阳喈^[3]（1998）在《公共引物介导的PCR研究口腔癌中人乳头瘤病毒感染》一文中研究指出本研究利用两对来源于人乳头瘤病毒Ｌ１和Ｅ１区高度保守序列引物ＧＰＬ１和ＧＰＥ１，对２０例福尔马林固定石蜡包埋组织进行ＰＣＲ分析，结果表明：以ＧＰＬ１为引物２０例口腔癌中１４例ＨＰＶ阳性；而以ＧＰＥ１为引物只有５例检测出存在ＨＰＶ感染。结果提示：ＧＰＬ１介导的ＧＰ－ＰＣＲ可有效地对福尔马林固定石蜡包埋口腔癌组织进行病毒感染流行病学回顾研究。(本文来源于《现代口腔医学杂志》期刊1998年03期）

公共引物论文开题报告

（1）论文研究背景及目的

此处内容要求：

首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。

写法范例：

目的:本课题利用公共引物介导的多重RT-PCR技术,以常见的白血病融合基因作为检测靶标,目的在于研究建立新型的、系统的、提高PCR检测通量的方法体系,研发适用于临床的常见白血病融合基因检测试剂盒。方法:本课题包括设计公共引物的设计与鉴定、重迭延伸法构建质粒模板、多重检测体系的建立和临床样本检测。(1)用Primer Premier5.0软件以非人基因组为模板进行基础公共引物的设计;采用NCBI网站Primer-blast功能进行公共引物与人基因组、人c DNA的特异性的理论比对;理论设计和筛选的公共引物分别与人基因组和人c DNA进行特异性温度梯度PCR实验验证;将实验验证后的公共引物序列连接到人类一段GAPDH基因的两端,插入到载体中构建质粒,利用含公共引物的质粒模板检测公共引物扩增的敏感性;(2)文献检索和数据库筛选本课题多重体系的白血病融合基因检测靶标;通过重迭延伸法将位于人c DNA上不同位置的两个基因片段通过PCR技术扩增获得后连接在一起,插入载体构建包含检测靶标融合基因的突变型质粒模板:BCR/ABL e1a2型和e13a2型、PML/RARαL型和S型、E2A/PBX1 I型、AML1/ETO、E2A/HLF、TEL/AML1、TEL/ABL和CBFβ/MYH11 A型,另有一包含SIL/TAL1型融合基因的质粒模板通过直接合成法获得;(3)利用Primer Premier5.0设计检测靶标基因特异性引物,将公共引物连接在靶标特异引物的5’末端构成嵌合引物,利用NCBI网站Primer-blast功能进行嵌合引物的比对、修改和筛选,同时利用MFE2.0软件进行体系多重引物的比对和修改;本课题针对常见的白血病融合基因设计了2个多重检测体系,体系1针对BCR/ABL、AML1/ETO、PML/RARα和E2A/PBX1融合基因型;体系2在体系1基础上添加检测靶标E2A/HLF、TEL/AML1、TEL/ABL、CBFβ/MYH11和SIL/TAL1;通过构建的包含白血病融合基因的突变型质粒模板进行体系特异性和敏感性检测。将PCR扩增得到的产物用琼脂糖凝胶电泳检测后通过紫外凝胶成像系统分析结果,进行多重体系的构建和优化;(4)收集正常人及白血病患者的外周血,根据TRIzol一步抽提法获得人total RNA,6随机引物和MMLV逆转录酶进行逆转录反应获得c DNA;采用本课题构建的多重体系进行临床标本的检测,同时对比临床检测结果分析和评价公共引物介导的多重RT-PCR体系。结果:本课题成功建立了筛选公共引物的方法体系;设计了叁对公共引物,通过与人基因组、人c DNA的理论和PCR实验比对,结果均无产物;其中一对公共引物与包含公共引物序列的质粒载体进行敏感性PCR检测时,检测结果可达100个拷贝,选取该公共引物用于课题后期构建多重检测体系。采用重迭延伸技术成功构建了十个包含白血病融合基因的突变型质粒模板;本课题设计的两个针对常见白血病融合基因的多重检测体系均可特异、敏感地检测白血病融合基因。体系1可有效检测针对BCR/ABL、AML1/ETO、PML/RARα和E2A/PBX1这4种融合基因的6个突变型质粒模板,即BCR/ABL e1a2型、PML/RARαS型、E2A/PBX1 I型、BCR/ABL e13a2型、PML/RARαL型和AML1/ETO型,其敏感性检测结果依次为103,102,102,10,103和102拷贝。体系2针对BCR/ABL、AML1/ETO、PML/RARα、E2A/PBX1、E2A/HLF、TEL/AML1、TEL/ABL、CBFβ/MYH11和SIL/TAL1这9种融合基因的11个突变型检测模板,即BCR/ABL e13a2型、TEL/AML1型、BCR/ABLe1a2型、PML/RARα的L型、PML/RARαS型、AML1/ETO、E2A/PBX1 I型、E2A/HLF型、TEL/ABL型、CBFβ/MYH11A型和SIL/TAL1型,其敏感性检测结果依次为:102,102,103,103,103,103,103,103,103,104,104拷贝。运用这两个多重体系对55例临床标本进行检测时,检测结果均与医院临床诊断结果一致。结论:本课题构建的基于公共引物介导的多重RT-PCR检测体系可有效提高多重PCR检测通量,对常见白血病融合基因的临床诊断具有较高的敏感性和特异性。

（2）本文研究方法

调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。

观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。

实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。

文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。

实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。

定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。

定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。

跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。

功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。

模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。