山西医科大学第一医院
摘要：目的研究软骨支架移植中重叠面积及厚度对移植成活率影响，为临床鼻整形鼻支架的改进和鼻整形的发展有很好的理论支持。方法用免疫组化CD34染色剂PAS染色法研究移植物不同阶段血管生长情况及软骨基质的量及代谢情况间接反映软骨成活治疗。结果（1）随着支架重叠面积的增加，移植物毛细血管数量逐渐减少。（2）随着支架重叠面积的增加，移植物软骨基质逐渐减少（3）不同实验组移植物8周以后差别较大，毛细血管及软骨基质量与支架面积存在相关性（P<0.05）。结论软骨支架重叠面积及厚度影响软骨移植后期毛细血管数量及软骨基质代谢，一定阶段差异有统计学意义。
关键词：软骨；基质；鼻支架
[abstract]objectivetostudythecartilagetransplantationintheoverlappingareaandthicknessofthegraftsurvivalrateinfluence，forimprovementofclinicalrhinoplastynasalstentsandhaveverygoodtheoreticalsupportforthedevelopmentofrhinoplasty.MethodbyusingtheimmunohistochemicalstainedwithCD34stainingagentmethodresearchgraftatdifferentstagesbloodvesselgrowthsituationandtheamountofcartilagematrixandmetabolismindirectlyreflectthecartilagesurvivaltreatment.Results（1）withtheincreaseofstentoverlaparea，graduallyreducegraftcapillarynumber.（2）withtheincreaseofstentoverlaparea，graftcartilagematrixgraduallyreduce（3）differentexperimentalgraft8weeksafterthedifferenceisbigger，thecapillariesandqualityofcartilagematrixandstentareacorrelation（P<0.05）.Conclusioncartilageoverlapareaandthicknessofcartilagetransplantationlatecapillarynumberandmetabolismofcartilagematrix，acertainphasedifferencewasstatisticallysignificant.
[keywords]cartilage.Matrix；Thenasalbracket
无论是鼻再造术，鼻畸形矫正术，鼻缺损修复术还是短鼻延长术都需要用到鼻部皮肤软组织的支撑--鼻支架，鼻支架材料的选取、制备以及支架的植入等都是鼻整形术能否成功的关键。鼻支架材料的发展经历了很多的转型，人工合成的固体植入材料以医用硅橡胶和聚四氟乙烯膨体为代表，此种材料性能较好，但会引起组织排斥反应、支架外漏、组织变形等弊端[1]。随着医学的发展，自体组织、异体组织被重视起来，人工合成生物材料会引起的异物反应、继发感染等[2]。自体肋软骨移植及鼻中隔软骨移植应用越来越多，软骨移植过程支架的形状及厚度直接影响后期软骨的成活及远期鼻整形成功的关键，软骨移植后的愈合对血管有明显的依赖性，而且愈合速度随着软骨细胞与血管距离的增加减慢。移植体的不同部位在愈合速度上也不相同[3]。因此，移植物厚度和移植物支架的重叠面积在其成活中的影响作用甚大。研究支架的厚度及重叠面积、减少其厚度才能提高组织的成活率和远期的成活质量[4]。但是对于鼻支架这个起支撑作用的支架来说，维持其后期稳定性还是最重要的，所以本课题从支架间重叠接触面积和支架厚度上在不影响支架稳定性的前提下，来研究支架制备的理论基础。
1、材料方法：
1.1材料：以96只新西兰大白兔为实验对象，在其耳廓中央对称部位取耳软骨组织，设计成大小约2cm×2cm移植物2块.按不同的重叠面积分成5组软骨移植组（20%、50%、80%、100%、）。以100%（移植软骨背、腹侧均重叠）作为对照组，将移植物埋于兔耳软骨膜对称部位，于术后4周、8周、16周取出移植物HE染色：观察毛细血管成活、计数毛细血管密度，PAS及AKP染色后，用显微分光光度计对其处理的切片进行定量测定并分析其重叠面积与其细胞活力、代谢情况的相关性。
1.2方法HE染色：观察毛细血管成活、计数毛细血管密度。分别于术后4周、8周、16周、用0.3ml/100g乌拉坦腹腔注射麻醉动物，按照免疫驻华CD34染色步骤进行，光学显微镜下于真皮以及皮下肉芽组织处（10×40）随机选取6个视野观察毛细血管横断面数量，并求其平均值。PAS染色后，用显微分光光度计对其处理的切片进行定量测定，测量条件：I：7A；V：800V；f：25X；n：10X[5]。测定光栏：0.6nm。测定波长：PAS染色：λ=560nmAKP染色：λ=440nm，统计学处理：采用SPSS13.0软件包处理数据以表示。不同组同一时相两组比较采用t检验，三组之间的比较采用单因素方差分析，p<0.05认为差异有统计学意义。
2、结果
2．1.HE染色实验组软骨细胞散在，胞浆嗜碱性，软骨基质嗜伊红。近软骨表面为体小呈扁椭圆形的幼稚软骨细胞，深部软骨细胞体积渐大，呈圆或椭圆形，胞核清晰圆。重叠20%及50%组移植后周各期标本血管生长较快如图1，8周以后出现明显变化，软骨结构完整，未见退变，无宿主组织侵入，实验数据差异有统计学意义（P<0.05）。（见表1）
2.2．PAS染色实验组软骨基质均匀呈深红色，胞浆及软骨陷窝着色较淡，移植后4周软骨细胞和基质染色普遍加深，第8周时软骨基质染色变淡，部分软骨细胞中央部染色减弱或消失。第16周时逐渐恢复，实验组，随着软骨重叠面积的增加，移植物骨细胞和基质染色均减少。
3讨论
软骨移植后的愈合对血管有明显的依赖性，而且愈合速度随着软骨细胞与血管距离的增加减慢。移植体的不同部位在愈合速度上也不相同，一般在边缘区域退变和再生较快，血管数量也较多，为移植软骨提供良好的血运可以保证移植软骨的成活[。因此，移植物厚度和移植物支架的重叠面积在其成活中的影响作用甚大。在鼻支架的制备过程中只有尽量减少移植物支架之间重叠面积、减少其厚度才能提高组织的成活率和远期的成活质量。但是对于鼻支架这个起支撑作用的支架来说维持其后期稳定性还是最重要的，软骨移植过程支架的形状及厚度直接影响后期软骨的成活及远期鼻整形成功的关键，软骨移植后的愈合对血管有明显的依赖性，而且愈合速度随着软骨细胞与血管距离的增加减慢。软骨细胞合成和分泌蛋白多糖，组成软骨基质的主要成份，对软骨细胞的存活具有重要的生物学意义。软骨细胞与其它体细胞具有相同的抗原性，软骨基质中的蛋白多糖对软骨细胞构成了一道屏障，阻挡了宿主的免疫系统对软骨细胞膜抗原的接触和致敏。蛋白多糖中的核心蛋白虽具有抗原性，但其肤链上的抗原决定簇被无抗原性的酸性糖胺多糖所遮盖，而使软骨成为一种弱抗原性组织，所以蛋白多糖含量的高低对移植软骨在宿主体内能否存活极为重要，研究软骨基质的量间接反应软骨细胞活性，随诊软骨移植物重叠面积的增大，软骨成活率逐渐减小，移植物后期毛细血管数量逐渐减少，但成活率仍然较高，软骨移植过程支架的形状及厚度直接影响后期软骨的成活及远期鼻整形成功的关键，软骨移植后的愈合对血管有明显的依赖性，而且愈合速度随着软骨厚度增加血管密度明显减低，在鼻支架的制备过程中只有尽量减少移植物支架之间重叠面积、减少其厚度才能提高组织的成活率和远期的成活质量。
参考文献：
[1]MoseleyR，WaddingtonRJ，EmberyG.Hyaluronananditspotentialroleinperiodontalhealing[J].DentUpdate，2002，29（3）：144.
[2]LANGERR，VACANTIJ.Tissueengineering[J].Science，1993，260：920-926.
[3]TakahashiY，LiL，KamiryoM，etal.HyaluronanfragmentsinduceendothelialcelldifferentiationinaCD44-andCXCL1/GRO1-dependentmanner.JBiolChem，2005，280（25）：24195-24204.
[4]ChajaraA，RaoudiM，DelpechB，etal.Inhibitionofarterialcellsproliferationinvivoinjuredarteriesbyhyaluronanfragments.Atherosclerosis，2003，171（1）：l5-19.
[5]CLELANDJL，DUENASET，PARKA，etal.Developmentofpoly（D，L-Lactide-co-glycolide）microspheresformulationcontainingrecombinanthumanvascularendothelialgrowthfactortopromotelocalangiogenesis[J].JControlledRelease，2001，72：13-24.
[6]SCHEKRM，HOLLISTERSJ，KREBSBACHPH.Deliveryandprotectionofadenovirusesusingbiocompatiblehydrogelsforlocalizedgenetherapy[J].MolTher，2004，9：130-138.
[7]WestDC，HampsonIN，ArnoldF，etal.Angiogenesisinducedbydegradationproductsofhyaluronicacid.Science，1985，228（4705）：1324-1326.
[8]NoblePW.Hyaluronananditscatabolicproductsintissueinjuryandrepair.MatrixBiol，2002，21（1）：25-29.
基金项目：山西省基础研究计划项目：项目编号20120110442