王晓临1张宝琛2
(1.青海大学附属医院肝胆胰外科810001;2.中国科学院西北生物研究所810001)
【摘要】目的为了使青海沙棘三宝胶囊得到广泛的应用,进行青海沙棘三宝胶囊食品安全性毒理学试验研究。方法依据GB15193.1-2003《食品安全性毒理学评价程序和方法》进行急性毒性试验、三项遗传毒性试验和30天喂养试验。结论青海沙棘三宝胶囊无毒、无任何副作用。
【中图分类号】R96【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2014）20-0244-02
青海沙棘三宝胶囊由沙棘、山楂、枸杞等组成,甘草浸膏少许,由青海金诃藏药有限公司生产，青海沙棘三宝胶囊的安全性毒理学试验研究以雄性二级昆明种小白鼠和Wistar大鼠为模型，进行了青海沙棘三宝胶囊的安全性毒理学评价。
1材料与方法
1.1试验材料
1.1.1处方:沙棘三宝胶囊(由沙棘、山楂、枸杞等组成,甘草浸膏少许,由青海金诃藏药有限公司生产，共生产10000粒，每粒含生药2.5g，胶囊每粒重0.7g)。
1.1.2生产工艺:取处方中沙棘及粉碎成细粉,加人甘草浸膏混合制粒,然后烘干,填充胶囊,质量检查,分装,包装即得。
青海沙棘三宝胶囊提取液，含共轭亚油酸(c9tlICLA，33.15％；10c12CLA，33.90％：其他CLA，3.50％)，由甘肃省轻工研究所萃取。依人体推荐剂量为0.6g／kg为依据，设定各试验项目、各试验组的大、小鼠饲喂青海沙棘三宝胶囊提取液，分别为2.5、5、10g/kg，相当于人体用量的20、50、100倍。
1.1.3试验动物:二级昆明种小白鼠(简称小鼠)，医动字第03-301号；二级Wistar大鼠(简称大鼠)，医动字第03—301号。均由青海省地方病研究所试验动物中心提供。
以小鼠为材料进行毒理学试验，以大鼠为材料进行生理生化试验。部分试验由中国科学院西北生物研究所协助完成。
1.2小鼠急性毒性试验
选择小鼠20只，雄性和雌性各10只，体重为20-25g。每天两次灌胃给予受试物，剂量为20g／kg，观察14d，记录动物中毒表现及死亡情况。
1.3小鼠遗传毒性试验
1.3.1艾姆斯氏(Ames)试验
用遗传学方法培植一种不能自行制造组氨酸的鼠伤寒沙门氏菌的变异体，根据毒性测定结果，试验设250、500、2500、5000ug／，共4个剂量，同时设立自发回变组、溶剂对照组和阳性对照组。阳性对照组试剂分别为：(1)疟的平，250ug／皿；(2)正丁霉素，50ug／皿；(3)叠氮钠，100g/ml皿；(4)丝裂霉素，0.5ug／皿；(5)2-乙酰氨基芴(2-AAF)，50mg#kg-1#d-1。试验按照平板渗入法进行，每个组别设三个平皿，在加S-9与不加S-9混合液的条件下于37℃培养48h，记数每皿回变菌落数。
1.3.2小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验
选择体重20～25g小鼠50只，随机分为5组，每组10只，雌雄各半。采用间隔24h两次经口灌胃法试验，末次给予受试物后6h处死动物，常规制片。每只动物镜检l000个嗜多染红细胞，记录徽核细胞数，计算微核率(‰)。
1.3.3小鼠精子畸形试验和精细胞染色体畸变试验
选择体重25～35g雄性小鼠25只，随机分为5组。每组5只。灌胃给予受试物，连续5d，首次灌胃后第35d处死动物，常规制片。每只动物记数l000个结构完整的精子，记录畸变类型和数量，计算精子畸形率(％)。
选择体重20—25g雄性小鼠25只，随机分为5组。每组5只。3个试验组中受试物剂量分别为2.50、5.00、10.00g／kg，另设阴性对照组和阳性对照组(环磷酰胺，40mg／kg.bw)。
灌胃给予受试物，连续5d，首次灌胃后第15d处死动物，常规制片。每只动物记数100个精细胞中期分裂相，记录畸变类型和数量，计算染色体畸变率(％)。
1.4大鼠灌胃试验(30天)
1.4.1试验方法
选用体重40——60g断乳大鼠80只，随机分为4组，每组20只，雌雄各半。3个实验组中受试物剂量分别为2.50、5.00、10.00g／kg，将受试物每天经口灌胃给予实验动物。对照组饲喂基础饲料并同时灌胃给予葵花籽油。单笼喂养，自由饮食，每周称重一次并记录大鼠进食量、体重，连续观察30d。
1.4.2大鼠试验观察和指标测定
观察大鼠的一般表现、体重、食物利用率(％)。
病理解剖：脏器系数、观察及病理组织检查(肝、肾、脾、胃及十二指肠、睾丸及卵巢)。
2结果
2.1小鼠急性毒性测定结果
灌胃给予受试物后，两种性别的小鼠均未见明显中毒症状，14天内动物无死亡。因此认为，该受试物对两种性别小鼠的急性毒性半致死浓度LD50均大于20g／kg。根据急性毒性分级标准，该青海沙棘三宝胶囊属实际无毒物质。
2.2小鼠遗传毒性测定结果
2.2.1Ames试验结果
第一次和第二次试验结果表明，受试物备剂量组回变菌落数均未超过自发回变菌落数的2倍，亦无剂量一反应关系，说明在加与不加S-9时受试样品对鼠伤寒沙门氏菌TA97、TA98、TAl00、TAl02等株试验菌株均未呈现毒性。
2.2.2小鼠骨髓嗜多染红细胞微核测定结果
对小鼠骨髓嗜多染红细胞微核测定结果。表明，受试物各剂量组微核率与阴性对照组之间无显著性差异(P＜0.05)，而环磷酰胺阳性对照组与阴性对照组之间有极显著差异(P<0.01)。表明，受品对小鼠骨髓嗜多染红细胞微核未产生作用。
2.2.3小鼠精子畸形和精细胞染色体畸变测定结果
对小鼠精子畸形和精细胞染色体畸变测定结果。可见，受试物各剂量组小鼠精子畸形率与阳性对照组之间无显著性差异(P>0.05),而环磷酰胺阳性对照组与阴性对照组之间有极显著差异(P<0.01)。说明，该受试样品没有致小鼠精子畸形作用。
2.3大鼠喂养试验测定结果
2.3.1大鼠的一般表现及体重、食物利用率测定结果
在大鼠喂养30天过程中观察其行为，表明，大鼠未出现拒食现象，生长活动正常。各试验组动物进食量、食物利用率同对照组之间亦无显著性差异(P>0.05)。说明受试样品对大鼠影响除体重降低外其它生理活动无异常。
2.3.2大鼠血常规及生化指标测定结果
各试验组的血红蛋白、红细胞记数、白细胞计数及其分类、谷丙转氨酢、尿素氮、肌酐、胆固醇、甘油三酯、血糖、总蛋白、白蛋白等指标均地正常范围之内，与阴性对照组之间均无显著差异(P＞0.05)。
2.3.3大鼠组织病理学检查结果
喂养30天后的大鼠进行组织病理学检查结果表明，观察各试验组，未发现异常，解剖时亦未发现膀胱、肝总管结石，脏器系数未见异常。镜下观察对照组和各试验组动物的肝、脾、肾、十二肠、睾丸或卵巢等，均未见模型的病理改变。说明受试样品对大鼠内脏及其它组织未造成病理改变。
3结语
本研究表明，以青海沙棘三宝胶囊喂养试验小鼠、大鼠，经过1个月的饲喂试验，组织病理学和血液学检查表明，青海沙棘三宝胶囊无毒、无任何副作用。通过青海沙棘三宝胶囊的安全性毒理学试验研究，为青海沙棘三宝胶囊开发成为功能食品和药品提供科学依据。