导读:本文包含了原核显微注射论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:小鼠,转基因,染色体,精子,体外,囊胚,细胞。
原核显微注射论文文献综述
李兴[1]（2017）在《利用原核显微注射技术制备HIF-1α转基因小鼠及其表达检测》一文中研究指出HIF-1α(hypoxia-inducible factor-1 alpha,HIF-1α)即乏氧诱导因子-1α 是 HIF-1异源二聚体结构的一个亚基。HIF-1是PAS(PER-ARNT-SIIM)转录因子家族的成员之一,主要通过与靶基因结合进而调节靶基因的转录来发挥功能。其作用主要集中于介导机体的缺氧缺血等适应性反应。而HIF-1α亚基是HIF-1转录因子的活性调节亚基,它决定了 HIF-1转录因子具有活性并行使其功能。血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor VEGF)是血小板衍生性生长因子家族的成员之一,它被证明具有促进毛囊发育和毛发生长的作用,同时也被证明是HIF-1α的靶基因之一。本实验利用CISPR/Cas9基因打靶系统将HIF-1α基因整合到小鼠Rosa26基因位点上来探讨HIF-1α对毛囊发育等的影响。本实验制作转基因小鼠的方法为原核显微操作技术。利用该方法获得HIF-1α转基因小鼠之后,首先利用PCR来筛选阳性小鼠;之后通过Real-time PCR的方法检测转基因小鼠皮肤组织中HIF-1α、VEGF的mRNA的相对表达量;再通过Western Blot检测转基因小鼠皮肤组织中HIF-1α、VEGF的蛋白表达水平。1、HIF-1α过表达载体的构建及功能的检验研究HIF-1α对毛囊发育与生长的关系则需研究HIF-1α与其靶基因VEGF的关系,验证HIF-1α的过表达是否真正引起其靶基因VEGF、eNOS的变化,是否在HIF-1α/VEGF/VEGFR2的信号通路中起作用。本实验首先从小鼠基因组中克隆出HIF-1α基因并成功构建了过表达载体。将该载体通过电穿孔转染法成功转入小鼠胎儿成纤维细胞(MEF)中,通过实时定量PCR的检测,以非转基因MEF为对照组,转基因MEF中基因HIF-1α的mRNA的表达量为对照组的17.91倍,VEGF mRNA的表达量为对照组的15.49倍,VEGFR2mRNA的表达量为对照组的6.13倍,eNOSmRNA的表达量为对照组的2倍;通过Western Blot的检测,转基因MEF中HIF-1α的蛋白表达量为对照组的2.41倍,VEGF的蛋白表达量为对照组的1.79倍。说明过表达HIF-1α确实引起了其靶基因VEGF,eNOS的上调,也同时引起VEGFR2的上调。2、HIF-1α基因定点整合载体的构建本实验利用CISPR/Cas9基因打靶系统进行基因编辑,因此需要叁个载体:Cas9载体、sgRNA载体以及HIF-1α同源重组载体。本实验选取的靶位点为Rosa26第一内含子1096bp处,由于该位点之前在本实验室已实现过同源重组插入目的基因的先例因此Cas9载体、sgRNA载体直接使用本实验室存留载体。同时通过扩增上游同源臂、人源K14启动子、目的基因HIF-1α并加入合适酶切位点最终成功构建HIF-1α同源重组打靶载体。经过一系列酶切鉴定正确后再经过测序该载体同源性达到100%,因此认定打靶载体构建成功。3、定点整合载体相关细胞检测本实验主要使用电穿孔转染法将Cas9载体、sgRNA载体以及HIF-1α同源重组载体导入MEF中,培养48h之后提取基因组。本实验筛选出两对引物:一对用来检测目的基因HIF-1α是否成功整合到细胞基因组中即检测随机整合引物;另一对用来检测目的基因是否如预期插入靶位点。以转染后的细胞基因组为模板用以上两对引物进行PCR反应,反应产物条带大小符合预期,经测序正确。以上两对引物可用于后续进行转基因小鼠检验。4、转基因小鼠的制备本实验主要通过原核注射的方法制备转基因小鼠,该方法首先需要准备注射用外源基因,其次即原核时期受精卵的获得,然后进行注射,最后完成胚胎移植。本实验一共制备了原代小鼠56只,经PCR鉴定其中有2只HIF-1α随机整合阳性小鼠,并未得到定点整合的小鼠。为后期研究HIF-1α基因与毛囊发育的关系构建了转基因小鼠模型和相关实验材料。5、HIF-1α转基因小鼠的表达水平检测本实验对已筛选出的两只随机整合阳性小鼠661号、664号的皮肤组织进行HIF-1α的表达水平的检测。该实验以同批非转基因小鼠682号为对照,首先通过实时定量PCR进行mRNA水平的检测,以α-tublin为内参基因,检测结果为661号小鼠的HIF-1α mRNA表达量是对照小鼠的7.75倍,VEGF mRNA的表达量是对照小鼠的29.62倍;664号小鼠的HIF-1α mRNA表达量是对照小鼠的3.41倍,VEGF mRNA的表达量是对照小鼠的2.91倍。然后通过Western Blot进行蛋白水平的表达的检测,同样以α-tublin为内参基因,实验结果显示661号小鼠的HIF-1α蛋白表达量是对照小鼠的2.02倍,VEGF蛋白表达量是对照小鼠的1.72倍;664号小鼠的HIF-1α蛋白表达量是对照小鼠的1.84倍,VEGF蛋白表达量是对照小鼠的1.54倍。(本文来源于《内蒙古大学》期刊2017-04-20）
王新[2]（2016）在《以原核显微注射技术建立Csnk1ε转基因小鼠及其表达检测》一文中研究指出酪蛋白激酶1 (Casein Kinase 1, Csnk1)属于丝／苏氨酸蛋白激酶,已经在哺乳动物中发现并得到了7个Csnkl的同工酶,分别是Csnkla、Csnk1b、Csnklg1、 Csnk1g2、Csnklg3、Csnk1d和Csnkl ε。相关研究表明,Csnkl ε的碱基缺失或突变可能对毛囊发育和毛发生长具有一定影响。CRISPR/Cas系统是一种来源于细菌获得性免疫的由RNA指导Cas蛋白对靶向基因进行修饰的技术。为深入研究Csnkl ε对毛囊的作用,本实验设计以CRISPR/Cas9系统介导使得Csnklε定点整合于小鼠Rosa26位点上,再通过原核显微注射技术技术,制备Csnklε转基因小鼠。通过PCR及Southern Blot检测方法鉴定阳性小鼠,并通过Real-time PCR, Western Blot方法对转基因阳性小鼠进行表达检测。1、sgRNA载体及打靶载体构建本实验通过麻省理工学院的CRISPR Design软件设计5对sgRNA,以sgRNA-T2为模板,扩增得到相应的U6启动子和sgRNA骨架载体,最终构建得到完整的sgRNA载体。打靶载体的构建是以人源K14启动子,即皮肤特异性启动子启动目的基因,经测序得知其同源性为98%。为了确保该启动子的启动功能,本实验构建了以该启动子启动的红色荧光蛋白表达载体pK14-DsRed,用以下一步细胞水平检测。再利用同源重组技术原理在已经确定的靶位点,即小鼠Rosa26第一内含子处,分别向上、下各取lkb左右作为打靶载体的上、下游同源臂,最终将打靶载体构建成功。2、细胞水平的相关检测本研究主要利用电穿孔转染法将红色荧光蛋白表达载体pCMV-DsRed导入MEF中,筛选出适应于MEF的最优转染条件,即160V/5Ms。利用该转染条件将Cas9载体和sgRNA载体共同转染于MEF中,培养48h后提取基因组,通过设计跨靶位点的PCR引物进行PCR扩增,扩增产物经杂交后再通过Surveyor突变检测试剂盒进行鉴定,从而确定sgRNA敲除位点为Rosa26基因的第一内含子的第1096bp处,其敲除效率为36.52%。同理,将构建好的人源K14启动子启动的红色荧光蛋白表达载体pK14-DsRed,导入MEF中,通过观察红荧光的表达情况可知该启动子具有启动功能,可用于下一步实验中。最后将hCas9载体、sgRNA载体及打靶载体共转染于MEF中,进行PCR检测,结果表明具备同源重组条件,可用于下一步转基因打靶小鼠的建立,同时该检测引物可用于转基因阳性小鼠的检测。3、Csnk1ε转基因小鼠的制备及鉴定本研究将构建好的Csnk1ε打靶载体,根据同源重组技术原理,利用原核显微注射法制备小鼠18只,通过PCR及Southern Blot鉴定后得到Csnk1ε随机整合阳性小鼠1只,并未得到Csnk1ε定点整合的阳性小鼠。随机整合阳性小鼠通过传代得到F1代阳性小鼠1只,说明该转基因阳性小鼠能够将外源基因稳定遗传给子代。本实验成功构建出Csnk1ε转基因小鼠模型,为以后研究该基因的功能创造了实验条件。4、Csnk1ε转基因小鼠表达水平的检测本实验首先对转基因阳性小鼠进行了mRNA水平的检测,以GAPDH为内参基因,通过Real-time PCR检测结果为：转基因阳性小鼠Csnk1ε mRNA表达量是同窝对照小鼠的2.65倍。然后对其进行蛋白质水平的检测,以α-tubulin为内参基因,通过Western Blot检测结果是同窝对照小鼠的1.243倍。通过上述检测手段,说明目的基因已经成功转入小鼠的基因组并稳定表达。(本文来源于《内蒙古大学》期刊2016-03-20）
张志鹏[3]（2014）在《利用原核显微注射技术制备VEGF164转基因小鼠及其检测》一文中研究指出血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)是一种二聚体糖蛋白,由二硫键连接而成,是血小板衍生性生长因子(PDGF)家族的一员,具有促进毛囊发育和毛发生长的作用。为深入研究VEGF基因对毛囊的作用,本实验利用原核显微注射法制作VEGF164转基因小鼠,通过PCR筛选得到转基因阳性小鼠。通过实时荧光定量PCR法检测转基因小鼠皮肤VEGF mRNA的相对表达量；通过Western Blot检测VEGF蛋白的表达水平；通过石蜡切片的方法检测小鼠皮肤毛囊的数量和形态。1.利用原核显微注射技术制备转基因小鼠转基因小鼠是研究基因调控、个体发育和疾病的重要实验动物。原核注射技术在小鼠转基因中应用十分广泛而且非常成功,主要步骤包括外源基因的准备、原核期胚胎的获得、原核显微注射、胚胎移植等。本实验利用原核显微注射法制备了K14/VEGF和KAP6-1/VEGF转基因小鼠59只和87只,得到阳性小鼠各5只,阳性率分别为8.5%和5.8%,经过传代F0代阳性小鼠均能够把外源基因稳定遗传给子代。实验成功建立VEGF164转基因小鼠模型。2. K14/VEGF和KAP6-1/VEGF转基因小鼠的检测实验利用实时荧光定量PCR、Western blot、石蜡切片等技术检测转基因阳性小鼠和同窝对照组小鼠。经检测,转基因阳性小鼠与同窝对照小鼠相比,VEGFmRNA表达量最高达6.25倍(K14/VEGF)和6.67倍(KAP6-1/VEGF),蛋白质表达量最高达1.68倍(K14/VEGF)和1.64倍(KAP6-1/VEGF),石蜡切片显示阳性小鼠毛囊直径和数量明显增加。表明血管内皮生长因子具有促进毛囊生长的作用。(本文来源于《内蒙古大学》期刊2014-04-01）
赵志明,曹金凤,崔娜,杜元杰,徐素欣[4]（2011）在《卵胞浆内单精子显微注射后叁原核合子发生相关因素及妊娠结局分析》一文中研究指出目的探讨卵胞浆内单精子显微注射(ICSI)后的叁原核(3PN)合子发生的相关因素及对妊娠结局的影响。方法对2007年1月至2008年12月在河北医科大学第二医院生殖医学中心行ICSI的287个周期进行回顾性分析。将周期分为2组,A组:至少有1个以上的3PN发生。B组:无3PN的发生。比较两组的年龄、促性腺激素(Gn)用量、雌二醇峰值、获卵数、单精子注射卵数、取卵至ICSI时间、不正常卵子率、精子质量、双原核合子率、种植率、妊娠率、流产率等。结果 A组和B组Gn用量、雌二醇峰值、获卵数、单精子注射卵子数和双原核合子率分别为[(28.45±8.68)支对(33.66±14.02)支,75U/支]、[(10203.04±3402.97)pmol/L]对[(8649.27±3870.19)pmol/L]、[(17.09±8.58)枚对(11.34±6.52)枚]、[(13.61±7.49)枚对(9.26±5.41)枚]、[(66.85±18.69)%对(77.39±19.31)%],差异有统计学意义(P<0.05)。两组种植率、妊娠率、流产率差异无统计学意义。结论卵巢对Gn刺激的高反应所造成的部分卵子质量或内部结构的异常可能是ICSI后发生3PN合子的原因。但3PN发生对妊娠结局无明显影响,不能用高反应完全解释。(本文来源于《中国实用妇科与产科杂志》期刊2011年07期）
马玉珍,扈廷茂,夏国良,旭日干[5]（2007）在《原核显微注射产生转基因绵羊胚胎》一文中研究指出体外采集绵羊卵丘卵母细胞复合体,成熟培养24 h,经过体外受精培养17 h,比较高速离心对胚胎发育的影响;高速离心可以使黑色脂滴甩到一边从而使受精卵原核清晰可见.然后将绵羊乳腺特异表达人肝细胞再生增强因子和真核细胞表达增强绿色荧光蛋白(EnhancedGreen fluorescence protein,EGFP)的载体DNA显微注射于绵羊受精卵雄原核中,并将异构胚在SOF液中发育培养.结果表明:高速离心组囊胚率低于对照组,但是没有显着性差异(P>0.05);显微注射外源基因2天后在激光共聚焦显微镜下可见荧光胚胎;PCR检测5个荧光胚胎均可见特异性条带.在原核显微注射生产转基因胚胎中,绿色荧光蛋白可作为标记基因进行早期胚胎筛选,为提高转基因动物移植效率奠定实验基础.(本文来源于《内蒙古大学学报(自然科学版)》期刊2007年06期）
Macas,E.,Zweifel,C.,Imthurn,B.,党慧敏[6]（2006）在《在卵母细胞单精子显微注射后叁原核合子中来自父系原核检测到的编号染色体畸变》一文中研究指出Objective: To investigate after intracytoplasmic sperminjection(ICSI) the paternal-derived pronuclei of zygotes with three pronuclei(3PN) for numerical-chromosome anomalies by using fluorescence in situ hybridization. Design: A total of 211 ICSI 3PN zygotes have been analyzed for numerical-chromosome anomalies in paternally derived pronuclei and compared with the group of 82 zygotes originated during IVF. In the ICSI group, 163 zygotes were evaluated for numerical-chromosome anomalies by using DNA probes for chromosomes 18, X, and Y, and 48 zygotes, for chromosomes 21, X, and Y. In the IVF group, 68 zygotes were evaluated for numerical-chromosome anomalies by using probes for chromosomes 18, X, and Y, and 14 zygotes, by using chromosomes 21, X, and Y. Setting and Patient(s): Tripronuclear zygotes were obtained from 74 and 176 patients participating in IVF and ICSI treatment cycles at a university hospital in Switzerland. Intervention(s): To evaluate the frequency of numerical-chromosome anomalies in different populations of infertile patients, a total of 211 ICSI zygotes were divided into three groups of zygotes from men with oligozoospermia(n=124), severe oligozoosper-mia(n=53), and azoospermia(n=34). Main Outcome Measure(s): Incidence of sex-chromosome aneuploidy, diploidy, and aneuploidy for chromosomes 18 or 21. Result(s): Overall incidence of numerical-chromosome anomalies in paternal-derived pronuclei after ICSI(9.5%) was significantly higher than the rate found in paternal-derived pronuclei of IVF zygotes(1.2%). Among ICSI zygotes, sex-chromosome aneuploidy(5.2%) and diploidy(2.8%) were two dominant numerical anomalies in paternal-derived pronuclei. In contrast, aneuploidy for autosomes 18 or 21 was not significantly different when comparing ICSI with IVF zygotes. Regarding different groups of infertile patients, the highest incidence of numerical chromosome anomalies was found in zygotes originating from men with severe oligozoospermia(13.2%), followed by those originating from men with azoospermia(8.8%) and oligozoospermia(8.1%). Conclusion(s): Sex-chromosome aneuploidy and diploidy were the most frequent numerical-chromosome anomalies found in paternal pronuclei of ICSI 3PN zygotes. Surprisingly, no statistically significant difference in the incidence of numerical-chromosome anomalies was observed in the three groups of pronuclei derived from men with oligozoospermia, severe oligozoospermia, and azoospermia.(本文来源于《世界核心医学期刊文摘(妇产科学分册)》期刊2006年10期）
王勇,刘勤,倪勇,魏泓,孙新民[7]（2005）在《通过双原核显微注射提高转基因小鼠研制效率的实验研究》一文中研究指出目的建立高效的转基因小鼠制备技术,为开展遗传工程动物模型研究奠定技术基础。方法通过向小鼠受精卵原核中注入不同浓度的DNA分子,筛选最适注射用DNA浓度;将K14/hCTLA4-Ig基因表达载体分子通过显微注射分别导入小鼠受精卵雌、雄原核,并设立单原核注射对照组;利用输卵管腹壶部穿刺移植法将注射后的小鼠受精卵移植于同期发情的受体母鼠;利用PCR对出生的转基因首建小鼠进行筛选。结果最适DNA分子浓度为10ng/μl;在单、双原核注射组胚胎2细胞卵裂率分别为52.3%(132/253)和45.0%(108/240),差异有显着性(P<0.05);注射胚胎移植后体内存活率分别为18.1%(24/132)和16.7%(18/108),差异无显着性;转基因首建小鼠阳性率分别为3/24和5/18,转基因阳性小鼠占总注射胚胎的比例为1.2%(3/253)和2.08%(5/240),差异有极显着性(P<0.01)。结论尽管双原核注射对胚胎的2细胞卵裂率有一定影响,但通过双原核注射可有效提高转基因小鼠的制备效率。(本文来源于《中国实验动物学报》期刊2005年03期）
Matt,D,W,Ingram,A,R,Graff,D[8]（2005）在《行体外受精和卵母细胞单精子显微注射后多原核孕卵形成患者在单胚胎移植后分娩正常婴儿》一文中研究指出To report an unusual case of idiopathic zygotic polypronuclei. Case report. Ma jor urban infertility referral center. A 34-year-old woman with unexplained in fertility. The patient underwent two cycles of controlled hyperstimulation and o ocyte retrieval followed by in vitro insemination and intracytoplasmic sperm inj ection (ICSI). Pregnancy and delivery of a normal infant following transfer of a single preembryo from an ICSI cycle in which only one zygote showed a normal pr onuclear number (2PN) and 12 zygotes appeared polypronucleated (< 3PN). On the f irst IVF cycle, 23 oocytes were retrieved and inseminated with 240×103 motile s perm/mL, after which two zygotes showed a normal pronuclear number and 20 zygote s appeared polyploid with three to seven pronuclei. Transfer of two poorquality day-3 preembryos following assisted hatching did not achieve pregnancy. On the subsequent ICSI cycle, 33 oocytes were retrieved, and 17 mature oocytes were sub jected to ICSI, after which only one zygote showed 2PN and 12 zygotes appeared polyploid with three to eight pronuclei. Th e normally fertilized zygote developed into a poor-quality, day-3 embryo and w as subjected to assisted hatching. Transfer of this preembryo resulted in an une ventful pregnancy and birth of a normal infant. Mechanisms other than polyspermi a may result in polypronuclear development in some patients.(本文来源于《世界核心医学期刊文摘(妇产科学分册)》期刊2005年05期）
[9]（2000）在《显微注射外源DNA等因素对小鼠原核胚体外发育影响的研究》一文中研究指出本文探讨了显微注射不同浓度的外源ＤＮＡ以及温度、培养皿、石腊油和观察次数等培养条件对小鼠原核胚体外培养发育能力的影响。显微注射 1.5ｎｇ/ μｌ和 5 0ｎｇ/ μｌ的外源小鼠乳清酸蛋白和人蛋白Ｃ的融合基因 (ＷＡＰ -ｈＰｒｏＣ) ,使原核胚发育到囊(本文来源于《药物生物技术》期刊2000年04期）
王彦玲,冯书堂[10]（1999）在《显微注射外源DNA等因素对小鼠原核胚体外发育影响的研究》一文中研究指出本文探讨了显微注射不同浓度的外源 Ｄ Ｎ Ａ 以及温度、培养皿、石腊油和观察次数等培养条件对小鼠原核胚体外培养发育能力的影响。显微注射１５ｎｇ／μｌ，１５ｎｇ／μｌ和５０ｎｇ／μｌ的外源小鼠乳清酸蛋白和人蛋白 Ｃ 的融合基因（ Ｗ Ａ Ｐｈ Ｐｒｏ Ｃ），使原核胚发育到囊胚的比率依次降低，分别为６０％ ，３７％ 和１３％ 。差异极显着（ Ｐ＜ ００１）。注射１５ｎｇ／μｌ，原核胚的囊胚率（６０％ ）和对照组（５３％ ）比稍有提高，但差异不显着（ Ｐ＞ ００５）。１５ｎｇ／μｌ为最佳外源 Ｄ Ｎ Ａ 注射浓度。３７℃、进口培养皿、进口石腊油和培养结束时观察等条件，使原核胚克服 ２细胞阻断发育到囊胚期的比率，显着高于３８℃、国产培养皿、国产石腊油和每 ２４ｈ 观察等条件下的囊胚率。(本文来源于《畜牧兽医学报》期刊1999年05期）
原核显微注射论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
酪蛋白激酶1 (Casein Kinase 1, Csnk1)属于丝／苏氨酸蛋白激酶,已经在哺乳动物中发现并得到了7个Csnkl的同工酶,分别是Csnkla、Csnk1b、Csnklg1、 Csnk1g2、Csnklg3、Csnk1d和Csnkl ε。相关研究表明,Csnkl ε的碱基缺失或突变可能对毛囊发育和毛发生长具有一定影响。CRISPR/Cas系统是一种来源于细菌获得性免疫的由RNA指导Cas蛋白对靶向基因进行修饰的技术。为深入研究Csnkl ε对毛囊的作用,本实验设计以CRISPR/Cas9系统介导使得Csnklε定点整合于小鼠Rosa26位点上,再通过原核显微注射技术技术,制备Csnklε转基因小鼠。通过PCR及Southern Blot检测方法鉴定阳性小鼠,并通过Real-time PCR, Western Blot方法对转基因阳性小鼠进行表达检测。1、sgRNA载体及打靶载体构建本实验通过麻省理工学院的CRISPR Design软件设计5对sgRNA,以sgRNA-T2为模板,扩增得到相应的U6启动子和sgRNA骨架载体,最终构建得到完整的sgRNA载体。打靶载体的构建是以人源K14启动子,即皮肤特异性启动子启动目的基因,经测序得知其同源性为98%。为了确保该启动子的启动功能,本实验构建了以该启动子启动的红色荧光蛋白表达载体pK14-DsRed,用以下一步细胞水平检测。再利用同源重组技术原理在已经确定的靶位点,即小鼠Rosa26第一内含子处,分别向上、下各取lkb左右作为打靶载体的上、下游同源臂,最终将打靶载体构建成功。2、细胞水平的相关检测本研究主要利用电穿孔转染法将红色荧光蛋白表达载体pCMV-DsRed导入MEF中,筛选出适应于MEF的最优转染条件,即160V/5Ms。利用该转染条件将Cas9载体和sgRNA载体共同转染于MEF中,培养48h后提取基因组,通过设计跨靶位点的PCR引物进行PCR扩增,扩增产物经杂交后再通过Surveyor突变检测试剂盒进行鉴定,从而确定sgRNA敲除位点为Rosa26基因的第一内含子的第1096bp处,其敲除效率为36.52%。同理,将构建好的人源K14启动子启动的红色荧光蛋白表达载体pK14-DsRed,导入MEF中,通过观察红荧光的表达情况可知该启动子具有启动功能,可用于下一步实验中。最后将hCas9载体、sgRNA载体及打靶载体共转染于MEF中,进行PCR检测,结果表明具备同源重组条件,可用于下一步转基因打靶小鼠的建立,同时该检测引物可用于转基因阳性小鼠的检测。3、Csnk1ε转基因小鼠的制备及鉴定本研究将构建好的Csnk1ε打靶载体,根据同源重组技术原理,利用原核显微注射法制备小鼠18只,通过PCR及Southern Blot鉴定后得到Csnk1ε随机整合阳性小鼠1只,并未得到Csnk1ε定点整合的阳性小鼠。随机整合阳性小鼠通过传代得到F1代阳性小鼠1只,说明该转基因阳性小鼠能够将外源基因稳定遗传给子代。本实验成功构建出Csnk1ε转基因小鼠模型,为以后研究该基因的功能创造了实验条件。4、Csnk1ε转基因小鼠表达水平的检测本实验首先对转基因阳性小鼠进行了mRNA水平的检测,以GAPDH为内参基因,通过Real-time PCR检测结果为：转基因阳性小鼠Csnk1ε mRNA表达量是同窝对照小鼠的2.65倍。然后对其进行蛋白质水平的检测,以α-tubulin为内参基因,通过Western Blot检测结果是同窝对照小鼠的1.243倍。通过上述检测手段,说明目的基因已经成功转入小鼠的基因组并稳定表达。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
原核显微注射论文参考文献
[1].李兴.利用原核显微注射技术制备HIF-1α转基因小鼠及其表达检测[D].内蒙古大学.2017
[2].王新.以原核显微注射技术建立Csnk1ε转基因小鼠及其表达检测[D].内蒙古大学.2016
[3].张志鹏.利用原核显微注射技术制备VEGF164转基因小鼠及其检测[D].内蒙古大学.2014
[4].赵志明,曹金凤,崔娜,杜元杰,徐素欣.卵胞浆内单精子显微注射后叁原核合子发生相关因素及妊娠结局分析[J].中国实用妇科与产科杂志.2011
[5].马玉珍,扈廷茂,夏国良,旭日干.原核显微注射产生转基因绵羊胚胎[J].内蒙古大学学报(自然科学版).2007
[6].Macas,E.,Zweifel,C.,Imthurn,B.,党慧敏.在卵母细胞单精子显微注射后叁原核合子中来自父系原核检测到的编号染色体畸变[J].世界核心医学期刊文摘(妇产科学分册).2006
[7].王勇,刘勤,倪勇,魏泓,孙新民.通过双原核显微注射提高转基因小鼠研制效率的实验研究[J].中国实验动物学报.2005
[8].Matt,D,W,Ingram,A,R,Graff,D.行体外受精和卵母细胞单精子显微注射后多原核孕卵形成患者在单胚胎移植后分娩正常婴儿[J].世界核心医学期刊文摘(妇产科学分册).2005
[9]..显微注射外源DNA等因素对小鼠原核胚体外发育影响的研究[J].药物生物技术.2000
[10].王彦玲,冯书堂.显微注射外源DNA等因素对小鼠原核胚体外发育影响的研究[J].畜牧兽医学报.1999
论文知识图
