含4种食源性病毒检测靶标多联装甲RNA的制备、纯化与定值

论文摘要

基于Qβ噬菌体装甲RNA制备平台构建同时含有诺如病毒（norovirus,NoV）、甲肝病毒（hepatitis Avirus,HAV）、轮状病毒（rotavirus,RV）、星状病毒（astrovirus,AstV）检测靶标RNA的多联装甲RNA（multiplexarmoredRNA,AR-MulV）,并进行纯化与初步定值。结果表明,重组质粒在大肠杆菌中成功表达,表达产物大小约为14.1 kDa;制备的AR-MulV经纯化后无杂蛋白与残留重组质粒,电镜下可见大量结构形态完整的病毒样颗粒,大小约为25 nm。初步定值结果显示,AR-MulV中GⅠ型NoV、GⅡ型NoV、HAV、RV和AstV检测靶标RNA的含量分别为（1.24±0.2）×107、（2.54±0.6）×107、（2.24±0.3）×107、（2.96±0.5）×107copies/μL和（3.19±0.4）×107copies/μL。本研究基于Qβ噬菌体装甲RNA制备平台成功制备同时包含4种食源性病毒标准方法检测靶标的多联装甲RNA,为食源性病毒的分子检测以及多重实时荧光定量逆转录-聚合酶链式反应阳性质控样品的研发提供新思路。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 材料与试剂
•   1.2 仪器与设备
•   1.3 方法
•     1.3.1 引物与探针
•     1.3.2 目的片段QβMulV和MulV的合成
•     1.3.3 重组质粒构建与鉴定
•     1.3.4 病毒样颗粒的诱导表达
•     1.3.5 病毒样颗粒的纯化
•     1.3.6 电镜观察
•     1.3.7 AR-MulV中残留质粒的检测
•     1.3.8 AR-MulV的初步定值
•       1.3.8. 1 cRNA制备
•       1.3.8. 2 标准曲线构建
•       1.3.8. 3 初步定值与不确定度分析
• 2结果与分析
•   2.1重组质粒的构建
•   2.2 pET-QβMulV在大肠杆菌中的诱导表达
•   2.3 样品的纯化
•   2.4 电镜观察结果
•   2.5 AR-MulV中残留质粒的检测结果
•   2.6 AR-MulV初步定值
•     2.6.1 cRNA标准曲线的构建
•     2.6.2 AR-MulV的初步定值与不确定度分析
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 姚琳,张奇,李风铃,张媛,逄凤娇,江艳华,王联珠,翟毓秀

关键词: 食源性病毒,多联装甲,噬菌体,阳性质控样品

来源: 食品科学 2019年08期

年度: 2019

分类: 工程科技Ⅰ辑

专业: 轻工业手工业

单位: 中国水产科学研究院黄海水产研究所农业部水产品质量安全检测与评价重点实验室,獐子岛集团股份有限公司

基金: “十三五”国家重点研发计划重点专项(2017YFC1600703),科技部科技基础性工作专项项目(2013FY113300),中国水产科学研究院基本科研业务费专项(2016HY-ZD11)

分类号: TS207.3

页码: 293-299

总页数: 7

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