质粒DNA转染人PBMC电穿孔条件的影响因素

论文摘要

目的分析影响质粒转染人PBMC电穿孔效率的不同因素。方法从人外周血中分离得到PBMC,利用携带荧光标记的质粒进行电穿孔转染。分别比较不同的电压、脉冲时间、电转缓冲液、细胞培养状态、质粒质量对转染效率和细胞活率的影响。结果在一定范围内适当增高电压会增加细胞转染效率,但会降低细胞活率;脉冲时间达到一定数值后,转染效率才会有明显的升高;电转缓冲液对于电转后细胞存活率至关重要;未活化的PBMC转染效率低于经刺激活化的PBMC,但细胞活率却高于后者;质粒纯度和质量显著影响电穿孔转染效果,利用全波长光谱扫描仪可对质粒的杂质进行有效的检测,质粒中内毒素的含量显著影响PBMC电转后的存活率。结论对质粒转染人PBMC的电穿孔条件进行了详细的分析与探索,阐明了影响原代淋巴细胞转染的多种因素,对于有效提高人原代淋巴细胞转染效率具有重要意义,为基于淋巴细胞的肿瘤免疫研究提供有益参考。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 材料与试剂
•   1.2 主要仪器
•   1.3 方法
•     1.3.1 PBMC的制备
•     1.3.2 Nanodrop2000测定质粒浓度
•     1.3.3 全波长光谱扫描测定质粒纯度
•     1.3.4 质粒的内毒素含量测定
•     1.3.5 质粒电穿孔转染条件的设置
•     1.3.6 PI染色及流式检测
•   1.4 统计学处理
• 2 结果
•   2.1 电压与脉冲时间的优化
•   2.2 缓冲液对电穿孔效率的影响
•   2.3 细胞状态对电穿孔效率的影响
•   2.4 质粒因素对电穿孔效率的影响
•     2.4.1 质粒的分子量对电穿孔效率的影响
•     2.4.2 质粒的纯度对电穿孔效率的影响
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 孔明圣,于洋,张亚倩,李玲,张文峰,邵红伟

关键词: 电穿孔,转染,质粒

来源: 广东药科大学学报 2019年02期

年度: 2019

分类: 医药卫生科技,基础科学

专业: 生物学

单位: 广东药科大学生命科学与生物制药学院广东省生物技术候选药物研究重点实验室

基金: 国家自然科学基金(3110064,31300737,314000149),广东省自然科学基金(2014A030313586,1051022401000024),广东省科技计划项目(2016A020215157),广东省高等教育“创新强校工程”项目(2017KZDXM049,2017KCXTD020)

分类号: Q78

DOI: 10.16809/j.cnki.2096-3653.2019030105

页码: 289-295

总页数: 7

文件大小: 2189K

下载量: 197