多重巢式固相PCR-Array芯片用于高致病性病原微生物并行检测

论文摘要

提出了一种多重巢式固相PCR的方法,以微流控芯片为载体,采用紫外交联方式将寡核苷酸序列固定在芯片上,构建了阵列式固相PCR-阵列（PCR-Array）芯片,用于细菌和病毒类高致病性病原微生物的并行检测。选择新疆出血热病毒、埃博拉病毒、炭疽杆菌和布鲁氏菌4种代表性高致病性病原微生物为研究对象,通过基因工程手段构建了包含有炭疽杆菌和布鲁氏菌特异性基因片段的重组质粒载体,利用病毒包装技术构建了包含有两种病毒特异性基因片段的逆转录病毒颗粒,完成了4种高致病性病原微生物阳性标准品的制备,并以此作为实验样本,探究了多重巢式固相PCR-Array芯片的制备方法和扩增体系。结果表明,在优化的实验条件下,多重巢式固相PCR-Array芯片检测4种高致病性病原微生物的检出限达10 copy/μL以下量级。本方法灵敏度高,特异性好,同时,引物空间上的隔离避免了相互干扰,提高了检测通量,在多种病原微生物快速并行检测方面具有良好的应用前景。

论文目录

• 1 引 言
• 2 实验部分
•   2.1 仪器与试剂
•   2.2 实验方法
•     2.2.1 炭疽杆菌、布鲁氏菌重组质粒和新疆出血热、埃博拉逆转录病毒颗粒的构建
•     2.2.2 固相PCR-Array芯片制作
•     2.2.3 多重巢式固相PCR体系优化实验
•     2.2.4 多重巢式固相PCR-Array芯片检测4种病原微生物的特异性和灵敏度实验
• 3 结果与讨论
•   3.1 检测原理
•   3.2 固相PCR-Array芯片制备方法对扩增效率的影响
•   3.3 多重巢式固相PCR体系优化
•   3.4 多重巢式固相PCR-Array芯片检测4种高致病性病原微生物的特异性和灵敏度
• 4 结 论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 朱灿灿,崔俊生,胡安中,杨柯,赵俊,刘勇,邓国庆,朱灵

关键词: 高致病性病原微生物,多重,巢式固相阵列芯片

来源: 分析化学 2019年11期

年度: 2019

分类: 工程科技Ⅰ辑,基础科学,医药卫生科技

专业: 生物学,化学,基础医学

单位: 中国科学院合肥物质科学研究院应用技术研究所安徽省生物医学光学仪器工程技术研究中心安徽省医用光学诊疗技术与装备工程实验室,中国科学技术大学

基金: 中国科学院重点项目(No.KGFZD-135-18-019),中科院STS区域重点项目和安徽省重点研发计划(Nos.1804c04020335,1804a09020051)资助~~

分类号: O652;R37

DOI: 10.19756/j.issn.0253-3820.191288

页码: 1751-1758

总页数: 8

文件大小: 1379K

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