微型人胰岛素基因载体的构建及其在花生中的表达

论文摘要

制备和培养含微型人胰岛素基因的转基因花生植株,从而利用转基因花生表达微型人胰岛素。首先按照植物偏爱密码子设计合成了修饰C肽的微型人胰岛素基因（mini insulin,MI）,其中胰岛素B链通过丙-丙-赖三肽和A链相连接,在表达载体pBI121上构建了由花椰菜花叶病毒CAMV35S启动子驱动表达微型人胰岛素的重组质粒RIG。质粒RIG经农杆菌介导法转化至花生胚和去胚子叶中,抗生素筛选得到转基因花生苗,之后利用PCR和Western-blot对转基因花生幼叶进行分子生物学鉴定。结果显示,试验优化了农杆菌介导的花生转基因技术,并且得到了转基因花生苗;分子生物学技术鉴定结果显示,微型人胰岛素基因成功转入花生叶片基因组中,且在花生叶片中表达,其中以花生胚为外植体长出的再生苗的阳性检测率为2.27%。目前正在探索微型人胰岛素基因在花生油体中高效表达的方法,为转基因花生规模化生产微型人胰岛素提供理论基础。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 试验材料和试剂
•   1.2 试验方法
•     1.2.1 载体构建
•     1.2.2 根癌农杆菌介导的花生遗传体系的建立及优化
•       1.2.2.1 农杆菌侵染花生去胚子叶的诱导和分化
•       1.2.2.2 去胚子叶的遗传转化
•       1.2.2.3 去胚子叶非转基因
•       1.2.2.4 空白对照组处理
•       1.2.2.5 农杆菌侵染花生胚的诱导和分化
•     1.2.3 花生转化苗的PCR鉴定
•     1.2.4 花生转化苗的SDS-PAGE和Western-blot检测
• 2 结果与分析
•   2.1 载体构建
•     2.1.1 重组质粒RIG的鉴定
•   2.2 根癌农杆菌介导的花生遗传体系的建立及优化
•     2.2.1 去胚子叶的遗传转化
•       2.2.1.1 转基因去胚子叶
•       2.2.1.2 非转基因去胚子叶
•       2.2.1.3 空白对照
•     2.2.2 花生胚的遗传转化
•       2.2.2.1 转基因花生胚
•       2.2.2.2 非转基因花生胚
•   2.3 花生转化苗的PCR鉴定
• 3 讨论与结论
•   3.1 表达载体中信号肽的作用
•   3.2 植物器官再生体系的建立
•     3.2.1 农杆菌侵染去胚子叶的诱导和分化
•     3.2.2 农杆菌侵染花生胚的诱导和分化

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 仵陶,安胜军,邵铁梅,朱正歌,焦展,刘培,李雪

关键词: 分子医药农业,转基因花生,微型人胰岛素,载体构建,基因表达

来源: 江苏农业科学 2019年04期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学,医药卫生科技

专业: 生物学,药学

单位: 河北化工医药职业技术学院/河北省高校生物反应器与蛋白类药物应用技术研发中心,河北中医学院科研中心,河北师范大学生命科学学院

基金: 河北省高等学校科学技术研究重点项目(编号:ZD2014087),河北省高等学校科学技术研究重点项目(编号:ZH2012081)

分类号: R91;Q943.2

DOI: 10.15889/j.issn.1002-1302.2019.04.009

页码: 42-46

总页数: 5

文件大小: 1314K

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