副干酪乳杆菌L1的安全性和益生性评价及其在杂交鸡上的应用

论文摘要

副干酪乳杆菌L1是分离于自然发酵甘薯酸浆中的优势乳酸菌,能在高淀粉含量的培养基中快速增殖,高效产酸,具有黏附淀粉、快速沉降淀粉的能力,用于制作甘薯淀粉絮凝剂等。在河南省、山东省、陕西省等酸浆法生产甘薯淀粉盛行的地区,当地人有饮用自然发酵甘薯酸浆的习惯。为此,本研究对副干酪乳杆菌L1进行安全性及益生性评价,并通过饲养实验,评价该菌对杂交鸡生产性能、免疫功能及肠道菌群的影响,为副干酪乳杆菌L1在人用及饲用益生菌制剂的生产应用奠定理论基础和提供实践指导。论文的主要研究方法和结果如下:1、副干酪乳杆菌L1的安全性评价。采用K-B（药敏纸片琼脂扩散法）和质粒提取,判断L1的耐药性;通过检测氨基酸脱羧酶、硝酸盐还原酶、和吲哚实验以及溶血实验,判断L1是否会生成有害代谢产物;通过小鼠实验对L1进行毒理学评价。结果显示:副干酪乳杆菌L1对部分抗生素表现为抗性,菌体没有质粒存在;在有害代谢产物检测结果中,该菌在增殖过程中均表现为阴性反应,在溶血实验中表现为无毒性的γ-溶血;小鼠急性毒性和亚慢性毒性实验期间,小鼠未出现死亡,生命活动一切正常,饮食和饮水较稳定,鼠毛光洁白亮,排泄物状态正常,且小鼠生长发育良好,与对照组无显著性差异,第8 d和第31 d解剖后,小鼠的心、肝、脾、肺、肾五种主要器官组织无病变,且副干酪乳杆菌L1组和生理盐水组的脏器指数无显著性差异。2、副干酪乳杆菌L1的益生性评价。通过在培养基中加酸、胆盐及高盐,测定L1对环境的耐受性;测定L1的自聚集性和疏水性,判断该菌是否具有黏附能力;再将L1与Caco-2细胞共培养,观察并计算黏附情况,以此判定L1是否具有黏附肠上皮细胞的能力。结果显示:在酸性和胆盐环境下,副干酪乳杆菌L1的总体活菌数始终在107CFU/mL以上,高盐环境下,L1的总体活菌数始终在1010 CFU/mL以上,表明L1对环境具有良好的耐受性;L1孵育1 h的自聚集性为15.8%±1.2,孵育2 h的自聚集性为20.4%±2.3,孵育24h的自聚集性为47.2%±0.8,L1的疏水性为38.1%±2.7;L1黏附每个Caco-2细胞数约为30±2.5,L1菌体的黏附率为22.37%±1.44,说明L1对Caco-2细胞有较好的黏附能力。3、副干酪乳杆菌L1对杂交鸡生产性能的影响。将240只大骨×仙居鸡随机分为两组,对照组饲喂基础日粮加甘薯汁液体培养基,实验组饲喂基础日粮加L1菌液,实验结束后测定杂交鸡平均日采食量、平均日增重和料重比,结果表明:实验前40 d,与对照组相比,实验组显著提高了平均日采食量（P<0.05）,但平均日增重和料重比差异不显著（P>0.05）;在后20 d中,实验组显著提高了平均日增重（P<0.05）,料重比显著降低（P<0.05）。4、副干酪乳杆菌L1对杂交鸡免疫性能的影响。实验结束后,每组选取生长状况良好的3只鸡进行宰杀,计算免疫器官指数,分析血清中的免疫因子,结果表明:与对照组相比,实验组杂交鸡的胸腺指数提高了25.1%,脾脏指数提高了17.6%,差异显著,而法氏囊指数有提高趋势,差异不显著;与对照组相比,实验组杂交鸡血清中的IL-4含量有显著提高,IL-2和IL-10的含量有提高的趋势,但差异不显著;L1对杂交鸡血清中IgA和IgG的含量没有显著影响;γ干扰素与INS的含量有提升的趋势,但差异不显著。5、副干酪乳杆菌L1对杂交鸡肠道菌群的影响。通过16s rDNA高通量测序技术,研究L1对杂交鸡肠道菌群区系和基因功能的影响,结果表明:由多样性指数判断,副干酪乳杆菌L1显著提高了小肠中的群落多样性和丰富度;通过Venn图分析肠道中OTUs的分布,发现饲喂L1可增加小肠中OTUs的数量;组间差异分析中,大肠中,实验组拟杆菌属S24-7亚群显著高于对照组,小肠中,L1显著提高了拟杆菌门的数量,极显著提高了互养菌门的数量,极显著提高了拟杆菌属的数量;基因功能分析中,实验组提高了大肠中丙酸盐代谢、脂肪酸生物合成和甘油酯代谢的功能,提高了小肠中多种糖代谢功能。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 英文缩略语表
• 第一章 前言
•   1.1 乳酸菌的概述
•   1.2 乳酸菌的安全性评定
•   1.3 乳酸菌的益生性评定
•   1.4 乳酸菌在动物中的应用
•   1.5 研究目的与意义
•   1.6 主要研究内容
• 第二章 副干酪乳杆菌L1的安全性评价
•   2.1 材料与方法
•   2.2 结果
•   2.3 讨论
•   2.4 小结
• 第三章 副干酪乳杆菌L1的益生性评价
•   3.1 材料与方法
•   3.2 结果
•   3.3 讨论
•   3.4 小结
• 第四章 副干酪乳杆菌L1对杂交鸡生产性能、免疫功能及肠道菌群的影响
•   4.1 材料与方法
•   4.2 结果
•   4.3 讨论
•   4.4 小结
• 结论与创新点
•   结论
•   创新点
• 参考文献
• 附录

文章来源

类型: 硕士论文

作者: 田原

导师: 张莉力

关键词: 副干酪乳杆菌,安全性,益生性,杂交鸡,肠道菌群

来源: 锦州医科大学

年度: 2019

分类: 基础科学,工程科技Ⅰ辑,农业科技

专业: 生物学,轻工业手工业,畜牧与动物医学

单位: 锦州医科大学

分类号: S831.5;TS201.3

DOI: 10.27812/d.cnki.glnyx.2019.000020

总页数: 65

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