4种食源性致病菌的多重PCR快速检测方法研究

论文摘要

为快速检测蜡样芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、志贺氏菌和沙门氏菌4种食源性致病菌,建立4重聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)的检测方法。针对菌株的特异性基因设计引物,选择退火温度相近,扩增条带区间不同的引物为多重聚合酶链式反应引物组,并对多重PCR的引物浓度、退火温度进行优化,确定扩增条件。结果表明,在54℃的退火温度下,4种菌可扩增长度为246、166、65、107 bp的清晰片段,其检测灵敏度为蜡样芽孢杆菌2×101CFU/mL,金黄色葡萄球菌可达1.3×102 CFU/mL,志贺氏菌可达1.3×102 CFU/mL,沙门氏菌可达1.4×102 CFU/mL。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 材料与试剂
•     1.1.1 菌种
•     1.1.2 试剂
•   1.2 仪器与设备
•   1.3 方法
•     1.3.1 菌株的培养
•     1.3.2 模板的制备及计数
•     1.3.3 引物的设计与合成
•     1.3.4 引物的筛选和确定
•     1.3.5 多重PCR退火温度的确定
•     1.3.6 多重PCR引物浓度的确定
•     1.3.7 多重PCR特异性的鉴定
•     1.3.8 多重PCR灵敏度的分析
•     1.3.9 人工接种牛奶样品多重PCR灵敏度的验证
• 2 结果与分析
•   2.1 特异性引物的筛选
•   2.2 多重PCR的退火温度的确定
•   2.3 多重PCR引物浓度的确定
•   2.4 多重PCR体系的特异性分析
•   2.5 多重PCR灵敏度的鉴定
•   2.6 多重PCR在牛奶中灵敏度的鉴定
• 3讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 李聪,刘健慧,李志辉,张敏,高浩,檀建新

关键词: 多重聚合酶链式反应,蜡样芽孢杆菌,金黄色葡萄球菌,志贺氏菌,沙门氏菌,快速检测

来源: 食品研究与开发 2019年21期

年度: 2019

分类: 工程科技Ⅰ辑

专业: 轻工业手工业

单位: 河北农业大学食品科技学院

基金: 河北省重点研发计划项目(16275505D)

分类号: TS207.4

页码: 164-169

总页数: 6

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