华东地区野禽沙门菌的分离鉴定、耐药分析和MLST分子分型及其致病性的初步研究

论文摘要

沙门菌是全球范围内重要的人畜共患病病原,人能够通过食入沙门菌污染的动物源性食品感染沙门菌。沙门菌在人和动物之间的循环感染通常称为沙门菌循环,这种循环感染关系复杂,野禽也是这种循环中的一个重要环节。因此,野禽中沙门菌的分布情况,与家禽中沙门菌的关联度研究对家禽业和食品安全具有十分重要的意义。本研究旨在调查华东地区野禽沙门菌的携带情况、耐药情况、MLST分子分型情况及代表菌株的致病性,为沙门菌病的防控提供流行病学资料和理论依据。一、华东地区野禽沙门菌的分离鉴定及耐药性分析为了解野禽中沙门菌的携带情况和耐药情况,于2015-2018年采集华东地区野禽新鲜粪便样品5889份,进行沙门菌的分离,并采用多重PCR试验结合玻板凝集试验的方法确定其血清型;利用药敏纸片法测定其对常用抗生素的耐药性;利用PCR方法对分离株进行耐药基因岛（SGI）中主要的11个耐药基因的携带情况进行检测。结果显示,共分离到56株沙门菌,分离率为0.95%。其中,鼠伤寒沙门菌30株（占53.57%）,猪霍乱沙门菌孔成道夫生物型10株（占17.86%）,肠炎沙门菌7株（占12.50%）,波斯坦沙门菌5株（占8.93%）,猪霍乱沙门菌4株（占7.14%）。药敏试验结果显示,分离株对青霉素、头孢唑啉、苯唑西林、红霉素和利福平等抗生素的耐药率均超过50%,尤其对苯唑西林和利福平的耐药率为100%,多重耐药率达10.71%。携带耐药基因的检测结果显示,blaCMY-2、blaTEM-1-like、blaCTX-M、blaOXA-1-like、sul1、aacC4、Aac（6’）-1b、floR 和tet（G）检出率分别为 42.9%、67.9%、26.8%、5.4%、60.7%、10.7%、48.2%、23.2%和41.1%;blaPSE和blaSHV均未检出。菌株携带的耐药基因检出率高于耐药的表型。以上结果表明,华东地区野禽携带的沙门菌主要为鼠伤寒沙门菌,首次从野禽中分离到猪霍乱沙门菌和猪霍乱沙门菌孔成道夫生物型。二、华东地区野禽沙门菌分离株的MLST分型PCR扩增沙门菌的7个管家基因,分别是aroC、thrA、purE、dnaN、sucA、hisD和hemD,对分离的沙门菌进行MLST分型,结果表明,56株野禽源沙门菌可以分成 7 个 ST 型,分别为 ST808、ST99、ST19、ST1498、ST11、ST314和ST413。其中鼠伤寒沙门菌包括多个ST型,包括ST99型、ST19型和ST1498型,肠炎沙门菌、波斯坦沙门菌、猪霍乱沙门菌和猪霍乱沙门菌孔成道夫生物型均为单一 ST型,分别为ST11型、ST808型、ST314型和ST413型。猪霍乱沙门菌和猪霍乱沙门菌孔成道夫生物型的ST型与猪霍乱沙门菌弱毒疫苗株C500的ST1753不一致,属不同来源。三、猪霍乱沙门菌和猪霍乱沙门菌孔成道夫生物型致病性的初步研究挑取单菌落培养,绘制细菌的生长曲线。结果显示,分离株和疫苗株的生长曲线无显著差异。选取猪霍乱沙门菌（P1、P2）和猪霍乱沙门菌孔成道夫生物型（K1、K2）分离株各2株,猪霍乱沙门菌弱毒疫苗株C500作对照,分别以107、108和109 CFU的剂量腹腔注射攻毒3日龄的SPF鸡,结果显示,5株菌株对SPF鸡均有较强的致病性,其中P1组以及K1和K2组的SPF鸡在3天内全部死亡,P2组和C500组的在1×107 CFU剂量组各存活一只。说明P1、K1和K2菌株对SPF鸡的毒力强于P2和C500株。选取P1、K2和C500菌株分别测定SPF鸡和小鼠的LD50,结果显示,在SPF 鸡,K2 和 P1 及 C500 株的 LD50 分别为 9.0 × 1 06 6 CFU、3.0 × 1 05 8 CFU 和 8 × 1 07 5 CFU,说明分离株与疫苗株相比,毒力稍强;在小鼠,3株的LD50分别为3.0×107.5 CFU、9.0×107.6 CFU和8×107.5 CFU,说明分离株对小鼠的毒力与疫苗株相比,毒力差异不显著。病变结果显示,死亡的鸡和小鼠以急性炎症为主。综上所述,野禽中携带沙门菌的优势血清型、耐药情况与家禽中的比较一致;首次在国内野禽中分离到猪霍乱沙门菌及其孔成道夫生物型,初步致病性试验结果显示,对SPF鸡的致病力强于疫苗株C500;对小鼠的致病性与疫苗株相当,其致病机理还有待进一步的深入研究。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 符号说明
• 文献综述: 沙门菌流行情况、分子分型及耐药机制研究进展
•   1 沙门菌概述
•     1.1 生物学特性
•     1.2 血清学分类
•   2 沙门菌的流行特点和流行现状
•     2.1 流行特点
•     2.2 流行现状
•     2.3 野禽中的流行情况
•     2.4 家禽中的流行情况
•   3 沙门菌的分子分型
•     3.1 脉冲场凝胶电泳分型
•     3.2 多位点序列分型
•   4 细菌耐药性研究现状
•     4.1 细菌耐药性分类
•     4.2 细菌的耐药产生机制
•   参考文献
• 第一章 2015-2018年华东地区野禽沙门菌的分离鉴定及耐药性分析
•   1 材料与方法
•     1.1 材料
•     1.2 方法
•   2 结果
•     2.1 细菌培养和革兰氏染色镜检
•     2.2 血清型鉴定
•     2.3 生化试验结果
•     2.4 菌株来源分布
•     2.5 药敏试验结果和表型多重耐药分析
•     2.6 菌株携带的耐药基因的检测结果
•     2.7 耐药基因携带与耐药表型覆盖率统计结果
•   3 讨论
•   参考文献
• 第二章 野禽源沙门菌MLST分子溯源研究
•   1 材料与方法
•     1.1 材料
•     1.2 方法
•   2 结果
•     2.1 野禽源沙门菌的MLST分子分型结果
•     2.2 野禽源沙门菌的MLST分子分型与血清型的关系
•     2.3 野禽源沙门菌的MLST分子分型与分离地的关系
•     2.4 野禽源沙门菌ST型遗传进化树
•   3 讨论
•   参考文献
• 第三章 猪霍乱沙门菌和猪霍乱沙门菌孔成道夫生物型致病性的初步研究
•   1 材料与方法
•     1.1 材料
•     1.2 方法
•   2 结果
•     2.1 菌株生长曲线
•     2.2 SPF鸡的致病性试验结果
•     2.3 SPF鸡的半数致死量的测定结果
•     2.4 SPF鸡的剖检结果
•     2.5 小鼠的半数致死量的测定结果
•     2.6 小鼠的剖检结果
•   3 讨论
•   参考文献
• 全文总结
• 致谢
• 攻读博士学位期间发表的论文
• 附录

文章来源

类型: 博士论文

作者: 李玉军

导师: 彭大新,武华

关键词: 沙门菌,野禽,血清型,耐药基因,分型,小鼠

来源: 扬州大学

年度: 2019

分类: 基础科学,农业科技

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 扬州大学

基金: 农业部动物疫情监测与防治项目(编号141821301082341003)

分类号: S852.61

DOI: 10.27441/d.cnki.gyzdu.2019.001867

总页数: 118

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