生物转化合成苯乳酸工程菌的培养条件优化

论文摘要

本研究旨在优化重组大肠杆菌Escherichia coli BL21 （DE3） harboring pRSF-aad-ldh10-fdh菌株的培养条件,获得高密的供生物转化苯丙氨酸为苯乳酸的细胞。实验考察了摇瓶发酵培养基碳源、氮源种类和浓度,3 L发酵罐中转速和通气量及恒速补料、DO-stat和pH-stat等不同分批补料策略对菌体密度的影响。结果表明,当碳源为4 g/L葡萄糖,氮源为24 g/L安琪酵母浸粉FM802,细胞干重最大可达9.24 g/L;当转速为400 r/min和通气量为1.5 vvm时,细胞干重最大可达10.18 g/L;以4 g/（L·h）恒速流加葡萄糖时,细胞干重最大可达13.71 g/L。本研究还对工程菌酶表达的诱导条件进行了优化,菌体培养2 h后,添加终浓度为0.08 mmol/L IPTG诱导剂,在25℃下诱导培养14 h所得细胞有利于生物转化。底物苯丙氨酸浓度为60 g/L,转化为苯丙酮酸的转化率为50.2%,转化为苯乳酸的转化率为35.2%。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 菌种
•   1.2 试剂
•   1.3 主要培养基
•   1.4 仪器与设备
•   1.5 实验方法
•     1.5.1 种子液培养
•     1.5.2 细胞浓度的测定
•     1.5.3 葡萄糖浓度测定
•     1.5.4 高效液相检测L-Phe、PPA及PLA
•       1.5.4.1 样品制备
•       1.5.4.2 色谱条件
•       1.5.4.3 L-Phe、PPA及PLA标准曲线的制作
•     1.5.5 发酵培养基碳源和氮源研究
•     1.5.6 3 L发酵罐通气量和转速优化
•     1.5.7 不同分批补料条件的研究
•       1.5.7.1 恒速补料对重组大肠杆菌生长的影响
•       1.5.7.2 pH-stat分批补料对重组大肠杆菌生长的影响
•       1.5.7.3 DO-stat分批补料对重组大肠杆菌生长的影响
•     1.5.8 目的蛋白诱导条件的优化
•   1.6 数据处理分析
• 2 结果与讨论
•   2.1 不同碳源、氮源种类和浓度对菌体生长的影响
•   2.2 不同控氧方式对菌体生长的影响
•   2.3 不同分批补料培养策略对菌体生长的影响
•   2.4 诱导条件对菌体密度和苯乳酸产量的影响
• 3 结论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 刘周玭,王淼

关键词: 重组大肠杆菌,培养条件,生物转化,苯乳酸,苯丙氨酸

来源: 工业微生物 2019年04期

年度: 2019

分类: 基础科学,工程科技Ⅰ辑

专业: 一般化学工业

单位: 江南大学食品学院

分类号: TQ921.3

页码: 8-15

总页数: 8

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