苹果黑腐皮壳菌CAP超家族蛋白VmPR1c的降解功能域和降解途径

论文摘要

真菌与寄主互作过程中常分泌多种效应蛋白,但植物病原真菌CAP超家族蛋白是否参与致病过程尚不明确。基于苹果黑腐皮壳菌Valsamali基因组CAP同源基因研究发现VmPR1c敲除后突变体致病性明显下降,但VmPR1c蛋白在表达过程中被降解。本研究借助BLAST、NCBI CDD web server、SignalP 4.1、TMHMM 2.0等进行序列分析,利用缺失突变法及在蛋白表达过程中加蛋白酶抑制剂分别对该蛋白的降解功能域和降解途径进行了探索。C端区段缺失突变结果显示,突变涉及CAP结构域中的α-helix结构和CBM区域时,Western blot条带呈现明显加深;涉及CTE区域及CAP结构域中的半胱氨酸时,Western blot条带则呈现不同程度地减弱。替换VmPR1c的信号肽或突变其信号肽切割位点序列,Western blot条带均有不同程度地加深。分别对CTE和NTE中的脯氨酸进行点突变后,蛋白降解更加严重。在蛋白表达过程中加入蛋白酶体抑制剂MG132和溶酶体抑制剂chloroquine,与对照VmPR1c△SP-GFP相比,Western blot结果无明显变化,表明VmPR1c蛋白序列C端区域中的CTE、信号肽及其切割位点序列以及CAP结构域中的α-helix结构介导其降解,其中CTE和NTE中的脯氨酸对该蛋白具保护作用。此外,VmPR1c的降解不通过蛋白酶体和溶酶体途径。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 材料
•   1.2 试剂
•   1.3 方法
•     1.3.1 Vm PR1c活性位点预测与效应蛋白克隆:
•     1.3.2 载体构建与农杆菌介导的烟草瞬时表达:
•     1.3.3 蛋白提取与Western blot分析:
• 2 结果与分析
•   2.1 VmPR1c序列分析与活性位点预测
•   2.2 VmPR1c的C端区域对蛋白降解的影响
•   2.3 VmPR1c信号肽及其切割位点序列对蛋白降解的影响
•   2.4 CAP结构域中α-helix结构和CTE区域影响VmPR1c的降解
•   2.5 CTE和NTE区域中的脯氨酸对蛋白的保护作用
•   2.6 VmPR1c的降解不通过蛋白酶体或溶酶体途径
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 孟香,尹志远,聂嘉俊,黄丽丽

关键词: 苹果黑腐皮壳菌,蛋白,免疫印迹,降解

来源: 菌物学报 2019年09期

年度: 2019

分类: 基础科学,农业科技

专业: 生物学,农业基础科学,植物保护

单位: 西北农林科技大学植物保护学院旱区作物逆境生物学国家重点实验室

基金: 国家自然科学基金(31871917,31671982),陕西省科技统筹计划(2017ZDCXL-NY-03-02)~~

分类号: S432.4

DOI: 10.13346/j.mycosystema.190059

页码: 1470-1479

总页数: 10

文件大小: 1738K

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