导读:本文包含了发夹状论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:发夹,因子,病毒,干扰,肝癌,白血病,基因。
发夹状论文文献综述
张晓梅,穆昌军,邵立华,张元杰,吕小红[1]（2018）在《RhoA短发夹状双链RNA对肝癌细胞HepG2生物学行为的调控研究》一文中研究指出[目的]探讨肝癌细胞HepG2中RhoA的表达水平,以及载体表达的短发夹状双链RNA(shRNA)特异性抑制RhoA在HepG2中的表达后,对肝癌细胞侵袭迁移和增殖能力的影响。[方法]RT-PCR和Western-blot方法检测RhoA在HepG2及L02中的表达;构建RhoA shRNA真核表达载体;脂质体法转染至高表达RhoA的HepG2细胞中;筛选得到稳定低表达RhoA的HepG2细胞株,用侵袭小室法(transwell)检测该细胞株侵袭和迁移能力的改变;并用染料羧基荧光素乙酰乙酸琥珀酰亚胺酯(CFSE)标记该细胞株,流式细胞仪检测细胞增殖能力的变化。[结果]HepG2中RhoA mRNA和蛋白的表达水平均显着高于正常人肝胚胎细胞系L02(两者均P<0.05)。转染pshRNARhoA真核载体特异性抑制RhoA的表达后,HepG2细胞分别在侵袭实验和迁移实验中穿过微孔膜的细胞个数均远少于对照组细胞(两者均P<0.05),增殖能力也明显减弱(P<0.05)。[结论]抑制肝癌细胞HepG2中RhoA基因的表达能降低细胞的侵袭迁移和增殖能力,部分逆转肝癌细胞的恶性表型,为进一步研究肝癌侵袭转移和增殖机制提供了实验基础。(本文来源于《临床消化病杂志》期刊2018年03期）
孙玉梅,张金盈,闫继锋,袁斌,杨鹏伟[2]（2014）在《转导骨桥蛋白短发夹状RNA预防动脉粥样硬化模型兔血管成形后的再狭窄》一文中研究指出背景:血管成形后再狭窄严重限制了经皮冠状动脉介入治疗的应用和远期疗效。平滑肌细胞的表型转变,增殖是血管成形后再狭窄的重要机制。目的:探讨利用球囊在体转导骨桥蛋白短发夹状RNA,通过抑制实验性动脉粥样硬化模型兔损伤血管部位骨桥蛋白的表达,预防血管成形后再狭窄。方法:构建动脉粥样硬化模型兔20只,随机等分成空质粒组和OPN-shRNA质粒组,分别利用球囊在腹主动脉导入OPN-shRNA质粒和空载体。结果与结论:2组兔球囊扩张后血管平滑肌层出现特异性绿色荧光,且随转染后时间的延长荧光强度逐渐降低,与空质粒组相比,OPN-shRNA质粒组兔扩张动脉的管腔面积明显增加,而斑块负荷明显减小。提示在动脉粥样硬化兔模型局部血管利用球囊导管能成功地转导OPN-shRNA质粒,被扩张血管的再狭窄程度减轻,血栓负荷减轻。这对于预防模型兔血管成形后再狭窄的发生具有十分重要的意义。(本文来源于《中国组织工程研究》期刊2014年18期）
陈佳玉,戚永孝,王泰鑫,张丽婷,林平[3]（2013）在《HCV发夹状siRNA表达质粒的构建及作用研究》一文中研究指出目的建立HCV感染动物模型,并对HCV进行RNA干涉。方法制备HCV感染的HepG2细胞,RT-PCR法鉴定后腋下注射裸鼠,免疫组化法检测瘤组织内HCV NS3表达情况。制备带绿色荧光蛋白(GFP)的HCVsiRNA表达质粒,转染HepG2细胞,观察GFP表达情况。将此质粒注射模型小鼠,取瘤组织,RT-PCR及免疫组化法对其进行检测。结果在HCV感染的裸鼠实体瘤中检测到HCV NS3蛋白的稳定表达。成功构建了HCV发夹siRNA表达质粒,该质粒转染细胞后能够在其内正确表达。将该质粒尾静脉注射HCV感染的模型小鼠,注射4d后瘤组织内HCV NS3抗原阳性细胞阴转。结论成功建立了HCV感染的裸鼠模型,构建了HCV发夹siRNA表达质粒,该质粒能成功地干涉模型小鼠中的HCV。(本文来源于《中国热带医学》期刊2013年05期）
周小江,胡园,余冰颖,刘明月,董宪喆[4]（2012）在《基于慢病毒介导短发夹状RNA沉默BDNF基因研究开心散的作用机制》一文中研究指出目的阐明脑源性神经营养因子(BDNF)在抑郁症发病中的分子机制以及经典复方开心散对RNA干扰(RNAi)沉默BDNF基因后的影响作用及分子机制。方法体外构建四条能表达针对BDNF外显子的shRNA干扰序列的慢病毒载体,将这四条慢病毒载体转染入自然表达BDNF的大鼠神经胶质瘤细胞(C6)中,通过qPCR和Western Blot筛选出BDNF基因敲减的最佳慢病毒干扰序列。将体外验证的慢病毒载体或阴性对照载体微量注射到SD大鼠双侧海马齿状回区,通过一系列行为学方法评价该模型,并研究开心散对其影响及作用机制。结果在C6细胞水平上,LVshBDNF-3的干扰作用最显着,有效敲减率达81%。在体内实验中有效沉默BDNF基因的最佳试验时间为10～33 d。微量注射慢病毒干扰载体10 d后,海马BDNF蛋白表达出现了显着的降低,同时糖水偏嗜度,open field评分水平活动和垂直活动均明显减少,而开心散能促进海马DG区BDNF沉默大鼠的体重增加和糖水摄入,显着提高水平运动和垂直运动得分,增加海马BDNF表达。Morris水迷宫实验显示沉默海马DG区BDNF基因能导致大鼠空间学习能力的显着下降,但其并不能减低大鼠的记忆能力;开心散能够明显修复RNAi所致的DG区BDNF沉默大鼠获得性学习能力的损伤,但对大鼠空间记忆的保留方面的损伤没有观察到明显的修复作用。结论海马BDNF表达与抑郁症呈负关联关系,内源性BDNF的减少能导致抑郁症的发生。开心散能够明显拮抗LVsh-BDNF-3沉默所致的低表达的海马BDNF水平,从而发挥抗抑郁作用并改善学习障碍。(本文来源于《第十五届中国神经精神药理学学术会议论文摘要》期刊2012-07-27）
周小江,胡园,余冰颖,刘明月,董宪喆[5]（2012）在《基于慢病毒介导短发夹状RNA沉默BDNF基因研究开心散的作用机制》一文中研究指出目的阐明脑源性神经营养因子(BDNF)在抑郁症发病中的分子机制以及经典复方开心散对RNA干扰(RNAi)沉默BDNF基因后的影响作用及分子机制。方法体外构建四条能表达针对BDNF外显子的shRNA干扰序列的慢病毒载体,将这四条慢病毒载体转染入自然表达BDNF的大鼠神经胶质瘤细胞(C6)中,通过qPCR和Western Blot筛选出BDNF基因敲减的最佳慢病毒干扰序列。将体外验证的慢病毒载体或阴性对照载体微量注射到SD大鼠双侧海马齿状回区,通过一系列行为学方法评价该模型,并研究开心散对其影响及作用机制。结果在C6细胞水平上,LVshBDNF-3的干扰作用最显着,有效敲减率达81%。在体内实验中有效沉默BDNF基因的最佳试验时间为10～33 d。微量注射慢病毒干扰载体10 d后,海马BDNF蛋白表达出现了显着的降低,同时糖水偏嗜度,open field评分水平活动和垂直活动均明显减少,而开心散能促进海马DG区BDNF沉默大鼠的体重增加和糖水摄入,显着提高水平运动和垂直运动得分,增加海马BDNF表达。Morris水迷宫实验显示沉默海马DG区BDNF基因能导致大鼠空间学习能力的显着下降,但其并不能减低大鼠的记忆能力;开心散能够明显修复RNAi所致的DG区BDNF沉默大鼠获得性学习能力的损伤,但对大鼠空间记忆的保留方面的损伤没有观察到明显的修复作用。结论海马BDNF表达与抑郁症呈负关联关系,内源性BDNF的减少能导致抑郁症的发生。开心散能够明显拮抗LVsh-BDNF-3沉默所致的低表达的海马BDNF水平,从而发挥抗抑郁作用并改善学习障碍。(本文来源于《中国药理学与毒理学杂志》期刊2012年03期）
岳保红,付书贞,孙晓莉,刘帅,贾宇[6]（2012）在《Nucleostemin特异性短发夹状干扰RNA对HL-60白血病细胞生物学及致瘤性的影响》一文中研究指出目的研究核干细胞因子(Nucleostemin,NS)在白血病细胞中的表达情况,以及NS特异性短发夹状RNA(shRNA)阻断NS基因表达对HL-60白血病细胞的影响,探讨核干细胞因子(NS)特异性短发夹状RNA(shRNA)沉默NS基因对白血病细胞研究NS蛋白和与急性白血病关系以及作为新的治疗靶向的可能性。方法从NS基因的叁个变异体中筛选出共同序列设计特异性引物,应用逆转录-聚合链式反应技术(RT-PCR)对(本文来源于《中华医学会第七次全国中青年检验医学学术会议论文汇编》期刊2012-05-03）
张晓梅,沈锦友,吕小红[7]（2012）在《短发夹状RNA抑制RhoA基因在HepG2细胞中的表达》一文中研究指出目的构建针对人RhoA基因的短发夹状双链RNA(shRNA)真核表达载体,观察其对人肝癌细胞株HepG2 RhoA表达的特异性抑制效应。方法设计合成针对RhoA mRNA编码序列两个不同靶点的核苷酸片断,并定向克隆到真核表达载体Pgenesil-2的U6启动子下,构建重组质粒phsRNA-RhoA1和pshRNA-RhoA2,不针对任何基因组序列的重组质粒pshRNA-HK作为阴性对照。脂质体法转染到HepG2细胞后,应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白免疫印迹法(Western-blot)分别检测RhoA基因表达的抑制效应。结果酶切鉴定和测序结果证实重组质粒均构建成功。转染HepG2后,pshRNA-RhoA2组RhoA基因mRNA和蛋白的表达水平均显着降低,与pshRNA-HK组和空白细胞组相比,差异有统计学意义(r=-19.28,t=-7.08,P<0.05)。而pshRNA-RhoA1组抑制效应不明显,差异无统计学意义(r=-0.16,t=-0.30,P>0.05)。结论构建的重组质粒pshRNA-RhoA2能特异有效地抑制RhoA基因在肝癌细胞HepG2中的表达,为进一步研究RhoA基因在肝癌中的作用提供了有效的分子工具。(本文来源于《临床消化病杂志》期刊2012年01期）
庞然然,邢丽娜[8]（2011）在《靶向VEGF发夹状RNA对宫颈癌HeLa细胞抑制作用的研究》一文中研究指出目的:运用RNAi技术下调血管内皮生长因子(VEGF)在HeLa细胞中的表达,观察其对肿瘤细胞凋亡的影响,为人宫颈癌治疗提供理论依据。方法:设计并构建针对VEGF的携带绿色荧光蛋白(GFP)发夹状RNA(shRNA)质粒表达载体(PGPU6/GFP/Neo-shRNA),脂质体法转染HeLa细胞;荧光显微镜观察GFP的表达,并计算转染效率;RT-PCR检测HeLa细胞VEGF的表达,筛选出靶序列;再用流式细胞仪法检测细胞凋亡。结果:构建的PGPU6/GFP/Neo载体成功转入HeLa细胞;转染48h后,HeLa-shVEGF1组HeLa细胞VEGFmRNA表达的抑制率为75.0%;与HeLa组和HeLa-shNC组相比,HeLa-shVEGF1组HeLa细胞凋亡率明显增加,P<0.01。结论:本研究构建的PGPU6-shRNA表达载体携带GFP便于观察细胞的转染情况,且不影响U6启动子的转录,同时有效沉默了VEGF基因,明显增加HeLa细胞的凋亡,为未来肿瘤的治疗提供新途径。(本文来源于《中华肿瘤防治杂志》期刊2011年16期）
刘矫连[9]（2011）在《慢病毒介导的Netrin-1小发夹状RNA在视网膜新生血管形成中的调控作用》一文中研究指出第一章netrin-1与VEGF在糖尿病视网膜病变患者玻璃体腔内表达水平变化及关系目的检测增殖期糖尿病视网膜病变(Proliferative diabetic retinopathyPDR)及非糖尿病视网膜病变(Non-diabetic retinopathy NDRP)患者血清及玻璃体腔内netrin-1与VEGF的水平,并对PDR患者玻璃体腔内netrin-1与玻璃体腔内的VEGF表达水平进行相关性分析,探索研究netrin-1在增殖期糖尿病视网膜病变新生血管形成过程中可能的作用。方法共18例患者18只眼纳入该研究,其中10例为PDR患者(PDR组),8例为NDRP患者(对照组)。于后部玻璃体切割术中收集未经稀释的玻璃体,并抽取适量血液标本,应用酶联免疫吸附试验方法检测玻璃体及血清中netrin-1及VEGF水平。两组间采用Mann-Whitney U检验进行统计学分析,netrin-1与VEGF水平相关性采用Spearman's轶和相关性分析。结果PDR患者玻璃体腔内netrin-1及VEGF水平均较对照组NDRP患者明显增高,分别为509.94±138.85vs.85.91±11.72pg/ml,p<0.001；762.60±143.14vs.77.52±7.75pg/ml,p<0.001。但升高的netrin-1与VEGF水平无明显相关性(rho=0.200；P=0.704)。结论Netrin-1与VEGF水平在PDR患者玻璃体中均明显增高,而且,netrin-1可能独立于VEGF在新生血管形成中起着重要的作用,并可能成为PDR的治疗靶点之一。第二章慢病毒介导的靶向netrin-1的小发夹状RNA的病毒构建包装及体外转染筛选目的构建PGCSIL-GFP'慢病毒介导的netrin-1小发夹状RNA(small hairpin RNA shRNA)及阴性对照组病毒颗粒。方法构建含netrin-1shRNA序列和阴性对照Scramble shRNA序列的慢病毒载体。将慢病毒载体与pHelper1.0载体、pHelper2.0载体共转染293T细胞,转染后8h更换为完全培养基,培养48h后,收集富含慢病毒颗粒的细胞上清液,并对其浓缩而得到高滴度的慢病毒浓缩液。将所获得的慢病毒浓缩液体外转染小鼠脑微血管内皮细胞(bEnd.3),确定其最佳转染条件。再以同法转染bEnd.3细胞,72h后提取细胞总蛋白,western-blot检测netrin-1蛋白水平表达变化。结果成功构建并包装靶向netrin-1shRNA和阴性对照组shRNA的慢病毒颗粒。与阴性对照组相比,慢病毒介导的netrin-1shRNA体外转染bEnd.3细胞可成功抑制细胞内netrin-1的表达。结论慢病毒介导的netrin-1shRNA体外转染bEnd.3可成功抑制细胞内netrin-1的表达。第叁章慢病毒介导的靶向netrin-1的小发夹状RNA抑制视网膜新生血管形成的研究目的检测netrin-1在缺氧诱导模型小鼠视网膜中netrin-1的表达,玻璃体腔内注射慢病毒介导的netrin-1shRNA抑制netrin-1在视网膜中的表达,并观察其在病理性视网膜新生血管形成中的作用。方法48只鼠龄为7天的C57BL/6J小鼠置于浓度为(75±2)%氧舱喂养5天后返回正常氧环境中。其中36只小鼠于出氧舱后一只眼玻璃体腔内注射1μ1慢病毒介导的靶向netrin-1的shRNA (5*105TU)病毒颗粒,对侧眼注射1μ1阴性对照(5*105TU)病毒颗粒。6只不作注射的高氧诱导小鼠作为模型组。另取6只小鼠于正常氧环境下饲养作为正常对照组。采用real-time PCR、Western blot等方法检测视网膜中netrin-1mRNA及蛋白质的表达水平。FITC-Dextran左心室造影视网膜铺片了解视网膜血管形态的改变,组织学切片并行H-E染色观察突破视网膜内界膜的血管内皮细胞核数量。结果：Netrin-1在P17氧诱导视网膜病变小鼠视网膜中的mRNA及蛋白表达水平较正常同龄对照组均明显增高。玻璃体腔内注射特异性慢病毒介导的netrin-1shRNA可有效抑制视网膜中netrin-1的表达,并可减少视网膜新生血管渗漏及视网膜血管无灌注区的形成,同时,慢病毒介导的netrin-1shRNA用药组突破视网膜内界膜的血管内皮细胞核数量为9.8±1.7,较同龄scramble shRNA转染组对照组(20.3±3.4)明显减少约50%以上(P<0.05)。结论netrin-1在缺氧诱导的小鼠视网膜病变中表达上调,慢病毒介导的靶向netrin-1的shRNA可有效抑制视网膜新生血管形成,为血管增殖性视网膜病变的治疗提供了新的靶点。(本文来源于《中南大学》期刊2011-06-01）
岳保红,王园园,蔚利纳,付书贞,阚全程[10]（2011）在《Nucleostemin基因特异性短发夹状干扰RNA在裸鼠移植瘤模型体内的抗白血病作用》一文中研究指出目的探讨核干细胞因子(NS)特异性短发夹状干扰RNA(NS-shRNA)在裸鼠移植瘤模型体内的抗白血病作用。方法对数生长期HL-60细胞接种于裸鼠皮下使其致瘤并洗脱,体外传至第5代再次接种裸鼠,Transwell法验证HL-60细胞体外侵袭力,建立高致瘤性HL-60白血病细胞异种移植瘤裸鼠模型。腹腔注射体外合成的NS-shRNA脂质包裹体,观察治疗前后瘤体体积、重量的变化,组织切片、HE染色观察肿瘤细胞学改变,免疫组织化学检测瘤体细胞内NS蛋白含量,TdT介导的dUTP缺口末端标记技术(Tunel)检测细胞凋亡情况。结果制备的高致瘤性HL-60细胞使30只裸鼠均形成异种移植瘤,成瘤率为100%,瘤体大小均一。腹腔注射NS-shRNA脂质包裹体13天后,治疗组裸鼠移植瘤体积增长率为207.1%,阴性和空白对照组分别为497.1%和569.6%。治疗组瘤体重量为(1.18±0.27)g,阴性和空白对照组为(2.04±0.73)g和(2.35±0.41)g。切片观察治疗组有大量斑片状组织结构破坏,并出现"凋亡特征"样细胞改变。免疫组织化学检测治疗组移植瘤细胞NS蛋白阳性率和积分值分别为(71.59±1.80)%和(110.26±13.46),阴性对照组为(90.72±1.47)%和(195.11±9.71),空白对照组为(97.33±1.76)%和(220.93±16.54),与阴性和空白对照组相比,NS蛋白表达抑制率分别为43.5%和50.1%。Tunel法检测治疗组移植瘤内出现较多凋亡细胞。结论 NS-shRNA在裸鼠移植瘤模型体内具有抗白血病作用,其作用机制之一可能是通过下调NS表达诱发白血病细胞凋亡增加。(本文来源于《肿瘤防治研究》期刊2011年05期）
发夹状论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
背景:血管成形后再狭窄严重限制了经皮冠状动脉介入治疗的应用和远期疗效。平滑肌细胞的表型转变,增殖是血管成形后再狭窄的重要机制。目的:探讨利用球囊在体转导骨桥蛋白短发夹状RNA,通过抑制实验性动脉粥样硬化模型兔损伤血管部位骨桥蛋白的表达,预防血管成形后再狭窄。方法:构建动脉粥样硬化模型兔20只,随机等分成空质粒组和OPN-shRNA质粒组,分别利用球囊在腹主动脉导入OPN-shRNA质粒和空载体。结果与结论:2组兔球囊扩张后血管平滑肌层出现特异性绿色荧光,且随转染后时间的延长荧光强度逐渐降低,与空质粒组相比,OPN-shRNA质粒组兔扩张动脉的管腔面积明显增加,而斑块负荷明显减小。提示在动脉粥样硬化兔模型局部血管利用球囊导管能成功地转导OPN-shRNA质粒,被扩张血管的再狭窄程度减轻,血栓负荷减轻。这对于预防模型兔血管成形后再狭窄的发生具有十分重要的意义。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
发夹状论文参考文献
[1].张晓梅,穆昌军,邵立华,张元杰,吕小红.RhoA短发夹状双链RNA对肝癌细胞HepG2生物学行为的调控研究[J].临床消化病杂志.2018
[2].孙玉梅,张金盈,闫继锋,袁斌,杨鹏伟.转导骨桥蛋白短发夹状RNA预防动脉粥样硬化模型兔血管成形后的再狭窄[J].中国组织工程研究.2014
[3].陈佳玉,戚永孝,王泰鑫,张丽婷,林平.HCV发夹状siRNA表达质粒的构建及作用研究[J].中国热带医学.2013
[4].周小江,胡园,余冰颖,刘明月,董宪喆.基于慢病毒介导短发夹状RNA沉默BDNF基因研究开心散的作用机制[C].第十五届中国神经精神药理学学术会议论文摘要.2012
[5].周小江,胡园,余冰颖,刘明月,董宪喆.基于慢病毒介导短发夹状RNA沉默BDNF基因研究开心散的作用机制[J].中国药理学与毒理学杂志.2012
[6].岳保红,付书贞,孙晓莉,刘帅,贾宇.Nucleostemin特异性短发夹状干扰RNA对HL-60白血病细胞生物学及致瘤性的影响[C].中华医学会第七次全国中青年检验医学学术会议论文汇编.2012
[7].张晓梅,沈锦友,吕小红.短发夹状RNA抑制RhoA基因在HepG2细胞中的表达[J].临床消化病杂志.2012
[8].庞然然,邢丽娜.靶向VEGF发夹状RNA对宫颈癌HeLa细胞抑制作用的研究[J].中华肿瘤防治杂志.2011
[9].刘矫连.慢病毒介导的Netrin-1小发夹状RNA在视网膜新生血管形成中的调控作用[D].中南大学.2011
[10].岳保红,王园园,蔚利纳,付书贞,阚全程.Nucleostemin基因特异性短发夹状干扰RNA在裸鼠移植瘤模型体内的抗白血病作用[J].肿瘤防治研究.2011
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