大肠杆菌噬菌体P88尾丝蛋白受体识别关键氨基酸位点的确定

论文摘要

温和噬菌体P88由溶原性大肠杆菌K88诱导得来,前期研究结果表明其尾丝蛋白的716-746位氨基酸为其受体识别的关键区域。本研究旨在确定该关键区域内的关键氨基酸位点。采用大肠杆菌无痕缺失的方法以溶源大肠杆菌K88的基因组为操作对象,将P88尾丝蛋白中的第716、719、721、722、725、730、734、736、744和746位的氨基酸分别定点突变为丙氨酸,丝裂霉素C诱导定点突变溶原菌K88,之后用P88的宿主菌DE048筛选和纯化定点突变噬菌体,并测定定点突变噬菌体宿主谱。在构建的10株大肠杆菌K88定点突变株中,有5株可以诱导出与亲本噬菌体P88具有相同宿主谱的噬菌体突变株,然而尾丝蛋白第719、721、730、734和736位氨基酸定点突变的K88突变株无法用DE048筛选出突变噬菌体粒子,因此推测噬菌体尾丝蛋白第719、721、730、734和736位氨基酸为其受体识别的关键氨基酸位点。本研究为温和噬菌体基因和宿主谱的改造提供了理论基础。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 菌株、质粒和培养条件
•   1.2 主要试剂与仪器
•   1.3 温和噬菌体P88改造位点及突变氨基酸的选择
•   1.4 引物设计与合成
•   1.5 打靶片段的制备
•   1.6 大肠杆菌K88感受态的制备和pKD46质粒的电击转化
•   1.7 打靶片段的电转化、阳性克隆的鉴定和pKD46的去除
•   1.8 K88-CM-ISCeⅠ感受态的制备和pERG99质粒的电击转化
•   1.9 融合PCR扩增同源重组片段
•   1.10 无痕化处理、阳性克隆的检测和pWRG99的去除
•   1.11 噬菌体突变株的诱导、纯化和宿主谱分析
• 2 结果与分析
•   2.1 质粒pKD46的电击转化
•   2.2 氯霉素抗性片段同源重组和质粒pKD46的去除
•   2.3 质粒pWRG99的电击转化
•   2.4 无痕化处理和质粒pWRG99的去除
•   2.5 噬菌体突变株的诱导
•   2.5 噬菌体突变株的纯化与宿主谱测定
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 石冬琳,李艳秀,钟黄欣,陈正阳,张子博,张炜

关键词: 温和噬菌体,受体识别,定点突变,关键氨基酸位点

来源: 畜牧与兽医 2019年07期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 南京农业大学动物医学院

基金: 国家自然科学基金项目(U1803109)

分类号: S852.61

页码: 60-66

总页数: 7

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