导读:本文包含了诱变淀粉酶基因论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:淀粉酶,基因,体外,引物,大肠杆菌,酵母,磷酸。
诱变淀粉酶基因论文文献综述
崔锦[1]（2006）在《α-淀粉酶基因的体外诱变及在毕赤酵母中表达》一文中研究指出本研究采用5-溴脱氧尿苷叁磷酸(5-BrdUTP)掺入法，即在PCR反应体系中加入一定比例的5-溴脱氧尿苷叁磷酸(5-BrdUTP)部分取代脱氧胸苷叁磷酸(dTTP)，对野油菜黄单胞菌α-淀粉酶基因(pHN8004)进行体外诱变。结果表明：5-BrdUTP浓度越高，诱变越强；浓度越低，诱变越弱。当5-BrdUTP浓度为dTTP的0.1％时，有利于筛选到高酶活的α-淀粉酶突变基因，过高的比例则产生过多的失活基因，比例太小又不足以形成一定的突变体库。用LBSP鉴别培养基进行筛选，经过3轮诱变和筛选，获得一编码α-淀粉酶且酶活力提高10倍的基因，将其克隆到pBluescript KS(+)载体中，重组质粒命名为pHNh301。序列分析发现pHNh301有叁个位点发生碱基突变，其中一个位于-35区，是A→G的转换。另外两个位于编码区，是G→A和C→T的转换，这两个碱基的突变造成两个氨基酸的改变，第一个是S263N(Ser→Asn)，在紧靠保守区3区下游。第二个是R380C(Arg→Cys)，在保守区4区下游。 将重组质粒pHNh301的α-淀粉酶基因克隆到毕赤酵母表达载体pHBM905A中，重组载体命名为pHBM905AM，将其用Sal Ⅰ酶切线性化后转化毕赤酵母GS115且实现了分泌表达。对重组酵母进行诱导，在培养温度28℃、甲醇流加量为1.0％(v／v)的情况下，第7d其分泌表达的α-淀粉酶的酶活最高，最高值为1081.30u.mL~(-1)。该酶的最适反应pH值和最适温度与出发菌株相同，分别为pH5.9和30℃。(本文来源于《河南农业大学》期刊2006-06-01）
黄春晓,崔锦,马向东[2]（2006）在《α-淀粉酶基因启动子-35区的诱变及其对大肠杆菌内表达量的影响》一文中研究指出对来自野油菜黄单胞菌的α-淀粉酶基因(Gene Bank的序列号为AY167892)的启动子进行定点诱变,研究启动子的碱基改变对该基因在大肠杆菌中表达量的影响,在基因工程中有重要的意义。以α-淀粉酶基因连接到pBluescript KS+形成的重组质粒PHNH003为模板,通过PCR得到该α-淀粉酶基因启动子-35区上游序列截短141bp的基因,并通过定点诱变改变该截短基因启动子-35区第2位和第3位的碱基(即TGCACA→TTGACA),分别把这2个基因克隆至pBlue-script KS+并转化大肠杆菌DH5α。并把PHNH003转化至大肠杆菌DH5α,作为对照菌株。结果表明,含截短基因的菌株的α-淀粉酶活性比对照菌株提高24%;含点突变的截短基因的菌株的α-淀粉酶活性比对照提高100%。并分析了α-淀粉酶基因启动子-35区上游序列及-35区2个碱基的突变对基因在大肠杆菌中表达量的影响。(本文来源于《河南农业科学》期刊2006年05期）
汪峻,周俊初[3]（2004）在《DNA Shuffling技术在野油菜黄单胞菌α-淀粉酶基因体外诱变中的应用》一文中研究指出本研究以野油菜黄单胞菌α-淀粉酶基因作为改造对象,应用DNA Shuffling技术, 期望获得其酶活性大幅度提高的α-淀粉酶基因。同时,构建α-淀粉酶基因的大肠杆菌分泌表达筛选体系。最后,采用巴氏毕赤酵母分泌表达载体pPIC9K,实现DNA Shuffling产物的表达和分泌,为实现淀粉的一步法酒精发酵创造条件。对DNA shuffling技术条件进行了摸索及优化,总结出一些规律。采用pET原核(本文来源于《湖北省生物工程学会2004年年会学术报告及论文摘要汇编》期刊2004-12-01）
马向东[4]（2000）在《α-淀粉酶基因的克隆与体外诱变》一文中研究指出本研究对α-淀粉酶基因的克隆、诱变和表达等进行了系统的研究。主要研究内容包括α-淀粉酶及其产生菌的快速鉴定新方法、高效感受态细胞的制备、α-淀粉酶基因的克隆和α-淀粉酶基因的体外诱变等四个主要方面。本研究结果为高酶活α-淀粉酶产生菌的筛选奠定了基础，有利于深入开展α-淀粉酶基因结构和功能关系的研究，并为基因的体外诱变找到了一条新的途经。 1．快速鉴定并筛选α-淀粉酶及其产生菌的新方法：锥虫蓝染料和淀粉由于静电非特异性吸附结合后使淀粉呈稳定的蓝色，当淀粉被淀粉酶水解后因分子变小吸附力减弱，而让锥虫蓝游离出来，游离的锥虫蓝被周围未水解的淀粉吸附而使颜色加深，淀粉水解区则形成无色、透明的水解圈。本研究将含锥虫蓝的培养基命名为LBSP。比较研究结果表明鉴定培养基的适宜条件是：锥虫蓝的使用浓度是0.005％-0.01％(w／v)，培养基的用量为15ml／皿左右，并可以采用0.1MPa高压蒸汽灭菌。与传统的碘-淀粉法相比，本法不但操作简便，具有相同的灵敏度和使用范围，而且对淀粉酶及其产生菌没有任何不良影响。 2．高效感受态细胞的制备：高效感受态细胞的制备是分子生物学的关键技术之一，是DNA转化的基础。已知影响感受态细胞制备的因素很多，本研究从感受态细胞制备的影响因素和转化过程对转化效率的影响因素两个方面进行了研究。结果表明：在感受态细胞制备过程中高浓度的二价金属离子(Mn~(2+)、Mg~(2+))对感受态细胞制备有害；不同的培养基对感受态细胞制备也有不同的影响；影响最大的是培养基的起始pH、培养时间和所用的器材的清洁度。本研究总结的在37℃条件下制备感受态细胞的适宜条件是：起始pH值为7.0，最适培养时间是1.2-1.5h，OD_(600)值在0.053-0.110，器皿应用去离子水清洗至少叁次以确保洁净。在转化过程方面对热激时间、热激温度、热激后的存放时间、转化容器洁净度、溶解介质、质粒大小、质粒浓度和贮存时间等进行了比较研究。结果表明：对转化效率影响的主要因素是质粒浓度和质粒大小；质粒浓度越低，转化效率越低，当浓度达到饱和后，继续增加质粒浓度，转化效率下降。质粒越大，转化效率越低。本研究在实验中对大质粒采用高效感受态细胞，小质粒采用普通感受态细胞均获得理想的转化效果。由于采用不同的转化方法对转化效率影响很大，常规转化、简单转化和快速转化的转化效率往往相差一到二个数量级，所以应根据不同的要求采用不同的转化方法。 3．α-淀粉酶基因的克隆：随着分子生物学的发展，克隆基因的方法越来越多，根据研究对象和要克隆的基因的背境。本研究分别选用了鸟枪克隆法、PCR和RT-PCR克隆法，成功地克隆到枯草芽胞杆菌(Bacillus subtilis)HN503、野油菜黄单胞菌(Xanthomonas campestris pv campestris)8004和米曲霉(Aspergillus口尽留‘)HN504的价淀粉酶基因。分别将克隆到的基因构建成的重组质粒命名为pHN503、pHN8o04和pHN504。在不知克隆基因的序列用鸟枪克隆法时，对总DNA抽提，酶切，酶连，转化等进行了研究。结果表明:主要影响因素是感受态细胞的转化效率，由于酶连产物的浓度一般都比较低，如果感受态细胞转化效率低就得不到转化子，从而无法建立总DNA文库;所以用鸟枪法克隆基因一定要用高效感受态细胞，并用 LBSP作选择培养基;采用载体去磷的方法制备载体。在已知基因序列的条件下用PCR和RT一CR克隆基因时，对PCR和RT一PCR的反应条件、产物的回收、回收产物的酶切、酶连和转化等条件进行了一系列的比较研究。结果表明:影响PCR和RT一PCR法克隆的主要因素是引物的设计、PCR和RT一PCR反应混合物组份比例与条件。在己知基因的序列条件下，借助电脑进行设计，然后合成引物，一般不难从供试生物基因组和mRNA中克隆到目的基因。 4.a一淀粉酶基因的体外诱变:本研究采用了紫外线体外诱变、基因体外截短诱变、倾向错误的PcR、DNA shuming技术和用5一澳脱氧尿昔叁磷酸代替脱氧胸昔叁磷酸等方法对a一淀粉酶基因进行了体外诱变。结果表明:紫外线对基因体外诱变无效;基因截短诱变能提高基因的表达量，从而提高a一淀粉酶的酶活，其最适方法是测定基因的序列后，合成引物用PCR的方法对基因进行截短。倾向错误的PCR是进行基因体外诱变的一个好方法，本研究总结的适宜条件是:在25闪的反应体系中，另外再添加导致倾向错误的PcR的Mncl21mM，增加Taq酶用量到5u，加入改变了碱基比例的EdN仰(1 dTTP:x dGTP:sdATP:sdCTP)，模板量应控制在能出PCR带的最低浓度。本研究用此法己成功的获得酶活提高了的a一淀粉酶基因，并将含有此基因的重组质粒命名为pHN8004一1。DNA shuffiing技术是体外诱变的最新技术，据报道已成功的将基因的酶活提高了成千上万倍;但本研究虽然对此技术的许多因素进行了研究，但关键的加引物的PCR均未能扩增出预期的特征性产物，因此DNA shuffing技术还有待进一步研究。用5一澳脱氧尿普叁磷酸代替脱氧胸营叁磷酸对基因体外诱变是本研究的一个创新，其原理是利用碱基类似物的结构相似性来造成基因突变。本研究结果表明:在常规PCR的(本文来源于《华中农业大学》期刊2000-11-20）
诱变淀粉酶基因论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
对来自野油菜黄单胞菌的α-淀粉酶基因(Gene Bank的序列号为AY167892)的启动子进行定点诱变,研究启动子的碱基改变对该基因在大肠杆菌中表达量的影响,在基因工程中有重要的意义。以α-淀粉酶基因连接到pBluescript KS+形成的重组质粒PHNH003为模板,通过PCR得到该α-淀粉酶基因启动子-35区上游序列截短141bp的基因,并通过定点诱变改变该截短基因启动子-35区第2位和第3位的碱基(即TGCACA→TTGACA),分别把这2个基因克隆至pBlue-script KS+并转化大肠杆菌DH5α。并把PHNH003转化至大肠杆菌DH5α,作为对照菌株。结果表明,含截短基因的菌株的α-淀粉酶活性比对照菌株提高24%;含点突变的截短基因的菌株的α-淀粉酶活性比对照提高100%。并分析了α-淀粉酶基因启动子-35区上游序列及-35区2个碱基的突变对基因在大肠杆菌中表达量的影响。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
诱变淀粉酶基因论文参考文献
[1].崔锦.α-淀粉酶基因的体外诱变及在毕赤酵母中表达[D].河南农业大学.2006
[2].黄春晓,崔锦,马向东.α-淀粉酶基因启动子-35区的诱变及其对大肠杆菌内表达量的影响[J].河南农业科学.2006
[3].汪峻,周俊初.DNAShuffling技术在野油菜黄单胞菌α-淀粉酶基因体外诱变中的应用[C].湖北省生物工程学会2004年年会学术报告及论文摘要汇编.2004
[4].马向东.α-淀粉酶基因的克隆与体外诱变[D].华中农业大学.2000
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