装甲RNA在牡蛎中诺如病毒4种RNA提取方法比较研究中的应用

论文摘要

RNA提取是诺如病毒检测的关键步骤,而目前贝类中诺如病毒RNA提取、检测方法的比较与评价常囿于缺乏量值明确、无生物安全隐患的标准样品作为参考依据。本研究将前期制备的GⅡ型诺如病毒装甲RNA (3.0×1010拷贝)作为标准样品,人工污染牡蛎（Ostrea gigas tnunb）消化腺匀浆物,用4种常见RNA提取方法:TRIzol试剂、Viral RNA Kit、High Pure Viral Nucleic Acid Kit、柱式病毒RNAOUT试剂盒,分别提取RNA,经实时荧光RT-PCR检测后,利用标准曲线进行定量分析,分别计算4种方法对装甲RNA的回收率。结果显示,对于匀浆样本,TRIzol法对装甲RNA的回收率最高（6.80±0.89）%,显著高于Viral RNA Kit （4.51±2.28）%,二者的回收率又显著高于High Pure Viral Nucleic Acid Kit （0.24±0.05）%与柱式病毒RNAOUT试剂盒（0.11±0.02）%（P<0.05）;对于冻干样本,Viral RNA Kit对装甲RNA的回收率最高（8.71±0.17）%,显著高于TRIzol试剂（7.12±0.64）%,二者的回收率又显著高于High Pure Viral Nucleic Acid Kit（0.33±0.12）%与柱式病毒RNAOUT试剂盒（0.06±0.01）%（P<0.05）。研究表明,TRIzol试剂与Viral RNA Kit对牡蛎消化腺样本中人工添加的装甲RNA均有良好的回收效果,同时也提示装甲RNA可作为一种良好的标准样品用于不同RNA提取试剂盒方法的评价与比较研究。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 试剂与仪器
•   1.2 样品制备
•   1.3 病毒RNA提取
•   1.4 实时荧光RT-PCR
•   1.5 回收率计算
•   1.6 统计学分析
• 2 结果
•   2.1 4种提取方法所得RNA的Ct值分析
•   2.2 4种RNA提取方法对装甲RNA回收率分析
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 曲梦,江艳华,李风铃,姚琳,逄凤娇,王联珠,翟毓秀

关键词: 诺如病毒,装甲,牡蛎,提取方法,比较

来源: 渔业科学进展 2019年06期

年度: 2019

分类: 农业科技,工程科技Ⅰ辑

专业: 轻工业手工业

单位: 中国水产科学研究院黄海水产研究所农业农村部水产品质量安全检测与评价重点实验室

基金: 国家重点研发计划(2017YFC1600703),科技部科技基础性工作专项(2013FY113300),现代农业产业技术体系(CARS-47)共同资助~~

分类号: TS254.1

DOI: 10.19663/j.issn2095-9869.20180907002

页码: 180-185

总页数: 6

文件大小: 1342K

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