导读:本文包含了酶消化法论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:胶原酶,干细胞,多糖,细胞,组织,体外,淀粉。
酶消化法论文文献综述
陈洪群,郑梅,晏乘曦,黄鹏,赵兴山[1]（2019）在《改良联合酶消化法提取成年小鼠原代心脏成纤维细胞》一文中研究指出目的探讨改良联合酶消化法是否能稳定提取成年小鼠原代心脏成纤维细胞。方法 6只C57成年小鼠拉颈处死后取心脏,然后采用改良联合酶消化法即用胰酶、Ⅱ型胶原酶于37℃恒温箱内消化心脏组织6 min,加血清终止消化,然后将含有细胞的消化液冰上储存,离心提取成年小鼠原代心脏成纤维细胞,传代后采用苏木素-伊红染色及免疫荧光法检测波形蛋白、盘状结构域受体2进行形态学和免疫学鉴定。结果采用改良联合酶消化法可以稳定地提取贴壁细胞。苏木素-伊红染色可见细胞呈梭形,贴壁生长;经免疫荧光鉴定,所提取的细胞波形蛋白、盘状结构域受体2表达阳性。结论改良联合酶消化法可以稳定地提取成年小鼠原代心脏成纤维细胞。(本文来源于《山东医药》期刊2019年21期）
赵奇慧,张恂,申刚义,刘伟志,朱丹[2]（2019）在《组织块贴壁法和混合酶消化法分离原代血管平滑肌细胞的表型特征比较》一文中研究指出目的:探究组织块贴壁法、混合酶消化法分离培养的原代大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)在形态、生长、表型特征蛋白表达方面的不同,为合理使用VSMCs提供参考。方法:分别使用组织块贴壁法和混合酶消化法分离获得原代VSMCs,进行体外传代培养,观察细胞形态及细胞表型特征蛋白免疫荧光亮度。结果:混合酶消化法获得的原代VSMCs特征蛋白SMα-actin表达明显,表明在收缩表型特征方面优于组织块贴壁法,随着传代次数的增加,混合酶消化法在第7代仍部分保留收缩表型特性,而组织块贴壁法在第7代已丧失收缩表型特性,转变为合成型。结论:混合酶消化法在获得较稳定的收缩表型VSMCs方面比组织块贴壁法更具有优势,各实验室应根据自身的实验条件和实验设计准确选择。(本文来源于《中国医药导刊》期刊2019年05期）
伏雪静[3]（2019）在《利用体外酶消化法评定非淀粉多糖酶质量的研究》一文中研究指出本研究旨在利用体外模拟动物消化方法,对非淀粉多糖酶制剂进行体外的质量评定,并用动物试验对体外结果进行验证,以建立一种快速、实用的非淀粉多糖酶制剂质量的体外评定方法。体外试验中,以小麦为底物,不同种类的非淀粉多糖酶为变量,以小麦的体外干物质消失率和非淀粉多糖酶对小麦消化残渣中非淀粉多糖含量的影响为两个测定指标。针对收集到的5种非淀粉多糖复合酶(A-E)、3种非淀粉多糖单一酶(F-H)的质量进行检测及筛选。体外试验结果表明,小麦中添加非淀粉多糖酶显着影响其体外干物质消失率(P<0.05)及消化残渣中非淀粉多糖的含量(P<0.05),且不同的非淀粉多糖酶,尤其是复合酶之间差异显着(P<0.05)。其中复合酶中效果相对较差的为酶D,效果相对较优的为酶E,单一酶中酶G的效果相对较优,酶H的效果较差。根据体外试验的评定结果,将筛选出的非淀粉多糖酶用于肉鸡小麦日粮试验。试验选取体重相近的1日龄AA雄性肉仔鸡720只,随机分为6组,每组8个重复,每个重复15只。对照组饲喂小麦基础日粮,试验组饲喂小麦基础日粮+非淀粉多糖酶D、小麦基础日粮+非淀粉多糖酶E、小麦基础日粮+非淀粉多糖酶G及小麦基础日粮+非淀粉多糖酶H,并设立玉米-豆粕型日粮组作为正对照。体内试验结果表明,酶G提高了21及42日龄肉鸡的体重(P<0.05),效果优于酶H;非淀粉多糖酶对肉鸡生长前期的生产性能影响不显着(P>0.05)。肉鸡生长后期,各组平均日增重差异显着(P<0.05),且酶G优于酶H;两种非淀粉多糖复合酶显着降低了肉鸡生长后期的料重比(P<0.05);1-42日龄,非淀粉多糖酶E组的料重比与小麦日粮对照组相比显着降低(P<0.05),效果优于酶D,与体外消化法评定结果一致。非淀粉多糖酶对小麦日粮表观代谢能的影响不显着(P>0.05)。非淀粉多糖酶E、G提高了42日龄肉鸡非淀粉多糖的消化率(P<0.05),效果分别优于酶D、H,与体外消化法评定结果一致。非淀粉多糖酶对肉鸡回肠的食糜黏度影响不显着(P>0.05)。21日龄,小麦日粮对照组的盲肠食糜黏度显着高于玉米-豆粕型日粮组;酶H组的盲肠食糜黏度显着低于对照组(P<0.05),效果优于酶G。两种单一酶对肉鸡的粪便黏度有显着影响(P<0.05),酶H显着降低了21日龄肉鸡的粪便黏度(P<0.05),效果优于酶G。酶G显着降低了42日龄肉鸡的粪便黏度(P<0.05),效果优于酶H。非淀粉多糖酶对肝脏指数、腹脂指数、胰腺指数、胸肌率及肠道指数都无显着性影响(P>0.05)。21日龄,饲喂小麦日粮的肉鸡腿肌率显着低于玉米-豆粕型日粮组(P<0.05)。添加非淀粉多糖酶使血糖浓度升高(P<0.05)。非淀粉多糖酶对空肠的形态没有影响,但影响了回肠及盲肠的形态(P<0.05)。酶G显着提高了21日龄肉鸡回肠的绒隐比,效果优于酶H,与体外消化法评定结果一致。酶E增加了42日龄肉鸡盲肠的绒毛长度,提高了绒隐比,效果优于酶D(P<0.05),与体外评定结果一致。综上所述,本研究初步建立了利用体外酶消化技术对非淀粉多糖酶制剂产品进行质量评定的方法,并对其进行了产品检测与生产验证,体内外验证结果比较一致。试验结果表明,本研究建立的非淀粉多糖酶制剂产品质量的体外评定方法,具有一定的可行性。(本文来源于《山东农业大学》期刊2019-03-27）
司旭东,翟亚东,冯瑞铮,弓军胜[4]（2018）在《非酶消化法获取脂肪来源干细胞及血管基质片段的研究进展》一文中研究指出以往脂肪来源干细胞及血管机制片段的获取更多地采用胶原酶消化法。近年来,为达到最小化人为干预、提高安全性、降低成本、促进ASC的临床应用等目的,非酶消化法富集脂肪来源干细胞及血管机制片段逐渐成为研究热点。本文将目前较为成熟的几种非酶消化法进行综述,并探讨非酶消化法的优缺点及其大规模临床应用尚需解决的主要问题。(本文来源于《世界最新医学信息文摘》期刊2018年28期）
刘影,高杰,吴补领[5]（2018）在《改良组织块酶消化法原代培养人牙髓干细胞的研究》一文中研究指出目的探索应用改良组织块酶消化法原代培养人牙髓干细胞并对细胞进行鉴定。方法选取18~26岁健康人因正畸或阻生而拔除的健康、完整、无龋坏的牙齿30颗,采用改良组织块酶消化法原代培养人牙髓干细胞并通过对细胞的形态观察、细胞表面标记物检测、多向分化能力检测和生长曲线检测等方法鉴定人牙髓干细胞。结果对人牙髓组织经改良组织块酶消化法原代培养得到的细胞形态类似于成纤维细胞和间充质细胞,生长曲线为S型,细胞表面标记物检测显示间充质干细胞标记物CD29、CD44、CD90表达阳性,造血干细胞表面标记物CD34、CD45、CD106表达阴性,同时细胞具有多向细胞分化的能力。结论应用改良组织块酶消化法可以从人牙髓组织中成功原代培养人牙髓干细胞。(本文来源于《口腔疾病防治》期刊2018年03期）
郭吉安,余丕军,王露萍,石莹莹,柳逸[6]（2018）在《比较两种酶消化法对真皮成纤维细胞的影响》一文中研究指出背景:目前真皮成纤维细胞研究应用广泛、需求量大、分离方法多,但是用于细胞分离培养的酶消化法尚未有对比研究。目的:比较两种酶消化方法分离的真皮成纤维细胞的细胞产量、形态、迁移、增殖4个方面的差异。方法:分别使用中性蛋白酶+胶原酶或胰蛋白酶分离消化真皮成纤维细胞,并进行细胞计数,原代培养并观察细胞形态学差异,采用细胞划痕实验观察细胞迁移能力并使用CCK-8检测细胞增殖活力。结果与结论:(1)采用中性蛋白酶+胶原酶消化的成纤维细胞在接种后六七天后融合,通过胰蛋白酶消化分离的成纤维细胞在八九天后融合,两种酶消化法都可获得真皮成纤维细胞;(2)与胰蛋白酶消化组相比,中性蛋白酶+胶原酶消化组的细胞产量显着增加;(3)划痕实验结果显示,胰蛋白酶消化的真皮成纤维细胞迁移速度较中性蛋白酶+胶原酶消化的细胞显着减慢;(4)两种酶消化方法分离的真皮成纤维细胞生长曲线均显示细胞数与培养时间呈正相关关系,在第3,4和5天,中性蛋白酶+胶原酶组的成纤维细胞的吸光度均显着高于胰蛋白酶组细胞的吸光度;(5)结果表明,与胰蛋白酶消化相比,用中性蛋白酶+胶原酶消化的细胞产量、迁移、增殖能力均更高;提示中性蛋白酶+胶原酶消化法优于胰蛋白酶消化法。(本文来源于《中国组织工程研究》期刊2018年08期）
张立岩,孙新,田丹,徐睿,雷昊[7]（2016）在《改良分次酶消化法分离培养兔肌腱干细胞及诱导分化鉴定》一文中研究指出目的采用改良分次酶消化法体外分离培养家兔肌腱干细胞,观察其生物学特性,并进行诱导分化及鉴定。方法无菌条件下取出家兔髌腱组织,分别运用改良的分次酶消化法和酶消化后低密度稀释接种法进行分离、培养、传代,用倒置相差显微镜观察细胞形态特征并绘制两种方法的生长曲线,通过流式细胞鉴定仪检测肌腱干细胞表面抗原标志物的表达,取P3-P4代肌腱干细胞向成骨细胞、成软骨细胞诱导分化并鉴定。结果改良的分次酶消化法较酶消化后低密度稀释接种法细胞增殖速度加快,形态均一,杂质细胞少。分离出的肌腱干细胞表面抗原标志CD90、CD44呈阳性,而CD34、CD14呈阴性,证实之前分离的细胞为肌腱干细胞。鉴定出肌腱干细胞具有向成骨细胞和成软骨细胞分化能力。结论采用改良的分次酶消化法分离培养兔肌腱干细胞简单易行,肌腱干细胞生长及传代速度可观,活性良好,纯度较高。另外,肌腱干细胞的成功分离培养,也为肌腱相关疾病的研究开辟了一条新途径。(本文来源于《中国现代医学杂志》期刊2016年18期）
徐丹丹,孙志鹏,张旭,刘东宇,许小楠[8]（2016）在《胶原酶Ⅰ消化法体外分离培养奶牛乳腺上皮细胞》一文中研究指出为获得纯净的奶牛乳腺上皮细胞,该研究采用胶原酶I消化法,在不添加外源激素及生长因子的条件下培养奶牛乳腺上皮细胞。采用差时消化与差速贴壁方法,对奶牛乳腺上皮细胞进行纯化。采用Western blot方法检测细胞中β-酪蛋白(β-casein,CNS2)的水平。通过免疫荧光技术对细胞进行鉴定。结果显示,纯化后的细胞呈现典型的"铺路石"或"鹅卵石"样。细胞角蛋白-18(cytokeratin-18,CK-18)反应呈阳性,波形蛋白反应呈阴性。细胞传至15代冻存并复苏后生长状态依然良好。这提示,胶原酶I消化法在不添加外源激素及生长因子的条件下可以获得奶牛乳腺上皮细胞,以用于后续实验。(本文来源于《中国细胞生物学学报》期刊2016年09期）
向伟,漆松涛,刘亚伟,雷炳喜,周强[9]（2016）在《改良酶消化法在人脑胶质瘤细胞快速原代培养中的应用》一文中研究指出目的建立一种人脑胶质瘤细胞原代培养的改良酶消化法。方法基于文献并结合实际工作中经验,改良既往文献报道的酶消化法,对32例不同级别的胶质瘤进行消化后行原代细胞培养,通过倒置相差显微镜观察肿瘤细胞的形态学特点,传代时采用差速贴壁法对原代细胞进行纯化。采用细胞免疫荧光法对原代细胞进行鉴定,通过细胞增殖实验(CCK-8法)绘制生长曲线,研究体外培养细胞的增殖情况。结果采用改良的酶消化法成功培养28例,失败4例,成功率为87.5%。培养成功的细胞贴壁生长,细胞状态稳定,形态各异,生长状态良好,并可传代。细胞免疫荧光检测显示胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达阳性,证明培养的细胞为胶质瘤细胞;细胞增殖实验显示细胞在体外增殖活跃,肿瘤病理级别越高,细胞增殖能力越强。结论改良的酶消化法用于人脑胶质瘤细胞原代培养具有简单、高效、成功率高等优点。(本文来源于《解放军医学杂志》期刊2016年06期）
罗菲菲[10]（2016）在《利用体外酶消化法评定植酸酶和非淀粉多糖酶质量的研究》一文中研究指出随着畜禽养殖业和饲料工业的发展,酶制剂作为一种饲料添加剂被广泛应用。植酸酶可提高磷的利用率,降低饲料中磷酸盐的添加量,减少动物排泄物中磷酸盐对环境的污染,非淀粉多糖酶可降解非淀粉多糖,降低肠道食糜粘度,提高饲料利用率。目前,酶制剂因生产菌种、基因来源和使用方式等存在差异,其活性的评定缺乏统一的标准,而且因存放条件及时效等问题,相关酶在畜禽养殖生产中应用时的实际品质和效果也无法进行客观的评定。本研究利用体外酶消化技术模拟酶在动物体内的消化过程,进行体外消化参数体系优化,并进行动物试验应用验证,建立酶产品质量的实用评定方法。开展了体外消化参数优化研究。根据前期研究已取得的结果,重点以胰酶消化时间为主进行参数优化研究。试验选择玉米样品,设3个处理,分别添加两种植酸酶和不添加植酸酶(对照),胃蛋白酶体外消化90min,胰酶分别消化2h、4h、6h、8h。消化结束后,取消化液,测定消化液中磷含量。结果表明,在胰酶溶液消化2h磷释放量达到平衡。结合前期研究结果,构建了通过两步酶消化评定植酸酶产品质量的参数体系和方法。植酸酶产品质量体外评定研究。采集常用的植酸酶产品8种(A-H),以本研究构建的方法进行了体外消化评定;选取6种植酸酶样品,将样品放置在平均温度33℃,平均湿度55%环境中,在试验的第1、3、7、14d分别取植酸酶样品,利用本研究构建的方法进行产品存放期间酶活性的评定。结果表明,添加植酸酶显着增加磷的释放量(P<0.05),不同植酸酶样品之间磷的释放量也存在明显的差异(P<0.05),植酸酶C活性相对较高,而植酸酶B活性相对较低;而且植酸酶产品在高温高湿环境存放过程中,酶活性降低,随存放时间的延长,磷的释放量显着降低(P<0.05)。综合考虑所采集植酸酶样品的类型和酶活力,试验选择活性相对较高的植酸酶C和活性相对较低的植酸酶B。进行了体外评定植酸酶产品的生产验证研究。试验选择体外评定活性相对较高的植酸酶C和较低的植酸酶B进行动物试验验证。选择7日龄AA肉仔鸡640只,随机分为4组,每组4个重复,每个重复40只。对照组饲喂基础日粮,试验组分别饲喂低磷日粮(有效磷降低0.2%)、低磷日粮+植酸酶B、低磷日粮+植酸酶C,并进行代谢试验测定了饲料磷的表观消化率。结果表明,添加植酸酶后,肉鸡体重和体增重显着高于低磷组(P<0.05),添加植酸酶显着提高了磷的表观消化率(P<0.05),低磷日粮中添加植酸酶显着增加血清磷含量,42日龄植酸酶C组显着高于低磷组和植酸酶B组(P<0.05),植酸酶显着增加了生长后期胫骨、股骨中钙、磷的含量(P<0.05),而且植酸酶C组明显优于植酸酶B组(P<0.05)。结果证明,质量不同的两种植酸酶产品对试验肉鸡的生长和骨骼钙磷沉积产生影响,植酸酶C优于植酸酶B,与本研究构建的体外消化法评定结果一致。非淀粉多糖酶酶产品质量体外评定研究。根据研究建立的胃蛋白酶-胰酶体外消化评定非淀粉多糖酶品质的方法,对采集的8种常用非淀粉多糖产品(A-H)进行体外评定。结果表明,添加非淀粉多糖酶不影响体外干物质消失率(P>0.05),但显着降低样品中NSP含量(P<0.05),而且不同的NSP酶之间差异显着(P<0.05)。非淀粉多糖酶H活性相对较高,而非淀粉多糖酶B活性相对较低。进行了体外评定非淀粉多糖酶产品的生产验证研究。试验选择体外评定活性相对较高的非淀粉多糖酶H和较低的非淀粉多糖酶B进行动物试验验证。选择1日龄AA肉仔鸡288只,随机分为4组,每组6个重复,每个重复12只。对照组饲喂玉米-豆粕型日粮、试验组分别饲喂小麦-玉米豆粕型日粮及小麦-玉米豆粕型日粮+非淀粉多糖酶B、小麦-玉米豆粕型日粮+非淀粉多糖酶H。结果表明,小麦型日粮影响肉仔鸡生产前期的采食量、日增重和料肉比(P<0.05),但对全期采食量、日增重无显着的差异(P>0.05),添加非淀粉多糖酶不影响肉仔鸡的采食量及日增重(P>0.05),显着提高了血清中血糖浓度(P<0.05),但对尿酸浓度及肉鸡的表观代谢能都无显着影响(P>0.05),与小麦日粮组及对照组相比,非淀粉多糖酶添加除对回肠长度有显着影响(P<0.05),其余各肠段的相对长度及重量均无显着影响(P>0.05)。综上所述,通过体外消化参数体系优化,构建了体外胃蛋白酶-胰酶两步消化评定植酸酶和非淀粉多糖酶产品质量的方法,并进行了样品检测验证与生产试验验证,评定方法比较可靠,尤其是植酸酶评定方法,验证结果完全一致,可满足生产评定需要。(本文来源于《山东农业大学》期刊2016-04-28）
酶消化法论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的:探究组织块贴壁法、混合酶消化法分离培养的原代大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)在形态、生长、表型特征蛋白表达方面的不同,为合理使用VSMCs提供参考。方法:分别使用组织块贴壁法和混合酶消化法分离获得原代VSMCs,进行体外传代培养,观察细胞形态及细胞表型特征蛋白免疫荧光亮度。结果:混合酶消化法获得的原代VSMCs特征蛋白SMα-actin表达明显,表明在收缩表型特征方面优于组织块贴壁法,随着传代次数的增加,混合酶消化法在第7代仍部分保留收缩表型特性,而组织块贴壁法在第7代已丧失收缩表型特性,转变为合成型。结论:混合酶消化法在获得较稳定的收缩表型VSMCs方面比组织块贴壁法更具有优势,各实验室应根据自身的实验条件和实验设计准确选择。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
酶消化法论文参考文献
[1].陈洪群,郑梅,晏乘曦,黄鹏,赵兴山.改良联合酶消化法提取成年小鼠原代心脏成纤维细胞[J].山东医药.2019
[2].赵奇慧,张恂,申刚义,刘伟志,朱丹.组织块贴壁法和混合酶消化法分离原代血管平滑肌细胞的表型特征比较[J].中国医药导刊.2019
[3].伏雪静.利用体外酶消化法评定非淀粉多糖酶质量的研究[D].山东农业大学.2019
[4].司旭东,翟亚东,冯瑞铮,弓军胜.非酶消化法获取脂肪来源干细胞及血管基质片段的研究进展[J].世界最新医学信息文摘.2018
[5].刘影,高杰,吴补领.改良组织块酶消化法原代培养人牙髓干细胞的研究[J].口腔疾病防治.2018
[6].郭吉安,余丕军,王露萍,石莹莹,柳逸.比较两种酶消化法对真皮成纤维细胞的影响[J].中国组织工程研究.2018
[7].张立岩,孙新,田丹,徐睿,雷昊.改良分次酶消化法分离培养兔肌腱干细胞及诱导分化鉴定[J].中国现代医学杂志.2016
[8].徐丹丹,孙志鹏,张旭,刘东宇,许小楠.胶原酶Ⅰ消化法体外分离培养奶牛乳腺上皮细胞[J].中国细胞生物学学报.2016
[9].向伟,漆松涛,刘亚伟,雷炳喜,周强.改良酶消化法在人脑胶质瘤细胞快速原代培养中的应用[J].解放军医学杂志.2016
[10].罗菲菲.利用体外酶消化法评定植酸酶和非淀粉多糖酶质量的研究[D].山东农业大学.2016
论文知识图
