Lactobacillus plantarumY42所产蛋白抑制Listeria monocytogenes生物膜形成的研究

论文摘要

单核细胞增生李斯特菌（Listeria monocytogenes,LM）是一种普遍的食源性致病菌,经常会在食品和食品加工设备中以生物被膜的形式存在,严重危害了食品安全以及人类健康,因此控制L.monocytogenes的生长及生物被膜的形成是食品生产过程的一个重要问题。本文研究了Lactobacillus plantarum Y42培养上清液中的粗蛋白对L.monocytogenes生物被膜形成的抑制作用。首先利用20%、40%、50%、60%、70%和80%的硫酸铵盐析L.plantarum Y42菌株MRS培养上清液,分级沉淀得到6个粗蛋白组分,通过结晶紫染色法测定6个粗蛋白组分对L.monocytogenes生物被膜形成的抑制效果。得出50%、60%、70%和80%硫酸铵盐析获得4个粗蛋白组分可以抑制L.monocytogenes生物被膜的形成（p<0.05）。其次L.plantaum Y42培养上清液中50%、60%、70%和80%硫酸铵盐析获得4个粗蛋白组分,通过降低L.monocytogenes的运动性以及胞外蛋白、胞外多糖和胞外DNA的分泌来干扰L.monocytogenes生物被膜的形成。同时50%、60%、70%和80%硫酸铵盐析获得4个粗蛋白组分可抑制L.monocytogenes在HT-29细胞上的黏附,减少L.monocytogenes刺激HT-29细胞产生白介素-8的表达量。选用环丙沙星和左氧氟沙星测定浮游态和生物被膜态L.monocytogenes的抗生素敏感性差异,50%、60%、70%和80%硫酸铵盐析获得4个粗蛋白组分可以降低环丙沙星、左氧氟沙星对生物被膜态L.monocytogenes的最小生物膜清除质量浓度（Minimum biofilm eradicate concentration,MBEC）。综上,L.plantaum Y42培养上清液的粗蛋白可以抑制L.monocytogenes生物被膜的形成,通过破坏生物被膜,使膜内部的菌体对抗生素的敏感性增强;通过降低L.monocytogenes的爬行运动性、降低L.monocytogenes分泌胞外DNA、胞外蛋白和胞外多糖、抑制L.monocytogenes在HT-29细胞上的黏附、减少L.monocytogenes刺激HT-29细胞产生白介素-8的表达量来减少L.monocytogenes形成生物被膜的量。

论文目录

• 摘要
• abstract
• 第一章 绪论
•   1.1 细菌生物被膜
•     1.1.1 细菌生物被膜的结构与特性
•     1.1.2 细菌生物被膜的形成过程
•     1.1.3 细菌生物被膜与运动性
•     1.1.4 细胞外聚合物与细菌生物被膜
•     1.1.5 抗生素与细菌生物被膜
•   1.2 致病菌及其生物被膜
•     1.2.1 李斯特菌属
•     1.2.2 单核细胞增生李斯特菌
•     1.2.3 单核细胞增生李斯特菌的生物被膜
•   1.3 乳酸菌综述
•     1.3.1 乳酸菌
•     1.3.2 乳酸菌细菌素沉淀方法
•     1.3.3 乳酸菌细菌素抑制致病菌
•   1.4 研究目的及内容
•     1.4.1 研究目的
•     1.4.2 研究内容
• 第二章 材料与方法
•   2.1 试验材料与设备
•     2.1.1 试验材料
•     2.1.2 试剂和药品
•     2.1.3 仪器和设备
•   2.2 试验方法
•     2.2.1 菌株的活化
•     2.2.2 人结肠癌细胞HT-29 的复苏、消化、铺板、冻存
•     2.2.3 L.plantarum Y42 培养上清的制备
•     2.2.4 L.plantarum Y42 培养上清中粗蛋白组分的提取
•     2.2.5 结晶紫染色法测定L.monocytogenes形成生物被膜的能力
•     2.2.6 L.monocytogenes生物被膜形成抑制实验
•     2.2.7 L.plantarumY42 粗蛋白对L.monocytogenes生物被膜形成的抑制
•     2.2.8 L.plantarumY42 粗蛋白对L.monocytogenes爬行运动性的影响
•     2.2.9 L.plantarumY42 粗蛋白对L.monocytogenes胞外聚合物的影响
•     2.2.10 抗生素敏感性
•     2.2.11 HT-29 细胞培养
•     2.2.12 L.plantarum Y42 粗蛋白对L.monocytogenes黏附HT-29 细胞的影响
•     2.2.13 L.plantarum Y42 粗蛋白对L.monocytogenes刺激HT-29 细胞产生细胞因子的变化
•     2.2.14 数据统计与分析
• 第三章 结果与讨论
•   3.1 L.plantarum Y42 培养上清中粗蛋白的浓度
•   3.2 L.plantarum Y42 培养上清中粗蛋白的硫酸铵沉淀
•   3.3 L.plantarum Y42 不同蛋白组分对L.monocytogenes生物被膜形成的抑制
•   3.4 MRS培养基中不同蛋白组分对L.monocytogenes生物被膜形成的抑制
•   3.5 L.plantarum Y42 粗蛋白对L.monocytogenes爬行运动性的影响
•   3.6 L.plantarum Y42 粗蛋白对L.monocytogenes胞外聚合物的影响
•   3.7 L.plantarum Y42 粗蛋白对L.monocytogenes生物被膜抗生素敏感性的影响
•   3.8 L.plantarum Y42 粗蛋白对L.monocytogenes黏附HT-29 细胞的影响
•   3.9 L.plantarum Y42 粗蛋白对L.monocytogenes作用于HT-29 细胞表达白介素-8 的影响
•   3.10 L.monocytogenes黏附与L.monocytogenes表达细胞因子之间的相关性分析
• 第四章 结论与展望
•   4.1 结论
•   4.2 展望
• 参考文献
• 致谢
• 附录

文章来源

类型: 硕士论文

作者: 王佳琪

导师: 妥彦峰,陈历俊

关键词: 乳杆菌,培养上清液,蛋白,单核细胞增生李斯特菌,生物被膜

来源: 大连工业大学

年度: 2019

分类: 基础科学,工程科技Ⅰ辑

专业: 生物学,轻工业手工业

单位: 大连工业大学

分类号: TS201.3

DOI: 10.26992/d.cnki.gdlqc.2019.000203

总页数: 65

文件大小: 2359K

下载量: 20