导读:本文包含了及转染论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:转染,基因,疟原虫,细胞,亚胺,聚乙烯,载体。
及转染论文文献综述
王孜恒,周敬伟,侯筱宇[1]（2019）在《Bax、Bad基因真核表达质粒构建及转染人胚肾细胞后的翻译水平观察》一文中研究指出目的构建Bcl-2相关X蛋白(Bax)、Bcl-2相关细胞死亡因子(Bad)基因真核表达质粒pcDNA3.1-Bax、pcDNA3.1-Bad,并观察两质粒转染至人胚肾293(HEK293)细胞后Bax、Bad的表达。方法采用TRIzol试剂提取大鼠脑组织总RNA,利用反转录—聚合酶链反应(RT-PCR)扩增Bax和Bad的互补DNA(cDNA)序列,将cDNA分别克隆至pcDNA3.1载体上。采用脂质体转染法将序列正确的pcDNA3.1-Bax和pcDNA3.1-Bad真核表达质粒分别转染至HEK293细胞,免疫印迹法鉴定Bax、Bad在细胞中的表达。结果双酶切和DNA测序分析显示Bax和Bad基因片段成功插入pcDNA3.1载体中,并且与其cDNA(Genbank:NM_017059.2和AF031227.1)序列完全一致。免疫印迹显示pcDNA3.1-Bax、pcDNA3.1-Bad真核表达质粒能够在HEK293细胞中高效表达。结论 pcDNA3.1-Bax、pcDNA3.1-Bad真核表达质粒构建成功,Bax、Bad在HEK293细胞中成功过表达。(本文来源于《山东医药》期刊2019年30期）
黄丽琼,郑波,镇艳芬[2]（2019）在《Gadd45α mRNA和蛋白在子痫前期胎盘组织中表达及转染siRNA对滋养细胞侵袭能力及侵袭相关分子的影响》一文中研究指出目的分析生长阻滞和DNA损伤45α(Gadd45α)蛋白和mRNA在子痫前期(PE)胎盘组织中的表达情况及转染siRNA对滋养细胞侵袭能力及侵袭相关分子的影响。方法回顾性选取咸宁市中心医院收治的40例PE胎盘组织为病例组,30例正常胎盘组织为对照组。通过免疫印迹法对两组Gadd45α蛋白表达水平进行检测,并用实时荧光定量PCR法对两组Gadd45α mRNA的相对表达量进行检测。对滋养细胞HTR8/Svneo进行培养,以转染阴性对照的siRNA为对照siRNA组,转染Gadd45α的siRNA为Gadd45α-siRNA组。在转染Gadd45α的siRNA后对滋养细胞侵袭数量和侵袭相关分子基质金属蛋白酶(MMPs)的表达水平进行检测。结果相比对照组,病例组Gadd45α蛋白表达水平明显升高(P <0. 01),Gadd45α mRNA的相对表达量明显上调(P <0. 01)。相比对照siRNA组,Gadd45α-siRNA组滋养细胞HTR8/Svneo中Gadd45α蛋白表达水平显著下降(P <0. 01),Gadd45α mRNA的相对表达量亦显着下调(P <0. 01)。随着转染siRNA时间的增加,对照siRNA组与Gadd45α-siRNA组细胞侵袭数量明显增多(P <0. 05);相比对照siRNA组,Gadd45α-siRNA组同时间点滋养细胞HTR8/Svneo侵袭数量明显增多(P <0. 01)。相比对照siRNA组,Gadd45α-siRNA组滋养细胞HTR8/Svneo侵袭相关分子MMP-1、MMP-2、MMP-3及MMP-9的表达水平均显着升高(P <0. 05)。结论 Gadd45α高表达于PE胎盘组织,而通过阻滞滋养细胞HTR8/Svneo中Gadd45α的表达水平可诱导细胞侵袭,提高侵袭相关分子MMPs的表达量。(本文来源于《临床和实验医学杂志》期刊2019年16期）
郭宇丹,曾玉燕,姜心禅,李坤寅[3]（2019）在《PTEN shRNA慢病毒载体构建及转染人子宫腺肌病细胞的稳定细胞株筛选》一文中研究指出目的构建携带绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的第10染色体丢失的磷酸酶基因(phasphatase and tensin homo-log deleted in chromosome 10,PTEN)的短发卡RNA(short hairpin RNA,shRNA)慢病毒载体,并在转染人子宫腺肌病(adenomyosis,AM)细胞后筛选最优稳转株。方法设计合成3条特异性针对人PTEN基因的shRNA序列,构建到pHBLV-U6-MCS-CMV-ZsGreen-PGK-PURO载体中,测序鉴定载体构建情况,进而包装病毒并检测滴度。筛选出最优感染复数(multiplicity of infection,MOI)、嘌呤霉素杀灭浓度后,用慢病毒液转染AM细胞,以嘌呤霉素药筛建立PTEN敲低的稳定细胞株,采用实时定量聚合酶链反应(Real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)检测转染后细胞内PTEN mRNA表达水平,蛋白免疫印迹法(Western Blot,WB)检测PTEN蛋白表达水平,以检验转染效率并筛选出干扰效率最佳的shRNA序列。结果成功构建了3个PTEN shRNA慢病毒载体,包装后以MOI为50转染AM细胞,荧光显微镜观察绿色荧光表达明显,嘌呤霉素持续药筛建立了PTEN敲低的稳定细胞株,以PTEN shRNA3慢病毒载体的干扰效率最佳(92.98%)。结论成功构建了PTEN shRNA慢病毒载体,并在体外有效转染了AM细胞,建立了PTEN敲低的稳定细胞株。(本文来源于《中药新药与临床药理》期刊2019年08期）
刘影,史小雨,王倩[4]（2019）在《伯氏疟内质网塑形蛋白SEY1敲除质粒的构建及转染》一文中研究指出目的:为了研究重要内质网塑形蛋白SEY1在疟原虫致病性方面的作用,本研究构建敲除伯氏疟原虫PbSEY1的质粒,结合疟原虫转染技术筛选PbSEY1缺失疟原虫突变体。方法:选取PbSEY1编码区中相邻的两个片段作为同源臂进行PCR扩增,并引入特定酶切位点,借助T4 DNA连接酶和In-Fusion无缝克隆的方法将其插入载体p L0034中;利用疟原虫同步化培养及电转染技术将该质粒转入疟原虫,基于基因同源重组原理在疟原虫中敲除PbSEY1并进行药物筛选。结果:(1)获得可用于基因敲除及回复实验的重组质粒pL0034-△Pb Sey1;(2)在伯式疟原虫中敲除PbSEY1。结论:利用重组质粒pL0034-△Pb Sey1和疟原虫转染技术初步获得PbSEY1缺失疟原虫突变体,为进一步研究PbSEY1在疟原虫致病性中的作用提供了必要工具。(本文来源于《天津医科大学学报》期刊2019年04期）
易文婧,阿地力江·阿不力米提,赵志刚[5]（2019）在《DPA-Zn金属阳离子脂质的合成及转染活性研究》一文中研究指出基于Zn(II)-二甲基吡啶胺(Zn-DPA)合成了含十六烷基醇疏水性尾部的单/双核金属阳离子脂质6a-6b.通过凝胶电泳、溴乙锭置换和粒径电位实验考察了它们与质粒DNA的相互作用.结果表明,两个金属脂质均可将DNA包裹缩合成具有适当粒径大小和zeta电位的纳米颗粒.并且,双核金属脂质6b具有比单核脂质6a更强的DNA结合能力.MTT细胞毒性实验显示金属脂质体/DNA复合物具有较低细胞毒性(细胞存活率大于80%).体外基因转染研究表明,单核金属脂质6a的转染效率优于双核金属脂质6b.(本文来源于《西南民族大学学报(自然科学版)》期刊2019年03期）
李书挺[6]（2019）在《酸敏感超支化聚酰胺基因载体的设计、制备及转染性能研究》一文中研究指出基因治疗作为遗传性疾病治疗的一种有效方法,随着不断的研究与发展,其在获得性疾病(如癌症)的治疗方面也展现了较大的前景和潜力。基因治疗是将新的基因导入细胞,通过修复或添加基因,以治疗疾病。基于此,基因治疗的关键在于得到一种合适的基因载体,可以安全高效地将外源正常基因导入到靶细胞。病毒载体作为一种可以高效转染的基因载体,因其具有免疫原性等安全问题,大大限制了其发展与应用;而非病毒载体因其良好的生物安全性、易制备、价格低等优点也得到了很好的发展,例如阳离子脂质和阳离子聚合物等,其在基因治疗方面具有很好的潜力。尽管阳离子聚合物作为一种成功的基因传递载体已经得到广泛的应用,但由于以下的障碍,其临床应用仍然受到限制。阳离子类型聚合物面临的障碍主要包括其毒性、内涵体逃逸、血液相容性、靶点有效的细胞内传递、复合物释放DNA以及最终的基因表达。早在30年前,阳离子聚合物作为基因载体已有报道,并且随着大量研究者的探究与发现,阳离子聚合物已经作为一种不可或缺的基因载体应用在基因治疗上。聚阳离子与带负电的DNA通过正负电荷吸引形成纳米复合物,从而使得带负电的DNA可以安全有效地进入到目的细胞内起到治疗作用。作为基因载体的阳离子聚合物主要可以分为线性聚合物和树形聚合物两大类。树形的阳离子聚合物与线性的阳离子聚合物相比较,其形貌呈现出良好的叁维球形结构,并且其表面携带大量的末端官能团、溶解性能良好、溶液粘度和熔融粘度都较小、大量的内部空腔结构等优异性能。树形聚合物所拥有的这些优异性能使其作为基因载体具有广阔的应用前景。有研究进一步表明,可降解的树枝状阳离子聚合物的转染效率比不可降解的树枝状阳离子聚合物要高大约50倍,这表明阳离子聚合物的可降解性能极大地改善其转染效率,达到更好的治疗效果。超支化聚合物具备树形聚合物的优势且其合成方法较为简易,生产成本较低,因此超支化阳离子聚合物在基因载体方面的应用更具前景。因此开发一种新型的可降解的超支化阳离子基因载体,改善细胞毒性和转染效率变得非常有意义。我们旨在开发一种新型的超支化阳离子基因载体,并研究其作为基因载体的性能。本工作以二甘油为起始原料,通过简单的改变温度制备了线性和超支化阳离子聚合物。本论文主要通过以下几个部分展开:(1)在已报道合成的两端氨基的原酸酯单体基础上,使用该单体与丙烯酸酐反应得到丙烯酰原酸酯单体,丙烯酰原酸酯单体与N-氨乙基哌嗪反应,在20℃生成线性聚酰胺胺(LPOEAMAM),在50℃得到超支化聚酰胺胺(HPOEAMAM)。通过核磁共振波谱图确定线性POEAMAM和超支化POEAMAM结构。通过倒置荧光显微镜和稳态荧光光谱仪研究超支化POEAMAM和线性POEAMAM的荧光性质。通过酸碱滴定实验验证超支化POEAMAM的质子缓冲能力。(2)阳离子聚合物作为基因递送载体的必要条件是它们能够将DNA浓缩成纳米尺寸的复合物。首先通过琼脂糖电泳验证POEAMAM压缩DNA的能力,然后经肝素钠置换实验进一步验证压缩能力。超支化POEAMAM复合物的粒径稳定在100 nm左右,电位稳定在+15 mV左右。在pH 5.5时,HPOEAMAM/DNA复合物在48 h释放DNA由87%增加至92%,LPOEAMAM/DNA复合物在48 h释放DNA由54%增加至72%。(3)通过MTT法检测线性POEAMAM和超支化POEAMAM的细胞毒性,结果显示细胞存活率均在95%以上,表明聚合物具有优异的生物相容性。通过平面细胞模型和叁维细胞模型考察POEAMAM/DNA的转染效率。倒置荧光显微镜和流式细胞仪检测结果显示超支化POEAMAM在平面细胞中具有很好的转染效率。激光共聚焦结果显示超支化POEAMAM在10%血清条件下的转染效率优于PEI-25K。本文报道了一种由丙烯酰原酸酯单体与N-氨乙基哌嗪,通过迈克尔加成聚合法合成的新型超支化POEAMAM。本研究发现新合成的聚合物具有良好的生物相容性高的转染效率。因此,在基因治疗中超支化POEAMAM具有巨大的潜力。(本文来源于《安徽大学》期刊2019-05-01）
张树华,张帆,Christopher,Burlak,陈庆[7]（2019）在《猪尾小组织块贴壁培养法分离培养成纤维细胞及转染效率的研究》一文中研究指出目的采取猪尾小组织块贴壁法成功分离培养出原代猪成纤维细胞并进行细胞不同时期的绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)阳性质粒转染效率的研究。方法猪尾小组织块贴壁培养法分离培养出原代猪成纤维细胞后,传代并进行冻存和复苏,比较猪成纤维细胞原代培养、传代培养和复苏细胞存活率。绘制细胞原代培养、传代培养和复苏后的生长情况。分别在猪尾小组织块贴壁培养获得原代成纤维细胞,细胞传代和复苏后进行细胞GFP阳性质粒的Neon电转染,比较不同转染时期细胞存活率和生长情况,转染后24h和48h分别采用荧光显微镜和流式细胞仪检测细胞的GFP质粒阳性表达率。结果猪尾小组织块贴壁培养可以成功分离培养出猪成纤维细胞,细胞冻存后复苏能保持原代细胞生物学特性,原代细胞活力很高,细胞存活率97.670%,传代培养后细胞存活率95.670%,复苏细胞存活率仍在90%以上。原代培养、传代培养和复苏培养细胞生长曲线均呈"S"型,复苏细胞生长略微缓慢。原代培养、传代培养和复苏细胞电转染后细胞存活率均有少许下降,细胞生长增殖能力减弱,但是细胞生长曲线仍呈"S"型曲线。Neon电转染后24h均可获得GFP质粒阳性表达的猪成纤维细胞,荧光显微镜均检测到GFP质粒阳性表达的成纤维细胞,48h后流式细胞仪检测显示原代细胞阳性率8.01%,稍高于传代细胞的7.91%和复苏细胞的7.86%。复苏细胞存活率下降,转染后细胞活力下降,但转染后仍可得到7.86%GFP质粒阳性表达的猪成纤维细胞,原代培养细胞能够获得更高的阳性率,差异有统计学意义。结论猪尾小组织块贴壁培养法可以成功分离培养出成纤维细胞,细胞传代会对细胞活力有影响,冻存后复苏也会影响细胞的存活率和细胞增殖能力。原代细胞、传代细胞和复苏细胞转染均能获得GFP阳性质粒表达。原代培养细胞具有更佳的细胞活力和阳性转染率,进行基因敲除或基因敲入等基因编辑和体细胞克隆研究,选择原代细胞作为转染对象能获得更好的基因编辑成功率。(本文来源于《华中科技大学学报(医学版)》期刊2019年01期）
雷鸣[8]（2018）在《可降解聚乙烯亚胺功能化磁性碳纳米管基因载体的制备、表征及转染研究》一文中研究指出基因治疗是用健康的基因替换缺陷基因的过程,添加新的基因来帮助身体对抗或治疗疾病或使有问题的基因失活。因此它在治疗与遗传疾病和癌症等基因有关的主要疾病方面具有很大的优势。在基因治疗中,基因载体的作用是将目的基因运输到宿主细胞,因此研发出一种既具有高转染效率,并且其细胞毒性低的非病毒载体是非常有必要的。本论文的着重点集中在碳纳米管/Fe_3O_4/聚乙烯亚胺基因载体。在第一章中,简述了基因载体的发展近况。概括了聚乙烯亚胺被用作非病毒载体的优势,碳纳米管在基因传递系统中的应用,以及Fe_3O_4纳米粒子在靶向治疗、诊断中的应用。在第二章中,用共沉淀法制备了羧基化CNTs/Fe_3O_4磁性纳米粒子,再将双硫键连接的聚乙烯亚胺(SSPEI)接枝到CNTs/Fe_3O_4表面,获得到了生物相容性较好的CNTs-Fe_3O_4–SSPEI磁性纳米粒子。测试了CNTs-Fe_3O_4-SSPEI纳米粒子的粒径和ζ电位,考察了CNTs-Fe_3O_4-SSPEI/DNA纳米粒子介导的pGLuc-3质粒对COS-7细胞和HeLa细胞的基因转染效率和细胞存活率。用荧光倒置显微镜观测了转染48h后的COS-7细胞中1.8KDa PEI、25KDa PEI及CNTs-Fe_3O_4--SSPEI/DNA不同纳米粒子介导的pEGFP-C1表达荧光蛋白结果。结果表明,与商用25KDa PEI相比,CNTs-Fe_3O_4-SSPEI纳米粒子有较低的细胞毒性,其基因转染效率与25KDa PEI/DNA相当。通过有无外加磁场的作用下的对比,在外加磁场作用下,CNTs-Fe_3O_4-SSPEI纳米粒子的基因转染效率高于没有外加磁场的基因转染效率。在第叁章中,通过在羧基化碳纳米管Fe_3O_4磁性纳米粒子表面上接枝酯键交联的聚乙烯亚胺(HDDAPEI),制备得到了生物相容性良好的CNTs-Fe_3O_4–HDDA-PEI磁性纳米粒子。测量了CNTs-Fe_3O_4-HDDAPEI/DNA纳米粒子的粒径和ζ电位,考察了CNTs-Fe_3O_4-HDDAPEI/DNA纳米粒子介导的pGLuc-3质粒对COS-7细胞和HeLa细胞的基因转染效率和细胞存活率。用荧光倒置显微镜观测了转染48h后的COS-7细胞中1.8KDa PEI、25KDa PEI及CNTs-Fe3O4-HDDAPEI/DNA不同纳米粒子介导的pEGFP-C1表达荧光蛋白结果。结果表明,与商用25KDa PEI相比,CNTs-Fe_3O_4-HDDAPEI纳米粒子有较低的细胞毒性,其基因转染效率与25KDa PEI/DNA基本接近。通过有无外加磁场的作用下的对比,外加磁场作用下的CNTs-Fe_3O_4-HDDAPEI纳米粒子的基因转染效率比没有外加磁场作用的高。(本文来源于《武汉工程大学》期刊2018-05-29）
徐伟[9]（2018）在《黔北麻羊TLR4基因结构分析及转染细胞对LPS的应答》一文中研究指出TLR4(Toll-like receptor 4)作为一种重要的模式识别受体(pattern recognition receptors,PRRs),在介导脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)跨膜信号转导途径中发挥主导作用,并参与介导由LPS诱导的一系列前炎性细胞因子的合成与释放,进而引发过度炎症反应(Goldammer et al.,2004),在G~-致病机理中有至关重要的作用。现已证实,在人和鼠体内TLR4都是LPS最重要的模式识别受体,作为一种跨膜信号受体,TLR4可将LPS刺激信号直接传入细胞内,在介导革兰氏阴性细菌及LPS的宿主反应中发挥关键作用(Hashimoto et al.,2004)。研究在LPS介导下TLR4基因与胞内炎症因子的变化情况是阐明TLR4基因在抗革兰氏阴性细菌感染的基本途径。本研究选择贵州黔北麻羊为试验对象,根据Gene Bank中山羊TLR4基因序列对其叁个外显子分别设计引物,采用PCR结合直接测序法对TLR4叁个外显子SNPs进行筛选;通过克隆TLR4基因CDS全长,构建重组真核表达载体pEGFP-N1-TLR4。将重组真核表达载体转染小鼠巨噬细胞(Ana-1),在转染48 h后检测GFP活性并对转染细胞以LPS诱导,在诱导后3、6、9、12、24 h收集细胞上清,Elisa对不同时间段、不同浓度LPS诱导下胞内炎症因子IL-1、IL-6和TNF-α进行检测。研究结果如下:(1)实验对贵州黔北麻羊TLR4基因3个外显子进行了SNPs筛选,共发现3个SNP位点,分别是Intron1 A+212C、Intron1 G+219A、Exon3 C+8209G,其中C+8209G位点引起所编码氨基酸由亮氨酸突变为缬氨酸。(2)实验成功克隆了黔北麻羊TLR4基因CDS全长,构建了重组表达载体pEGFP-N1-TLR4。(3)采用qRT-PCR检测了转染组及正常小鼠巨噬细胞组中的TLR4基因和TLR2基因相对表达量,结果显示TLR4 mRNA表达量在阳性转染组中较TLR2显着提高(P<0.05)。实验通过对转染48 h后的小鼠巨噬细胞分别以0 ng、100 ng、200 ng、500 ng、1000 ng、2000 ng LPS进行诱导,在诱导后3 h、6 h、9 h、12 h、24 h收集细胞上清液,对上清液中IL-1、IL-6及TNF-α3种炎症因子进行了Elisa检测,结果表明:(1)在不同浓度LPS诱导下,IL-1、IL-6和TNF-α分泌量各不相同,当LPS浓度为100 ng、200 ng时,IL-1分泌量较对照组IL-1表达量差异显着(P<0.05),当LPS浓度大于500 ng时,IL-1分泌量较对照组IL-1分泌量差异极显着(P<0.01),并且IL-1的分泌量与LPS呈现出一定剂量依赖性。(2)IL-6分泌量随时间增加而上升,在100 ng LPS刺激下,IL-6分泌量与对照组IL-6分泌量差异不显着(P>0.05),当LPS浓度大于100 ng时,IL-6分泌量与对照组IL-6分泌量差异显着(P<0.05),并且IL-6分泌量仍呈上升趋势。(3)TNF-α在100 ng的LPS诱导下其分泌量在12 h达到最大值,在24 h时TNF-α分泌量降低。并且当LPS浓度为100 ng时,TNF-α分泌量与对照组TNF-α分泌量差异极显著(P<0.01),说明此时细胞内炎症强度最高,即TLR4基因最大程度参与了对LPS的应答反应。随着LPS浓度的升高TNF-α分泌量也下降,与对照组相比差异不显着(P>0.05)。(本文来源于《贵州大学》期刊2018-04-01）
姚伟静[10]（2017）在《低分子量PEI接枝大豆蛋白基因载体的构建及转染性能研究》一文中研究指出基因缺失和异常常导致许多疾病的发生,包括癌症,心血管疾病,遗传病等,这些疾病严重危害着人类的生命健康。基因治疗作为一种新型的生物治疗手段,因其能够安全、准确、有效的修正异变基因而备受关注。然而,如何设计适合的载体将目的基因高效、准确地运载到靶细胞中仍然是目前研究的重点与难点。聚乙烯亚胺(PEI)是普遍应用的阳离子聚合物基因载体之一,因其质子化之后具有高的电荷密度和良好的质子缓冲能力。其中,高枝化度后的PEI 25 KDa和22 KDa拥有高的转染效率,因而被称作聚阳离子基因载体领域中的"黄金准则"。但是高分子量PEI细胞毒性大,生物降解能力差,易与血清蛋白结合等严重制约了其作为基因载体的应用。另一方面,低分子量的PEI尽管细胞毒性弱,但是转染效率低,有些甚至几乎没有转染效率。为了解决低分子量PEI转染效率低的问题,近年来研究人员对低分子量PEI进行了多方面的研究。本论文基于天然大分子大豆分离蛋白为起始原料制备出一类简单、可生物降解、高效的的聚阳离子基因载体。首先对大豆分离蛋白进行酶解,接着离心和透析纯化,得到具有良好水溶性的低分子量大豆蛋白(SP)。将不同低分子量的PEI(600 Da,1200 Da,1800 Da)通过酰胺化反应修饰在大豆蛋白上得到一系列大豆蛋白-PEI复合产物(SP-PEIs),分别命名为SP-PEI600,SP-PEI1200,SP-PEI1800。经过红外和Zeta电位等实验证实,不同低分子量PEI成功地接枝到大豆蛋白上。通过酸碱滴定实验证明聚合物SP-PEIs的质子缓冲能力,通过蛋白吸附实验检测聚合物SP-PEIs对血清蛋白的抑制作用。接下来,复合物SP-PEIs/DNA的理化性质得到进一步详细研究。聚合物与DNA形成的复合物具有理想的粒径和电位有利于其快速进入细胞和提高基因转染。在pH为7.4的生理条件下,SP-PEIs与DNA形成的复合物随着N/P质量比的增加,复合物的粒径逐渐发生改变,最终会稳定在100-200nm左右,复合物SP-PEIs/DNA的电位也是随着N/P质量比的增大而增长。检测不同pH下复合物SP-PEIs/DNA粒径的变化,发现其在生理条件下(pH=7.4)可以稳定存在,在酸性条件下粒径发生明显变化,该特性有助于复合物上中的DNA从内涵体中逃逸出来。另外,通过琼脂糖电泳实验检测聚合物SP-PEIs对DNA的压缩能力,DNase I降解实验和肝素置换实验则进一步检测聚合物对DNA的压缩能力。之后,通过一系列细胞实验进一步评估了聚合物SP-PEIs作为基因载体的潜力和优势。枝化的PEI 25 KDa作为对照组,体外细胞毒性实验表明,在人肾上皮细胞(293T)、人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)共培养中,聚合物SP-PEIs均表现出比对照组PEI 25 KDa更低的毒性及良好的生物相容性。利用流式细胞仪和荧光倒置显微镜检测SP-PEIs/DNA复合物在有血清和无血清环境下的转染效率。结果证明,无论在有血清和无血清条件下复合物SP-PEIs/DNA在SH-SY5Y细胞系均有较高的转染效率。特别是聚合物SP-PEI1800与DNA在质量比为24时,无血清条件下转染效率(5.27%)是对照组(1.94%)的2.7倍,在有血清条件下则高达3.4倍;而在293T细胞中,无血清条件下聚合物SP-PEI1800与质粒DNA质量比为24的时候最高转染效率(15.1%)和对照组的转染效率(16.6%)几乎相当;同样的在有血清状态下,聚合物SP-PEI1800(8.19%)也能取得和对照组类似的转染效率(7.22%)。本论文制备的复合物SP-PEIs作为新型的基因载体,具有较低的细胞毒性,良好的生物相容性,同时能够降低血清蛋白的吸附,提高DNA在细胞中的的稳定性,并促进基因转染效率的提升。因此,在基因治疗的应用中,聚合物SP-PEIs作为基因载体拥有巨大的潜在应用价值。(本文来源于《安徽大学》期刊2017-05-01）
及转染论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的分析生长阻滞和DNA损伤45α(Gadd45α)蛋白和mRNA在子痫前期(PE)胎盘组织中的表达情况及转染siRNA对滋养细胞侵袭能力及侵袭相关分子的影响。方法回顾性选取咸宁市中心医院收治的40例PE胎盘组织为病例组,30例正常胎盘组织为对照组。通过免疫印迹法对两组Gadd45α蛋白表达水平进行检测,并用实时荧光定量PCR法对两组Gadd45α mRNA的相对表达量进行检测。对滋养细胞HTR8/Svneo进行培养,以转染阴性对照的siRNA为对照siRNA组,转染Gadd45α的siRNA为Gadd45α-siRNA组。在转染Gadd45α的siRNA后对滋养细胞侵袭数量和侵袭相关分子基质金属蛋白酶(MMPs)的表达水平进行检测。结果相比对照组,病例组Gadd45α蛋白表达水平明显升高(P <0. 01),Gadd45α mRNA的相对表达量明显上调(P <0. 01)。相比对照siRNA组,Gadd45α-siRNA组滋养细胞HTR8/Svneo中Gadd45α蛋白表达水平显著下降(P <0. 01),Gadd45α mRNA的相对表达量亦显着下调(P <0. 01)。随着转染siRNA时间的增加,对照siRNA组与Gadd45α-siRNA组细胞侵袭数量明显增多(P <0. 05);相比对照siRNA组,Gadd45α-siRNA组同时间点滋养细胞HTR8/Svneo侵袭数量明显增多(P <0. 01)。相比对照siRNA组,Gadd45α-siRNA组滋养细胞HTR8/Svneo侵袭相关分子MMP-1、MMP-2、MMP-3及MMP-9的表达水平均显着升高(P <0. 05)。结论 Gadd45α高表达于PE胎盘组织,而通过阻滞滋养细胞HTR8/Svneo中Gadd45α的表达水平可诱导细胞侵袭,提高侵袭相关分子MMPs的表达量。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
及转染论文参考文献
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