来源于Xylophilus ampelinus的卤醇脱卤酶的克隆表达及应用

论文摘要

卤醇脱卤酶可以高对映选择性地催化环氧化物和邻卤醇之间的相互转化,用于合成各种光学纯的卤代醇、环氧化物和β-取代醇。利用数据库挖掘技术,从Xylophilus ampelinus中获得一种新型卤醇脱卤酶HHDH-Xa基因,对其进行了克隆,以pET-28a（+）作为表达载体,在大肠杆菌BL21（DE3）中实现了高效重组表达。序列分析结果表明,该片段包含681个核苷酸,编码226个氨基酸。SDS-PAGE分析结果表明,该酶的分子量约为25kDa。底物特异性研究发现,该酶具有较宽的底物谱,分别对苯基缩水甘油醚和1,3-二溴-2-丙醇表现出了较高的活性。卤醇脱卤酶HHDH-Xa催化1-氯-3-苯氧基-2-丙醇的生物级联反应可以获得光学纯的（R）-1-氯-3-苯氧基-2-丙醇及相应的1-叠氮-3-苯氧基-2-丙醇。

论文目录

• 1 实验
•   1.1 试剂与仪器
•   1.2 质粒、菌株与培养基
•   1.3 目的基因的合成
•   1.4 表达载体的构建
•   1.5 目的蛋白的诱导表达
•   1.6 序列分析
•   1.7 底物特异性研究
•   1.8 分析方法的建立
•   1.9 利用卤醇脱卤酶生物级联合成光学纯的 （R） -1-氯-3-苯氧基-2-丙醇
• 2 结果与讨论
•   2.1 卤醇脱卤酶HHDH-Xa的氨基酸序列比对与分析
•   2.2 卤醇脱卤酶HHDH-Xa的诱导表达
•   2.3 卤醇脱卤酶HHDH-Xa的底物特异性研究
•   2.4 利用卤醇脱卤酶HHDH-Xa生物级联合成光学纯的 （R） -1-氯-3-苯氧基-2-丙醇
• 3 结论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 亚香菊,王于齐,朱鑫海,经玉洁,林茜,高健

关键词: 卤醇脱卤酶,基因克隆,表达,应用

来源: 化学与生物工程 2019年02期

年度: 2019

分类: 工程科技Ⅰ辑,基础科学

专业: 生物学

单位: 江苏科技大学环境与化学工程学院,盐城工学院海洋与生物工程学院

基金: 江苏省高校自然科学基金项目(16KJB180029)

分类号: Q78

页码: 21-27

总页数: 7

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