人5型腺病毒结合抗体检测方法的建立和应用

论文摘要

目的:建立人5型腺病毒（HAdv5）结合抗体检测方法,用于检测动物实验中血清的抗HAdv5结合抗体水平。方法:将复制缺陷型HAdv5感染293F细胞,大量表达HAdv5抗原蛋白,经Source 30Q和Sepharose 4FF两步柱层析,获得高纯度的HAdv5抗原蛋白,分别采用SDS-PAGE、HPLC和Western印迹对纯化的抗原进行鉴定,并与市售的HAdv5-Hexon进行对比分析。用纯化的HAdv5抗原蛋白建立HAdv5结合抗体检测方法,分别对包被液、抗原包被量和二抗工作浓度等检测条件进行摸索,对该方法的特异性和稳定性进行验证,并检验该方法检测结果与相应HAdv5中和抗体的相关性。最后将该检测方法应用于HAdv5载体疫苗免疫小鼠血清的HAdv5载体结合抗体水平检测。结果:获得纯度大于95%的HAdv5抗原蛋白,与市售HAdv5-Hexon相对分子质量大小一致,经HPLC和Western印迹鉴定其为HAdv5-Hexon蛋白。用纯化的HAdv5-Hexon作为抗原建立了HAdv5结合抗体检测ELISA法,确定抗原包被浓度为2μg/mL。该检测方法与其他亚型腺病毒如HAdv4、HAdv7具有一定的交叉反应,但对于无关病毒具有良好的特异性;同时该检测方法具有良好的稳定性,板内重复变异系数小于10%,板间和日间重复变异系数小于15%。该检测方法对HAdv5载体疫苗免疫小鼠血清的检测结果与HAdv5中和抗体检测结果具有良好的相关性。应用于HAdv5载体疫苗免疫小鼠血清的HAdv5结合抗体水平检测,充分显示了该法的快速、简便及高灵敏度和准确度的优势。结论:建立了稳定可靠的HAdv5结合抗体检测方法,可用于SPF级动物模型HAdv5载体结合抗体检测。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 材料
•   1.2 HAdv5抗原的表达与纯化
•   1.3 HAdv5抗原的鉴定
•   1.4 ELISA检测方法的建立
•   1.5 ELISA检测方法的验证
•   1.6 HAdv5结合抗体检测方法的应用
•   1.7 统计分析
• 2 结果
•   2.1 HAdv5-Hexon的表达、纯化与鉴定
•   2.2 HAdv5结合抗体检测方法的建立和优化
•   2.3 HAdv5结合抗体检测方法的验证
•   2.4 HAdv5结合抗体检测方法的应用
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 王玉东,赵拯浩,宋小红,陈旖,王步森,吴诗坡,侯利华

关键词: 人型腺病毒,六邻体蛋白,酶联免疫吸附实验,结合抗体

来源: 生物技术通讯 2019年05期

年度: 2019

分类: 基础科学,医药卫生科技

专业: 生物学,基础医学

单位: 军事科学院军事医学研究院生物工程研究所

基金: 国家科技重大专项艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治（2016ZX10004001-009）

分类号: R392-33

页码: 636-642

总页数: 7

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