Bacillus cereus胶原蛋白酶功能基因分析与结构预测

论文摘要

以一株降解骨胶原蛋白的菌种蜡样芽孢杆菌（Bacillus cereus） MBL13-U作为出发菌种,通过对菌全基因组测序,针对胶原蛋白酶功能基因进行了定位和结构预测。结果表明,从全基因组序列中得到胶原蛋白酶的功能基因序列长度为2 916 bp;该功能基因中α螺旋占总氨基酸的37. 1%,β转角占12. 8%,无规则卷曲占26. 0%,且该酶的三维结构预测为镊子状结构。将胶原蛋白酶基因转入大肠杆菌宿主菌株BL21,构建出工程菌p ET30aCol M13/BL21。对工程菌所产的重组蛋白酶Col M13酶解Ⅰ型骨胶原蛋白的结构进行分析表明,酶解作用使骨胶原蛋白产生多肽和大量游离氨基酸,其微观结构发生显著变化,表明Col M13在工程菌中已成功表达。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 材料与试剂
•     1.1.1 菌种和质粒
•     1.1.2 PCR引物
•     1.1.3 工具酶与主要试剂
•     1.1.4 主要培养基
•     1.1.5 仪器与设备
•   1.2 试验方法
•     1.2.1 全基因组测序
•     1.2.2 基因组数据分析
•     1.2.3 胶原蛋白酶的结构预测
•     1.2.4 ColM13基因克隆
•     1.2.5 大肠杆菌BL21感受态的制备
•     1.2.6 重组表达载体p ET30a-ColM13及工程菌的构建
•     1.2.7 重组蛋白酶ColM13的诱导表达
•     1.2.8 重组蛋白酶Col M13酶解骨胶原蛋白的结构分析
•       1.2.8. 1 紫外 （UV） 扫描分析
•       1.2.8. 2 扫描电镜 （SEM） 分析
• 2 结果与分析
•   2.1 全基因测序分析
•     2.1.1 Solexa数据拼装
•     2.1.2 基因预测
•   2.2 基因功能注释及代谢途径分析
•   2.3 功能基因的定位
•   2.4 胶原蛋白酶的结构预测
•   2.5 ColM13基因克隆
•   2.6 重组子的检测
•   2.7 ColM13的诱导表达
•   2.8 UV光谱分析
•   2.9 ColM13作用于胶原蛋白的扫描电镜分析
• 3 结论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 刘丽莉,代晓凝,陈珂,孟圆圆,郝威铭

关键词: 蜡样芽孢杆菌,胶原蛋白酶,克隆与表达,结构预测

来源: 食品与发酵工业 2019年08期

年度: 2019

分类: 工程科技Ⅰ辑,基础科学

专业: 生物学,轻工业手工业

单位: 河南科技大学食品与生物工程学院,食品加工与安全国家级教学示范中心(河南科技大学)

基金: 国家自然科学基金(31401622),河南省重大专项(161100110900,161100110600-2,161100110700-2,161100110800-06)

分类号: TS251.94;Q78

DOI: 10.13995/j.cnki.11-1802/ts.019054

页码: 29-35

总页数: 7

文件大小: 2502K

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