茂源链霉菌MTG基因pMA5载体的构建及鉴定

论文摘要

[目的]提高MTG产量并实现简便有效的纯化过程,以枯草芽孢杆菌为宿主构建pMA5mtg重组质粒。[方法]通过提取茂源链霉菌的基因组DNA,扩增mtg基因片段,再将异源信号肽与mtg基因片段进行融合,融合片段和pMA5质粒双酶切后连接,转化到大肠杆菌感受态细胞中,菌落PCR和测序获得阳性单克隆。然后将pMA5mtg重组质粒转入枯草芽孢杆菌感受态中,通过抗性筛选和双酶切鉴定获取重组菌株。[结果]成功扩增出mtg基因片段,构建出重组质粒pMA5mtg。[结论]获得pMA5mtg重组表达菌株,为MTG的纯化及其未来生物工程的改造提供了有效的方法。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 材料
•     1.1.1 材料。
•     1.1.2 主要试剂。
•   1.2 方法
•     1.2.1 大肠杆菌DH5α感受态的制备。
•     1.2.2 枯草芽孢杆菌感受态的制备。
•     1.2.3 质粒和基因组DNA的提取。
•     1.2.4 mtg重组表达载体pMA5mtg的构建。
•     1.2.5 大肠杆菌的电转化。
•     1.2.6 枯草芽孢杆菌的电转化。
• 2 结果与分析
•   2.1 SPwapA信号肽的扩增
•   2.2 S.mobaraensis mtg的扩增
•   2.3 SPwapA与mtg的融合
•   2.4 连接和大肠杆菌转化后阳性克隆鉴定
•   2.5 双酶切验证
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 陆姣姣,朱婧,穆冬冬,姜绍通,郑志

关键词: 信号肽,载体,枯草芽孢杆菌

来源: 安徽农业科学 2019年13期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学

单位: 合肥工业大学食品与生物工程学院,安徽农业大学理学院

基金: 安徽省自然科学基金项目(1708085QC65)

分类号: Q78

页码: 92-94

总页数: 3

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