CPT诱导外周血破骨细胞凋亡作用及其分子机制研究

论文摘要

目的:探讨环化变构肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（CPT）诱导外周血破骨细胞凋亡作用及其分子机制。方法:外周血单个核细胞（PBMC）经巨噬细胞集落刺激因子（M-CSF）及可溶性核因子κB受体活化因子配体（sRANKL）诱导培养成熟破骨细胞,采用不同浓度的CPT诱导破骨细胞凋亡,应用Annexin V-FITC荧光染色法检测CPT诱导破骨细胞凋亡,RT-PCR检测破骨细胞中CPT受体mRNA表达变化的影响。结果:PBMC在RANKL和M-CSF细胞因子诱导下培养21 d,均生成了具有骨吸收活性的破骨细胞。在2×106的接种密度下诱导产生破骨细胞的数量（细胞因子含量:30 ng/mL RANKL和30 ng/mL M-CSF）在5×105接种密度下（细胞因子含量:30 ng/mL RANKL和30 ng/mL M-CSF）的2倍。通过抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）染色后,不同浓度（0、100、500 ng/ml）CPT作用正常人的破骨细胞24 h和48 h后,出现明显的细胞凋亡特征,Annexin V-FITC染色后,经荧光显微镜观察,0 ng/ml CPT诱导的对照组极少细胞被染色（绿色荧光）;对比发现100、500 ng/ml CPT诱导的给药组中出现大量绿色荧光阳性细胞,进一步研究显示,100、500 ng/ml CPT处理破骨细胞24 h后,破骨细胞凋亡率由1.7%（0 ng/ml）上升到9.1%（100 ng/ml）和13.7%（500 ng/ml）,差异有统计学意义（P<0.05）;处理48 h后,由2.1%（0 ng/ml）上升为13.8%（100 ng/ml）和21.9%（500 ng/ml）,差异有统计学意义（P<0.05）,并且发现48 h凋亡数量明显多于24 h（P<0.05）。不同浓度的CPT（100 ng/ml、500 ng/ml）处理破骨细胞24 h后,TRAIL的相关死亡受体4（DR4）、死亡受体5（DR5）、诱骗受体1（DcR1）及诱骗受体2（DcR2）的mRNA表达差异无统计学意义（P>0.05）,处理48 h后,DR5的mRNA表达量由1.20±0.26（0 ng/ml）下降为1.00±0.26（100 ng/ml）、0.60±0.09（500 ng/ml）,差异有统计学意义（P<0.05）。结论:CPT能以时间-浓度依赖性的诱导外周血源破骨细胞凋亡,其作用机制可能是通过下调DR5的mRNA表达水平诱导其凋亡。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 主要材料和试剂
•   1.2 破骨细胞的培养与鉴定
•   1.3 Annexin V-FITC荧光染色法检测CPT诱导破骨细胞凋亡
•   1.4 RT-PCR检测破骨细胞在CPT处理前后相关受体mRNA的表达
•   1.5 统计学分析
• 2 结果
•   2.1 TRAP染色鉴定不同细胞密度对生成破骨细胞的影响
•   2.2 CPT对破骨细胞凋亡的影响
•   2.3 RT-PCR法检测CPT相关受体DR4、DR5、DcR1及DcR2在破骨细胞上表达情况
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 滑欢,冯玲玲,张学军,杨敬慈,温树鹏,王福旭

关键词: 外周血单个核细胞,破骨细胞

来源: 临床血液学杂志(输血与检验) 2019年06期

年度: 2019

分类: 医药卫生科技,基础科学

专业: 生物学,基础医学

单位: 河北医科大学第二医院血液科,扬州大学附属医院

分类号: R329.2

DOI: 10.13201/j.issn.1004-2806-b.2019.12.003

页码: 913-918

总页数: 6

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