A.veronii TH0426株△preA和△dotU突变株的构建及其相关生物学特性分析

论文摘要

维氏气单胞菌（Aeromonas veronii）已逐渐成为一种严重的人-兽-水生生物共患病原菌,近年来,其流行性、毒力以及耐药性呈现日渐增强的趋势,仅凭常规致病性的分析难以阐述其复杂的致病机制,因此,对未知毒力因子的研究显得尤为重要。已有研究证明,preA基因为参与菌株全局调控的周质蛋白控制基因,dotU为VI型分泌系统的内膜蛋白组分控制基因,但A.veronii中是否也具有类似的功能,则尚未见报道。因此,对这两种毒力因子的研究将为我们进一步明确A.veronii复杂的致病机制提供一定的帮助。本试验扩增了A.veronii TH0426株preA基因的同源臂序列,共培养促其发生同源重组,成功构建了缺失突变体△preA以及互补株C-preA,且遗传稳定性检测结果显示缺失株△preA和互补株C-preA具备良好的遗传稳定性,能稳定遗传达50代次以上。生理生化结果发现,缺失株△preA对L010-水杨苷的代谢为变为阳性,互补株C-preA则恢复为阴性,缺失株△preA对羧苄西林和哌拉西林两种药物敏感性下降。对EPC细胞的黏附侵袭能力检测结果显示,缺失株△preA对EPC细胞的黏附侵袭能力相较于野生株显著上升2.1倍。动物致病性试验以及细胞毒性试验较野生株分别上升了7.6倍和1.4倍。而耐受性试验结果显示,缺失株△preA对氧化应激耐受性相较于野生株显著降低,且相关基因表达量呈上调趋势。结果表明,preA基因缺失后A.veronii氧化应激耐受性降低,但毒力却出现增强趋势。同样,利用基因敲除的方法成功构建了能够稳定遗传的dotU基因缺失株和相应的互补株。药敏试验和生理生化结果分析发现,缺失株△dotU的药敏特性及生理生化分析无显著变化。对EPC细胞的黏附侵袭能力试验结果显示,缺失株△dotU对EPC细胞的黏附侵袭能力显著下降了1.9倍。动物致病性试验和细胞毒性试验结果显示,缺失株△dotU对动物的致病性和对细胞的毒性相较于野生株降低了50.4倍和2.1倍。生物被膜形成能力检测结果显示,缺失株△dotU的生物被膜形成能力增强了2.1倍,而相关耐受性则无明显变化。结果表明,dotU基因缺失之后,A.veronii毒力显著下降。综上所述,本试验通过构建缺失株△preA和△dotU以及相应的互补株C-preA和C-dotU,表征了其与野生株之间的生物学特性差异,通过分析,我们推测由preA基因编码的高pH诱导的周质蛋白与A.veronii的致病性以及毒力密切相关,且与应激耐受能力也存在重要关联,而dotU基因编码的VI型分泌系统内膜蛋白与TH0426的致病性和毒力紧密相关;此部分的研究成果将为进一步明确A.veronii复杂的致病机制提供一些参考。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 前言
• 第一篇 文献综述
•   第一章 维氏气单胞菌的研究进展
•     1.1 维氏气单胞菌概述
•     1.2 气单胞菌致病机制及毒力因子
•     1.3 维氏气单胞菌的流行现状
•   第二章 VI型分泌系统研究进展
•     2.1 VI型分泌系统
•     2.2 T6SS的调节
•     2.3 T6SS介导的杀伤机制
• 第二篇 研究内容
•   第一章 A.veronii TH0426株△preA突变株的构建及其相关生物学特性分析
•     1.1 材料
•     1.2 方法
•     1.3 结果
•     1.4 讨论
•     1.5 小结
•   第二章 A.veronii TH0426株△dotU突变株的构建及其相关生物学特性分析
•     2.1 材料
•     2.2 方法
•     2.3 结果
•     2.4 讨论
•     2.5 小结
• 结论
• 参考文献
• 作者简介
• 致谢

文章来源

类型: 硕士论文

作者: 宋海超

导师: 李影

关键词: 维氏气单胞菌,基因,毒力

来源: 吉林农业大学

年度: 2019

分类: 基础科学,农业科技

专业: 生物学,畜牧与动物医学,水产和渔业

单位: 吉林农业大学

基金: 国家自然基金项目 (31201927),国家重点研发计划 (2017YFD0501000),吉林省科技厅自然科学基金(学科布局项目)(20170101016JC)

分类号: S941.4;S852.61

DOI: 10.27163/d.cnki.gjlnu.2019.000645

总页数: 91

文件大小: 5341K

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