猪链球菌2型溶血素基因的表达及其免疫原性

论文摘要

【背景】猪链球菌（Streptococcus suis,SS）是一种重要的人兽共患病原菌,有35种血清型,其中以猪链球菌2型（SS2）危害最为严重。研究发现,各种血清型SS分泌的溶血素（Suilysin,SLY）可能具有较好的免疫保护作用,因此,SLY作为SS基因工程亚单位疫苗的成分具有较大优势。【目的】获得SS2安徽强毒株（AH10-8株）溶血素基因（sly）的表达产物,并对其免疫原性进行测定分析。【方法】根据GenBank数据库中登录号为DQ443533.1的全长sly序列,设计合成一对分别带有Bam HI、XhoI酶切位点的特异性引物,利用PCR从AH10-8株中扩增sly基因,构建pET-30a-sly原核表达重组质粒,将重组质粒转化大肠杆菌BL21（DE3）中,进行IPTG诱导表达和His-Tag镍柱纯化蛋白,SDS-PAGE检测SLY,Western blotting鉴定SLY的反应原性;利用昆明鼠和斑马鱼进行SLY免疫攻毒保护试验,间接ELISA方法检测昆明鼠血清IgG抗体效价,观察比较病理组织变化及其免疫保护率。【结果】重组质粒pET-30a-sly在大肠杆菌中实现高效表达,获得大小为60kD的目的蛋白,与预期大小的SLY分子质量一致,能与SS2阳性血清发生特异性反应。SLY和AH10-8株灭活全菌体3次免疫昆明鼠后的血清IgG抗体效价分别为1:6 400、1:204 800 （以AH10-8株全菌体的超声裂解物为包被抗原）和1:102 400、1:51 200 （以SLY为包被抗原）;SLY和AH10-8株灭活全菌体对昆明鼠和斑马鱼的免疫保护率分别为40%、80%和84%、92%;病理组织变化与攻毒对照组之间差异明显。【结论】成功表达的SLY具有良好的反应原性和免疫原性,可诱导机体产生保护性免疫反应,有望成为研制SS2新型疫苗的候选成分。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 菌株、血清及载体
•   1.2 主要试剂及仪器
•   1.3 试验动物
•   1.4 基因组DNA的提取
•   1.5 sly基因的PCR扩增
•   1.6 重组表达载体的构建与鉴定
•   1.7 重组SLY的表达与纯化
•   1.8 重组SLY的溶血活性检测
•   1.9 重组SLY的细胞毒性检测
•   1.1 0 重组SLY的Western blotting分析
•   1.1 1 重组SLY的免疫攻毒保护性试验
•     1.1 1.1 安全性试验
•     1.1 1. 2 动物免疫试验
•     1.1 1. 3 昆明鼠血清IgG检测
•     1.1 1. 4 攻毒试验率
•     1.1 1. 5 病理学观察
• 2 结果与分析
•   2.1 重组SLY的表达与纯化
•   2.2 重组SLY的溶血活性检测
•   2.3 重组SLY的细胞毒性检测
•   2.4 重组SLY的Western blotting分析
•   2.5 重组SLY的免疫攻毒保护性试验
•     2.5.1 安全性试验
•     2.5.2 昆明鼠血清IgG检测
•     2.5.3 昆明鼠、斑马鱼免疫保护率
•     2.5.4 病理组织学观察
• 3 讨论
• 4 结论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 吴华健,毛天骄,杨龙斌,王玮,魏建忠,孙裴,李郁

关键词: 猪链球菌型,溶血素基因,原核表达,免疫原性

来源: 微生物学通报 2019年03期

年度: 2019

分类: 基础科学,农业科技

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 安徽农业大学动物科技学院

基金: 国家星火计划重点项目(2014GA710002),安徽省长三角联合科技攻关项目(1101c0603065),安徽省生猪产业体系基金(皖农科[2016]84号)~~

分类号: S852.61

DOI: 10.13344/j.microbiol.china.180160

页码: 624-637

总页数: 14

文件大小: 1367K

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