导读:本文包含了病毒纯化论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:病毒,蛋白,酵母,颗粒,抗体,血凝素,裂谷。
病毒纯化论文文献综述
仝光杰,王文伟,蔡蓓蓓,王蓓,胡海涛[1]（2019）在《人乳头瘤病毒52型L1蛋白病毒样颗粒在毕赤酵母中的优化表达、纯化及其免疫原性》一文中研究指出目的利用毕赤酵母系统表达人乳头瘤病毒52型(human papillomaviruses 52,HPV52)L1蛋白,并检测其病毒样颗粒(virus-like particle,VLP)的免疫原性。方法采用同义密码子替换的方法对HPV52 L1蛋白的野生型基因进行密码子优化,并在体外构建多拷贝表达质粒,经转化和筛选获得在毕赤酵母系统中高表达的HPV52 L1 VLP菌种。采用15 L发酵罐大规模培养,菌液破碎上清经阳离子交换层析和分子筛排阻层析两步法纯化,获得HPV52 L1VLP。动态光散射和透射电子显微镜观察HPV52 L1 VLP的大小和形态,假病毒中和试验检测HPV52 L1 VLP在小鼠及大鼠体内的免疫原性。结果 HPV52 L1 VLP在溶液中呈较均一的单一组分,水合粒径为91. 37 nm;镜下观察呈均一的、直径约50 nm的球状空心颗粒,大小与HPV52天然病毒颗粒相近。HPV52 L1 VLP相对分子质量约56 000,纯度达95%以上,产量为3. 6 mg/L,且可与小鼠抗HPV L1多克隆单抗发生特异性结合。HPV52 L1 VLP在小鼠体内的半数有效剂量(ED_(50))为0. 010μg,在大鼠体内诱导产生的中和抗体滴度高达106。结论于毕赤酵母系统成功表达了HPV52 L1 VLP,且具有良好的免疫原性,为相关预防性疫苗的研发奠定了基础。(本文来源于《中国生物制品学杂志》期刊2019年12期）
柴永笑,金前跃,李旭锋,王垚,丁培阳[2]（2019）在《禽腺病毒4型XZ株增殖与纯化方法的建立》一文中研究指出2015年7月以来,禽腺病毒4型在中国的大部分地区暴发流行,并造成重大损失。为进一步对该病毒进行研究,采用两种方法对所分离的XZ株进行体外增殖培养,并利用透射电镜观察到完整的病毒粒子,同时采用超滤浓缩和凝胶层析的方法对病毒进行纯化。结果显示,成功建立了稳定的禽腺病毒4型XZ株增殖体系,以及温和、高效的病毒纯化工艺,且纯化病毒感染性强,具有很好的免疫原性。(本文来源于《动物医学进展》期刊2019年11期）
王文伟,蔡蓓蓓,仝光杰,王蓓,楼觉人[3]（2019）在《重组人乳头瘤病毒33型L1病毒样颗粒的表达、纯化及免疫原性评价》一文中研究指出目的利用毕赤酵母表达人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)33型L1病毒样颗粒(virus-like particles,VLPs),评价其在小鼠体内的免疫原性。方法构建HPV33 L1表达质粒,电转化毕赤酵母,筛选高表达菌株,15 L发酵罐发酵,离子交换和凝胶体积排阻层析分离纯化HPV33 L1 VLPs,纯化后样品免疫小鼠,采用假病毒中和试验检测小鼠免疫后血清中和抗体滴度。结果质粒HPV33 L1-pPIC3. 5K经双酶切及测序鉴定证明构建成功;毕赤酵母表达产物经Western blot分析,可见相对分子质量约56 000的目的条带;透射电镜下可见直径约60 nm的病毒样颗粒;纯化后的HPV33 L1 VLPs纯度可达95%以上;0. 4和0. 04μg HPV33 L1 VLPs免疫后小鼠血清中和抗体几何平均滴度(geometric mean titer,GMT)分别为3 200和566,差异有统计学意义(P <0. 05)。结论利用毕赤酵母成功表达了HPV33 L1 VLPs,并具有良好的免疫原性。(本文来源于《中国生物制品学杂志》期刊2019年11期）
张树东,周建,田壮,刘长振,姚琦[4]（2019）在《骨质疏松疫苗载体:Qβ病毒样颗粒的表达、鉴定和纯化》一文中研究指出目的优化表达和纯化方式,制备出具有正确空间结构且纯度和产量较高的骨质疏松疫苗载体Qβ病毒样颗粒(Qβvirus-like particles,Qβ-VLPs)。方法在基因合成时删除A1基因序列中Qβ衣壳蛋白终止密码子之后的序列,只合成Qβ衣壳蛋白的基因序列。将Qβ衣壳蛋白基因序列克隆到p ET30a载体质粒上,用BL21(DE3)、BL21(DE3) p Lys S、Rosetta(DE3)叁种不同菌株进行蛋白表达,然后用SDS-PAGE和透射电镜验证是否表达出Qβ-VLPs的正确结构。设置2个蛋白表达诱导剂IPTG(Isopropylβ-D-1-thiogalactopyranoside,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷)浓度和3种菌体破碎方式,分别优化蛋白表达条件和菌体破碎方案,然后将得到的Qβ-VLPs上清液通过硫酸铵聚沉、高速离心和分子筛分选进行Qβ-VLPs的纯化。结果仅BL21(DE3) p Lys S菌株可以表达出SDS-PAGE中呈现5-6聚体、透射电镜下呈现25～30 nm球形结构的Qβ-VLPs。使用0. 5 m M浓度的IPTG表达的Qβ-VLPs产量较0. 2 m M时高2. 8倍,使用超声破碎菌体的方式可以获得较高的蛋白分离效率。将Qβ-VLPs上清液通过本实验过程中的方案进行纯化后纯度可达90%左右。结论该实验探索出具有正确空间结构、组成单一且纯度较高的Qβ-VLPs的制备方案,为相关疫苗制备和研究奠定基础。(本文来源于《武警医学》期刊2019年11期）
李攀,刘术敏,邓丹妹,吴常伟,程英杰[5]（2019）在《GⅡ.21型诺如病毒衣壳蛋白VP1的表达、纯化及鉴定》一文中研究指出目的构建含有GⅡ.21型人诺如病毒(human norovirus,HuNoV)衣壳蛋白VP1基因的重组质粒,通过PichiaPink毕赤酵母表达VP1蛋白,并鉴定纯化产物。方法合成NoV GⅡ.21 VP1蛋白基因序列,将其连接至pPink-HC载体,构建重组质粒pPink-HC-GⅡ.21-VP1;经测序鉴定后,电转化毕赤酵母PichiaPink,甲醇诱导目的蛋白表达;采用AKTA pure M150型纯化仪纯化目的蛋白,Western blot法分析其抗原性,SEC-HPLC法检测纯化蛋白出峰时间。结果经测序鉴定,重组质粒pPink-HC-GⅡ.21-VP1构建正确;纯化的目的蛋白VP1纯度在95%以上,能与抗NoV病毒样颗粒(virus-like particle,VLP)抗体发生反应;测定目的蛋白出峰时间为16. 923 min,与NoV VLP理论出峰时间一致。结论成功在毕赤酵母高表达了GⅡ.21衣壳蛋白VP1,并制备了高纯度及良好抗原性的目的蛋白,为多价重组NoV疫苗的研发及规模化生产奠定了基础。(本文来源于《中国生物制品学杂志》期刊2019年10期）
郭浩然,贾艳娥,吉艳红,李郁[6]（2019）在《禽腺病毒4型Fiber2蛋白表达、纯化及多克隆抗体的制备》一文中研究指出自2015年以来,国内鸡(Gallus domesticus)群因禽腺病毒4型(Fowl adenovirus serotype 4, FAdV-4)感染引起的包涵体肝炎、心包积液的病例呈逐年上升趋势。为制备反应原性良好的FAdV-4血清学诊断抗原,本研究根据密码子优化后的FAdV-4 Fiber2全基因合成序列进行了体外扩增,再将其克隆入p Cold表达载体,构建原核表达载体pCold-Fiber2。pCold-Fiber2重组质粒转化至大肠杆菌(Escherichia coli) PGTf2感受态细胞,经异丙基硫代半乳糖苷(isopropylβ-D-thiogalac toside, IPTG)诱导表达后纯化Fiber2蛋白,用该蛋白免疫家兔(Oryctolagus cuniculus),成功制备了抗FAdV-4 Fiber2蛋白多克隆抗体。Western blot和间接免疫荧光试验(indirected immunofluorescence assay, IFA)结果表明,抗FAdV-4 Fiber2蛋白多克隆抗体纯化后可与Fiber2蛋白和FAdV-4发生特异性反应,证明Fiber2蛋白具有良好的免疫原性。建立的FAdV-4抗体间接ELISA检测方法显示该方法检测灵敏性为96%,特异性为100%。本研究成功制备了具有良好Western blot和IFA反应原性的多克隆抗体,建立了FAdV-4抗体间接ELISA检测方法,该方法反应特异性好、灵敏度高、操作简单、反应结果稳定可靠,适用于鸡群抗体水平的监测、评估和发现早期隐性感染,为研制FAdV-4的血清学诊断技术和防控该病提供了基础资料。(本文来源于《农业生物技术学报》期刊2019年10期）
李爽,易立,程悦宁,曹智刚,林鹏[7]（2019）在《犬瘟热病毒截短P蛋白的表达及纯化》一文中研究指出为获得犬瘟热病毒(CDV)野毒株截短磷蛋白(aa232～507),以Asia 1型CDV-PS为基础,经PCR扩增得到P(aa232～507)基因,插入原核表达载体pEASY~R-Blunt E1中,构建重组原核表达载体pEASY~R-Blunt E1-CDV-P;将重组质粒转化到BL21感受态细胞中进行原核表达并对诱导条件进行优化;超声破碎最佳条件下的诱导产物经离心后对重组蛋白进行可溶性分析,随后用镍柱对重组截短P蛋白进行纯化并用SDS-PAGE和Western blot进行鉴定。结果显示:重组P蛋白大小约37 kDa,在IPTG终浓度0.1 mmol/L,诱导时间为8 h时,表达量最高;重组P蛋白以包涵体形式存在,经SDS-PAGE和Western blot鉴定,成功纯化出重组截短P蛋白;重组P蛋白具有良好的免疫反应性。本研究成功制备出CDV-PS截短P蛋白,为进一步P蛋白抗原表位的研究和CDV抗体诊断方法的研发奠定基础。(本文来源于《畜牧与兽医》期刊2019年10期）
郝勐,张胜男,李建民,夏咸柱[8]（2019）在《裂谷热病毒截短型Gc蛋白的真核表达与纯化》一文中研究指出目的:对裂谷热病毒截短型Gc蛋白进行真核表达与纯化,并鉴定其免疫反应性。方法:在截短型Gc蛋白的基因5'和3'端分别添加tPA信号肽和StrepⅡ-tag,再将其克隆到真核表达载体pCAGGs中,转染Expi293F细胞进行真核表达;用StrepTrap亲和层析柱纯化,ELISA检测该蛋白与特异抗体的免疫反应性。结果:截短型Gc蛋白在Expi293F细胞培养上清中获得表达,经纯化后得到的Gc蛋白浓度为0.7 mg/mL;该蛋白与针对Gc蛋白特异的单克隆抗体特异性结合。结论:截短型Gc蛋白的表达与纯化为裂谷热病毒疫苗和中和抗体研究奠定了良好的基础。(本文来源于《生物技术通讯》期刊2019年05期）
刘川玉,金宏丽,迟航,李恩涛,胡星星[9]（2019）在《表达MERS-CoVS1蛋白重组狂犬病病毒rSRV9-MERS_(S1)纯化方法的建立》一文中研究指出建立一种可线性放大、应用于表达中东呼吸综合征冠状病毒(Middle East respiratory syndrome coronavirus,MERS-CoV)S1蛋白重组狂犬病病毒rSRV9-MERS_(S1)的规模化纯化方法。将收获的病毒去除细胞碎片、灭活后,分别通过3种方法(醋酸锌沉淀+Sepharose 4FF凝胶过滤层析、500 000中空纤维超滤柱+Sepharose 4FF凝胶过滤层析、500 000中空纤维超滤柱+Cellufine~(TM )Sulfate亲和层析)进行纯化,经比较筛选出一种温和、目的蛋白回收率高、纯度高的纯化方法。结果显示,500 000中空纤维超滤柱+Sepharose 4FF凝胶过滤层析回收的抗原含量最高,50 mL重组病毒原液经纯化后可得到1.82 mg蛋白,杂蛋白去除率达到97.02%,病毒纯度较高,电镜下可见到病毒囊膜刺突。结合成本等方面综合考虑,此方法优于其他2种纯化方法。本试验筛选获得了一种适用于rSRV9-MERS_(S1)的纯化方法,为rSRV9-MERS_(S1)规模化纯化工艺的建立与MERS新型疫苗的研制奠定了基础。(本文来源于《中国兽医学报》期刊2019年09期）
彭成成,吴熠潇,刘旭平,谭文松[10]（2019）在《H9N2亚型禽流感病毒纯化及病毒HA蛋白定量方法研究》一文中研究指出为实现H9N2亚型禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)疫苗上下游过程的控制,本研究结合蔗糖密度梯度离心和SDS-PAGE灰度分析建立了H9N2亚型AIV纯化和病毒HA蛋白定量的方法。首先将收获的病毒原液经差速离心、PEG6000沉淀和蔗糖密度梯度离心分别进行澄清、浓缩和分离纯化;其次,采用改装过的高效液相色谱仪系统(HPLC)准确定位和收集病毒离心区带,并对该区带进行SDS-PAGE和Western blotting分析,同时考察该收集方式的线性和重复性;然后,在此基础上优化病毒液的澄清工艺以提高病毒回收率;最后,观察还原SDS-PAGE分离的H9N2亚型AIV蛋白条带的共迁移情况并确定糖苷酶PNGase F脱糖基处理的最佳条件,采用Image J软件分析SDS-PAGE图谱中4个主要病毒蛋白条带(NP、HA1、M1和HA2)的灰度以确定流感病毒血凝素的含量。结果表明,HPLC收集的病毒离心区带的蛋白浓度与PEG6000浓缩的上清体积在8～32 mL范围内具有良好的线性关系(R~2=0.994),且该收集方式重复性好,批内和批间变异系数分别为1.29%和4.11%。病毒液经过澄清、浓缩和分离纯化后,最终的病毒回收率为79.55%。纯化的H9N2亚型AIV的蛋白浓度为1 000μg/mL时,经糖苷酶PNGase F脱糖基处理后便能得到条带清晰平整且分离良好的SDS-PAGE图谱。经灰度分析,HA含量占总病毒蛋白含量的46.18%。本研究初步建立了H9N2亚型AIV纯化和病毒HA蛋白定量的方法,为H9N2亚型AIV全病毒灭活疫苗的研发和生产提供了简单、准确的检测手段。(本文来源于《中国畜牧兽医》期刊2019年07期）
病毒纯化论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
2015年7月以来,禽腺病毒4型在中国的大部分地区暴发流行,并造成重大损失。为进一步对该病毒进行研究,采用两种方法对所分离的XZ株进行体外增殖培养,并利用透射电镜观察到完整的病毒粒子,同时采用超滤浓缩和凝胶层析的方法对病毒进行纯化。结果显示,成功建立了稳定的禽腺病毒4型XZ株增殖体系,以及温和、高效的病毒纯化工艺,且纯化病毒感染性强,具有很好的免疫原性。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
病毒纯化论文参考文献
[1].仝光杰,王文伟,蔡蓓蓓,王蓓,胡海涛.人乳头瘤病毒52型L1蛋白病毒样颗粒在毕赤酵母中的优化表达、纯化及其免疫原性[J].中国生物制品学杂志.2019
[2].柴永笑,金前跃,李旭锋,王垚,丁培阳.禽腺病毒4型XZ株增殖与纯化方法的建立[J].动物医学进展.2019
[3].王文伟,蔡蓓蓓,仝光杰,王蓓,楼觉人.重组人乳头瘤病毒33型L1病毒样颗粒的表达、纯化及免疫原性评价[J].中国生物制品学杂志.2019
[4].张树东,周建,田壮,刘长振,姚琦.骨质疏松疫苗载体:Qβ病毒样颗粒的表达、鉴定和纯化[J].武警医学.2019
[5].李攀,刘术敏,邓丹妹,吴常伟,程英杰.GⅡ.21型诺如病毒衣壳蛋白VP1的表达、纯化及鉴定[J].中国生物制品学杂志.2019
[6].郭浩然,贾艳娥,吉艳红,李郁.禽腺病毒4型Fiber2蛋白表达、纯化及多克隆抗体的制备[J].农业生物技术学报.2019
[7].李爽,易立,程悦宁,曹智刚,林鹏.犬瘟热病毒截短P蛋白的表达及纯化[J].畜牧与兽医.2019
[8].郝勐,张胜男,李建民,夏咸柱.裂谷热病毒截短型Gc蛋白的真核表达与纯化[J].生物技术通讯.2019
[9].刘川玉,金宏丽,迟航,李恩涛,胡星星.表达MERS-CoVS1蛋白重组狂犬病病毒rSRV9-MERS_(S1)纯化方法的建立[J].中国兽医学报.2019
[10].彭成成,吴熠潇,刘旭平,谭文松.H9N2亚型禽流感病毒纯化及病毒HA蛋白定量方法研究[J].中国畜牧兽医.2019
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