导读:本文包含了表达载体构建转基因烟草论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:基因,转基因,烟草,聚糖,载体,蛋白,病毒。
表达载体构建转基因烟草论文文献综述
郭强,褚栋,范仲学[1]（2013）在《凋亡抑制蛋白基因dsRNA转基因烟草表达载体的构建》一文中研究指出为了利用RNA干扰技术防治烟粉虱,需要构建凋亡抑制蛋白(IAP)基因dsRNA转基因烟草表达载体。利用PCR技术扩增烟粉虱IAP基因,将其连接到pMD18-T载体中,用BglⅡ、XhoⅠ和BamHⅠ、SalⅠ分别酶切,将获得的片段分别反向、正向连接至pUC-RNAi载体,用PstⅠ酶切pUC-RNAi-IAP,回收酶切片段,将其连接到表达载体pCAMBIA-2300-35S中,并进行酶切验证。IAPdsRNA转基因烟草表达载体的成功构建为下一步转基因烟草防治烟粉虱的研究奠定基础。(本文来源于《天津农业科学》期刊2013年01期）
常欣,庞磊,李叶云,魏艳丽,江昌俊[2]（2012）在《茶树CsCBF1基因表达载体的构建及其转基因烟草的抗寒性分析》一文中研究指出【目的】通过转基因烟草验证茶树CsCBF1基因抗寒性功能,为发掘、筛选茶树重要功能基因提供理论依据。【方法】利用根癌农杆菌介导法将构建的表达载体pBI121-CsCBF1导入烟草,通过PCR、RT-PCR和GUS活性染色鉴定外源CsCBF1基因是否导入并整合到烟草基因组上转录表达。然后将转pBI121-CsCBF1型、转pBI121型和野生型烟草分别置于25,4和0℃下处理48h后,检测其膜质通透性、丙二醛(MDA)含量和叶绿素荧光参数Fv/Fm,并将0℃处理3d的转pBI121-CsCBF1型和野生型烟草置于25℃下培养1周后观测恢复表型和统计死亡率。【结果】成功构建表达载体pBI121-CsCBF1,PCR、RT-PCR和GUS活性染色证明,CsCBF1已整合到烟草基因组中并转录表达。25℃处理下,转pBI121-CsCBF1型、转pBI121型和野生型烟草的膜质通透性、丙二醛含量和Fv/Fm均无显着差异,而在4和0℃处理下,转pBI121-CsCBF1型烟草的膜质通透性和丙二醛含量均显着低于转pBI121型和野生型烟草,但Fv/Fm显着高于转pBI121型和野生型烟草。生长恢复试验中,转pBI121-CsCBF1型的存活率为66.7%,而野生型仅为23.3%。【结论】茶树CsCBF1基因能够显着增强非低温驯化植物烟草的抗寒性,说明茶树CsCBF1基因存在于细胞抗寒的分子调控途径中,从而提高植物细胞的低温防御能力。(本文来源于《西北农林科技大学学报(自然科学版)》期刊2012年10期）
喻娟,朱华国,魏亦农[3]（2011）在《棉花GhNCED2基因表达载体构建及转基因烟草表达分析》一文中研究指出【目的】9-顺式环氧类胡萝卜素双加氧酶(NCED)是高等植物脱落酸(ABA)生物合成途径中的关键限速酶。为了进一步研究GhNCED2基因的功能。【方法】构建该基因植物超表达载体PZP35S-GhNCED2,通过农杆菌介导法转入野生烟草,并利用卡那霉素筛选、PCR扩增验证和RT-PCR表达分析。对转基因烟草T1代分别进行2%NaCl、4℃、20%PEG逆境胁迫处理,利用实时荧光定量RT-PCR分析表明。【结果】(1)GhNCED2基因已整合入烟草基因组中,并能在T1代中稳定表达。(2)随着时间的推移其表达量变化规律基本一致呈现先上升后下降的趋势,2%NaCl、20%PEG胁迫后GhNCED2基因相对表达量到达峰值的时间稍落后于4℃胁迫,20%PEG处理后基因的相对表达量要高于其他处理。【结论】干旱、盐碱及低温胁迫均都能诱导GhNCED2基因的大量表达,且该基因对干旱胁迫的响应更加积极,而对冷害更加迅速。(本文来源于《新疆农业科学》期刊2011年12期）
王呈玉,张明哲,吕世友,李彦舫[4]（2010）在《HbDREB1基因表达载体的构建及其转基因烟草的鉴定》一文中研究指出[目的]研究强抗寒性牧草——短芒大麦DREB1(dehydration responsive element binding protein1)基因的功能,为理想抗逆工程基因的筛选和利用奠定理论基础。[方法]利用农杆菌介导法转化烟草叶盘,对转基因烟草进行分子生物学鉴定,并对离子渗漏率、脯氨酸表达量生理生化特性进行测定。[结果]HbDREB1整合入烟草基因组,已在转录水平上表达,转基因烟草在冷胁迫条件下的离子渗漏率明显低于对照组,且其脯氨酸表达量明显增高。[结论]HbDREB1基因具有提高植物抗寒性的潜能。(本文来源于《安徽农业科学》期刊2010年27期）
吴文俊,贾小霞,张金文,王汉宁[5]（2010）在《Chi和Bar基因双价植物表达载体的构建及转基因烟草的初步检测》一文中研究指出构建了单子叶植物双价表达载体pBI121-Ubi-Bar/Chi,其中含有木霉几丁质酶基因Chi和抗除草剂Bar基因,均由玉米Ubi启动子驱动.以烟草无菌苗叶片为受体,用农杆菌介导法将目的基因转入烟草中;以Bar基因作为选择标记,PPT为选择剂进行筛选,获得了一定数量的转基因植株.结果表明:经PCR分析,初步确定目的基因已经整合到烟草基因组中.(本文来源于《甘肃农业大学学报》期刊2010年03期）
吴文俊[6]（2008）在《双价抗真菌融合基因植物表达载体构建及转基因烟草的初步检测》一文中研究指出真菌性病害和杂草危害是造成农作物产量大幅度下降及品质变劣的主要原因,严重影响着农业生产。在植物抗病基因工程中,通过将抗真菌蛋白基因和抗除草剂基因导入植物的方法来提高植物对真菌病害和除草剂的抵抗能力已成为一种直接而有效的途径。随着越来越多的抗真菌蛋白被发现,人们试图采用多基因共表达的策略将多种抗真菌蛋白基因转入植物,利用其协同作用以提高植物的抗病能力。但由于受到可选择的载体数目和载体容量的限制,这个目的很难较好的实现。融合基因技术和多价载体的构建是近几年出现的用于解决这一难题的有效途径。本研究通过木霉几丁质酶基因(CHI)和β-1,3-葡聚糖酶基因(GLU)的融合并将其连接到改造好的含有Bar基因的植物表达载体pBI121-Bar上构建双价植物表达载体pBI121-Bar/Chi-Glu,旨在提高作物抗真菌性病害的能力,同时降低在农业生产中除草所花费的大量人力和财力。主要结果如下:1.利用木霉几丁质酶基因(CHI)和β-1,3-葡聚糖酶基因(GLU)构建了融合基因。2.将Bar基因插入植物表达载体pBI121中,获得含有抗除草剂Bar基因的植物表达载体pBI121-Bar。3.构建了含有融合基因的植物表达载体pBI121-Bar/Chi-Glu,同时构建了两个单价(CHI和GLU)植物表达载体pBI121-Bar/Chi和pBI121-Bar/Glu。4.以烟草无菌苗叶片为受体,用农杆菌介导法将pBI121-Bar/Chi-Glu转入烟草中,以Bar基因作为选择标记,草丁膦(phosphinothricin,PPT)为选择剂进行筛选,获得了转基因植株。(本文来源于《甘肃农业大学》期刊2008-06-01）
李艳萍[7]（2007）在《抗虫/耐草甘膦融合基因表达载体的构建及在转基因烟草中的分析》一文中研究指出随着植物基因工程的发展，将多个基因转化植株已成为研究的热点之一，利用连接肽进行多个基因融合的策略已引起广泛关注。以2A和LP4为连接肽表达的融合基因在植物中表达时会发生剪切，将两个基因分开。本论文利用连接多肽2A和LP4/2A分别与抗虫新基因Bt crylAh和编码EPSP合酶的耐草甘膦基因mG_2连接起来构建融合基因表达载体，既可以达到两个基因的融合，又可以通过剪切形成两个蛋白分别行使功能。为了比较连接肽2A和LP4/2A的剪切效率，以及不同基因与连接肽连接位置差异对基因表达的影响，利用重迭PCR及DNA克隆技术共构建了四个融合基因表达载体：pHAG、pHLAG、pGAH、pGLAH。其中pHAG、pHLAG为crylAh基因在前，mG_2基因在后，前者以2A为连接肽，后者以LP4/2A为连接肽；pGAH、pGLAH为mG_2基因在前，crylAh基因在后，前者以2A为连接肽，后者以LP4/2A为连接肽。同时构建了两个单基因载体pSAh、pSmG_2作为对照，比较两基因在不同载体中表达量的异同。利用农杆菌介导法将构建的植物表达载体转入烟草中，得到再生植株529株，经GUS组织化学分析，其中有261株再生苗为阳性植株，转化率达到49.3％；对GUS检测结果阳性的植株，分别利用crylAh，mG_2基因内部引物进行PCR扩增，结果表明目的基因整合到了烟草的基因组中；RT-PCR结果显示转化的外源融合基因在烟草体内正确转录，融合基因在转录水平上没有发生剪切；Western Blot结果表明crylAh基因和mG_2基因在植物体内正确翻译并且完全剪切；ELISA检测转融合基因表达载体pGLAH烟草中mG_2蛋白的表达量达到转基因烟草叶片可溶性总蛋白的0.33％，明显高于对照载体及其它融合基因表达载体，而crylAh在各载体中的表达量都在0.2％以上。将获得的转基因烟草进行了生物活性测定。抗虫性生测为棉铃虫初孵幼虫，结果表明转融合基因表达载体植株对棉铃虫的校正死亡率均在90％以上；草甘膦耐受性检测选用浓度为3‰的草甘膦喷洒T_0代植株叶片，融合基因表达载体pGLAH表现出良好的抗性，存活率为100％，还对T_1代转基因烟草种子在含有草甘膦培养基上的出芽及生长情况进行了统计，结果表明转融合基因表达载体的转基因植株具有草甘膦耐受性，其中转融合基因表达载体pGLAH的烟草种子可以在5mM的草甘膦培养基中正常发芽、生长，高耐植株占检测植株的87.5％。相对于单价基因表达载体，融合基因表达载体表现出较高的抗虫性和耐草甘膦性。以上转基因烟草的分子生物学分析以及生物活性分析均证明：以LP4/2A为连接肽时，两个基因的表达水平高于单独表达的基因，同时在连接肽前面基因的表达要高于其在连接肽后面基因的表达。(本文来源于《河北农业大学》期刊2007-06-06）
曾会明,马挺军,王华芳[8]（2006）在《转录因子DREB2A植物表达载体构建及烟草转基因研究》一文中研究指出构建转录因子DREB2A基因表达载体,通过叶盘法进行烟草的转基因表达研究。经过抗生素卡那霉素抗性筛选-PCR鉴定-Southern杂交检测,表明目的基因已经整合到烟草基因组DNA中。转基因植株出现生长迟滞现象。(本文来源于《生物技术通报》期刊2006年02期）
刘红莉,陈宏伟,李文生,雷霆,王喆之[9]（2004）在《HPV-16L1植物表达载体的构建及HPV-16L1在转基因烟草中表达的鉴定》一文中研究指出利用PCR技术克隆人乳头瘤病毒HPV 16L1蛋白编码基因 ,将其重组于pUCmT和pBI12 1中 ,构建含HPV 16L1基因的植物双元表达载体pBI L1,L1基因由CaMV 35S启动子控制表达。采用叶盘共培育法经根瘤农杆菌介导转化烟草 (NicotianatobacumL .) ,获得HPV 16L1转基因烟草植株。经PCR及Southern杂交分析 ,HPV 16L1基因整合到烟草基因组中 ;Westernblot和ELISA分析检测显示转基因烟草叶片蛋白可与HPV 16L1单克隆抗体特异性反应 ,且定位于 5 5kD处 ,其最高表达量占烟草叶片总可溶蛋白的 0 0 76 %。小鼠红细胞凝集试验 (HA)及小鼠红细胞凝集抑制试验 (HAI)显示转基因烟草叶片蛋白可引起小鼠红细胞凝集。结果表明已成功地构建了HPV 16L1的植物双元表达载体 ,并证实了利用转基因烟草植物能够表达出HPV 16L1蛋白 ,所表达的L1蛋白具有良好的抗原性并具有介导小鼠红细胞凝集的生物活性(本文来源于《生物工程学报》期刊2004年06期）
张岳民[10]（2004）在《叁价抗真菌融合基因植物表达载体的构建及转基因烟草的抗病性分析》一文中研究指出植物真菌病害一直是影响农作物产量,降低农作物品质的主要原因。在植物抗病基因工程中,通过将抗真菌蛋白基因导入植物来提高植物对真菌病害的抵抗能力已成为一种直接而有效的方法。随着越来越多的抗真菌蛋白被发现,人们试图采用多基因共表达的策略来将多种抗真菌蛋白基因转入植物,以提高植物的抗病能力和抗病谱。但是,由于受到目前可选择的载体数目和载体容量的限制,这个目的很难较好的实现。融合基因技术就是近几年出现的用于解决这一难题的有效途径。通过构建融合基因表达融合蛋白,可以实现多个基因的同步、同水平、同细胞定位表达。正是由于上述优点,融合基因技术正越来越受到人们的关注。本研究选择烟草Ⅰ类几丁质酶(CHI)、小麦硫堇蛋白(THI)和烟草Ⅰ类 β-1,3-葡聚糖酶(GLU)叁个已经证明是具有很强抗真菌病害能力的植物抗病蛋白,通过构建融合基因来实现叁个蛋白在烟草体内的共表达,以求达到提高烟草对真菌病害的抵抗能力的目的。主要实验结果如下: 1.克隆并修饰了叁个抗菌蛋白基因,即烟草Ⅰ类几丁质酶基因(CHI)、小麦硫堇蛋白基因(THI)和烟草Ⅰ类 β-1,3-葡聚糖酶基因(GLU),利用它们构建了两个融合蛋白基因,FG1 和 FG2,其中 FG2 的 3′-端含有一段编码胞内定位信号的序列,而 FG1 的 3′-端则无胞内定位信号序列。 2.构建了含有融合基因的植物表达载体 pBI-FG1、pBI-FG2 和pMR-FG1,同时构建了叁个单独基因(CHI、THI 和 GLU)的植物表达载体 pBI-CHI、pBI-THI 和 pBI-GLU,作为对照,用于检测融合基因的抗病能力。 3.利用农杆菌介导法分别获得了转 pBI-FG1、pBI-FG2、pMR-FG1、pBI-CHI、pBI-THI 和 pBI-GLU 六个类群的转基因烟草植株。 4.对 pBI-FG1 表达的融合蛋白的细胞定位进行了检测分析,证明其分泌在细胞间隙,而 pBI-FG2 表达的融合基因定位在细胞内。对融合蛋白各组分蛋白的活性检测表明:叁个组分蛋白在融合蛋白中均保持了各自的生物活性。 5.用烟草赤星病原菌(Alternaria alternata)和烟草炭疽病原菌(Colletotrichum corda)对融合蛋白的抗菌能力进行了体外鉴定,发现其 —1—<WP=7>张岳民:叁价抗真菌融合基因植物表达载体的构建及转基因烟草的抗病性分析对这两种病原菌的抑制能力大大高于对照蛋白。同时对转融合基因的烟草植株进行了活体接菌实验,发现其抗病能力高于对照植株。 6.对部分 pMR-FG1 和 pBI-FG1 转化植株的 Northern blot 和 Westernblot 分析证明,pMR-FG1 转化植株中融合蛋白的表达在转录水平和翻译水平明显高于 pBI-FG1 转化植株。(本文来源于《山东农业大学》期刊2004-06-06）
表达载体构建转基因烟草论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
【目的】通过转基因烟草验证茶树CsCBF1基因抗寒性功能,为发掘、筛选茶树重要功能基因提供理论依据。【方法】利用根癌农杆菌介导法将构建的表达载体pBI121-CsCBF1导入烟草,通过PCR、RT-PCR和GUS活性染色鉴定外源CsCBF1基因是否导入并整合到烟草基因组上转录表达。然后将转pBI121-CsCBF1型、转pBI121型和野生型烟草分别置于25,4和0℃下处理48h后,检测其膜质通透性、丙二醛(MDA)含量和叶绿素荧光参数Fv/Fm,并将0℃处理3d的转pBI121-CsCBF1型和野生型烟草置于25℃下培养1周后观测恢复表型和统计死亡率。【结果】成功构建表达载体pBI121-CsCBF1,PCR、RT-PCR和GUS活性染色证明,CsCBF1已整合到烟草基因组中并转录表达。25℃处理下,转pBI121-CsCBF1型、转pBI121型和野生型烟草的膜质通透性、丙二醛含量和Fv/Fm均无显着差异,而在4和0℃处理下,转pBI121-CsCBF1型烟草的膜质通透性和丙二醛含量均显着低于转pBI121型和野生型烟草,但Fv/Fm显着高于转pBI121型和野生型烟草。生长恢复试验中,转pBI121-CsCBF1型的存活率为66.7%,而野生型仅为23.3%。【结论】茶树CsCBF1基因能够显着增强非低温驯化植物烟草的抗寒性,说明茶树CsCBF1基因存在于细胞抗寒的分子调控途径中,从而提高植物细胞的低温防御能力。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
表达载体构建转基因烟草论文参考文献
[1].郭强,褚栋,范仲学.凋亡抑制蛋白基因dsRNA转基因烟草表达载体的构建[J].天津农业科学.2013
[2].常欣,庞磊,李叶云,魏艳丽,江昌俊.茶树CsCBF1基因表达载体的构建及其转基因烟草的抗寒性分析[J].西北农林科技大学学报(自然科学版).2012
[3].喻娟,朱华国,魏亦农.棉花GhNCED2基因表达载体构建及转基因烟草表达分析[J].新疆农业科学.2011
[4].王呈玉,张明哲,吕世友,李彦舫.HbDREB1基因表达载体的构建及其转基因烟草的鉴定[J].安徽农业科学.2010
[5].吴文俊,贾小霞,张金文,王汉宁.Chi和Bar基因双价植物表达载体的构建及转基因烟草的初步检测[J].甘肃农业大学学报.2010
[6].吴文俊.双价抗真菌融合基因植物表达载体构建及转基因烟草的初步检测[D].甘肃农业大学.2008
[7].李艳萍.抗虫/耐草甘膦融合基因表达载体的构建及在转基因烟草中的分析[D].河北农业大学.2007
[8].曾会明,马挺军,王华芳.转录因子DREB2A植物表达载体构建及烟草转基因研究[J].生物技术通报.2006
[9].刘红莉,陈宏伟,李文生,雷霆,王喆之.HPV-16L1植物表达载体的构建及HPV-16L1在转基因烟草中表达的鉴定[J].生物工程学报.2004
[10].张岳民.叁价抗真菌融合基因植物表达载体的构建及转基因烟草的抗病性分析[D].山东农业大学.2004
论文知识图
