利用质谱技术鉴定寨卡病毒非结构蛋白NS1的细胞内相互作用蛋白

论文摘要

寨卡病毒（Zika Virus）属于黄病毒科中的黄病毒属,虽然很早就已经被人类所发现,但是一直到2015年在南美巴西的大规模爆发,才引起了广泛的关注.寨卡病毒对人类的感染往往引起包括小头畸形和格林-巴利综合征在内的多种症状.寨卡病毒的基因组为单链正链RNA,其基因组可以编码翻译并剪切加工出3个结构蛋白,分别为膜蛋白,囊膜蛋白和核衣壳蛋白,以及7个非结构蛋白（NS1, NS2A, NS2B, NS3, NS4A, NS4B, NS5）.相关研究已经证明,NS1蛋白与同属黄病毒属的登革病毒的发病有紧密的联系,而且根据其蛋白结构推测其可能与寨卡病毒穿越血脑屏障有关.因此鉴别NS1与细胞内的相互作用蛋白对于发现寨卡病毒在细胞内的转运,转录,以及装配都有重大的意义.在此,该课题构建并在HEK293细胞中表达包含Flag和Strep两种标签的NS1融合蛋白,通过免疫沉淀的方法将与NS1结合的蛋白利用标签蛋白进行分离,利用高分辨生物质谱技术,对蛋白进行分析鉴定.通过分别带有Flag与Strep标签的相互作用蛋白分析,发现了16个两种标签共同的结合蛋白,其进一步的通路分析证明这些蛋白于与病毒转录、病毒复制和免疫反应多个通路有关,相关的研究结果为今后进一步研究寨卡病毒的复制机制以及开发抗病毒药物提供了重要的参考价值.

论文目录

• 1 实验部分
•   1.1 材料
•   1.2 表达 Zika病毒NS1区蛋白载体的构建
•   1.3 NS1蛋白的表达及Western Blotting分析
•   1.4 免疫沉淀及免疫沉淀后产物鉴定
•   1.5 质谱检测和信息学分析
• 2 结果
•   2.1 NS1 cDNA克隆的鉴定与测序
•   2.2 通过两种标签蛋白可以免疫沉淀NS1融合蛋白
•   2.3 凝胶电泳证明两种标签蛋白可以免疫沉淀大量与NS1结合的蛋白分子
•   2.4 免疫沉淀蛋白的质谱分析与鉴定
•   2.5 与NS1相作用的蛋白鉴定以及有关蛋白的功能分析
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 章纳,王衡瑞,毛彦娜,张成林,秦斌,王志民

关键词: 寨卡病毒,蛋白,免疫沉淀,生物质谱分析

来源: 华中师范大学学报(自然科学版) 2019年03期

年度: 2019

分类: 基础科学,医药卫生科技

专业: 生物学,基础医学

单位: 郑州大学中英分子肿瘤研究中心/基础医学院/医学科学院,河南省安阳市第六中学,郑州儿童医院(东区)血液肿瘤科

基金: 国家自然科学基金项目(81472854)

分类号: R373

DOI: 10.19603/j.cnki.1000-1190.2019.03.014

页码: 401-407

总页数: 7

文件大小: 585K

下载量: 174