导读:本文包含了转基因细胞系论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:转基因,转染,细胞系,蛋白,微管,模型,淀粉。
转基因细胞系论文文献综述
朱姿英,卢克焕,Steve.L.Stice,陆阳清[1]（2019）在《转基因诱导永生化鸡细胞系的建立》一文中研究指出传统上从鸡胚中分离病毒用于疫苗的生产常常不能满足需求,研究从体外培养的细胞中分离病毒的途径成为当前疫苗生产领域的迫切需要。本研究利用体细胞诱导重编程技术建立永生化细胞系,为应用于疫苗制备等研究和生产奠定基础。通过慢病毒载体转染转录调控因子(NANOG, LIN28和C-MYC)重编程鸡成纤维细胞,并稳定培养至100代,获得永生化的细胞,而后逐步去除细胞因子、血清等添加物,优化细胞系培养体系,并对细胞驯化实现悬浮生长,以获得单位体积最大密度的细胞。研究结果表明:通过转基因将NANOG,LIN28和C-MYC 3个因子整合入细胞中表达,细胞系对碱性磷酸酶染色呈阳性反应,端粒逆转录酶(cTERT)基因在细胞系中显着上调,并稳定培养至100代,使得这些细胞具有自我更新特性和永生化的潜能。确定了培养基中的血清替代物KSR浓度为20%,并撤除了培养基中bFGF等生长因子,为细胞大规模培养应用提供了可能。永生细胞实现悬浮生长,细胞生长倍增时间为21.71 h,最大密度为1.3×106 cells/m L。因此,我们通过重编程技术建立了一株稳定的永生化细胞系,并且使它能在低浓度KSR中悬浮培养,这为疫苗制备等研究和生产提供科学依据。(本文来源于《基因组学与应用生物学》期刊2019年08期）
马登磊,张旭,罗艺,黄蕊,李雅莉[2]（2019）在《微管相关蛋白tau转基因细胞和动物模型的建立及tau蛋白病变表征》一文中研究指出目的构建并表征tau及突变tau蛋白细胞和动物模型,检测模型tau蛋白及磷酸化tau蛋白表达情况及微管的形态,为tau蛋白及相关疾病的研究提供疾病模型。方法将不同的质粒分别转染到HEK293细胞中,构建过表达野生型tau以及P301L/P301S突变tau的细胞模型。引进并繁育rTg4510小鼠(P301L突变tau转基因小鼠)以及PS19小鼠(P301S突变tau转基因小鼠)。通过Western blotting法检测总tau及磷酸化tau蛋白的表达,应用免疫组织化学的方法检测转基因小鼠脑内磷酸化tau蛋白的表达情况,应用免疫荧光的方法检测HEK293细胞微管形态的变化。结果本研究成功构建过表达tau蛋白的细胞模型,繁育了两种tau转基因小鼠,在这些模型中tau蛋白表达及tau蛋白的磷酸化水平显着高于对照组。在不同突变类型的细胞和动物模型中,tau蛋白不同位点的磷酸化水平变化以及微管形态变化略有差异。结论本研究成功构建了P301L/P301S突变tau蛋白的细胞和动物模型,这些模型均表现了显着的tau蛋白过度磷酸化的病变,并引起了细胞微管形态或tau蛋白病理的变化,进而为包括AD在内的tau蛋白病变提供了实验模型。(本文来源于《首都医科大学学报》期刊2019年04期）
郑海亮,王东方,方雅,刁小伟,文勇[3]（2019）在《通用型NF-κB荧光素酶报告基因细胞系的构建》一文中研究指出建立一种通用型荧光素酶报告基因检测系统。以NF-κB信号通路为基础,用NF-κB-RE-Luc2P慢病毒感染HEK293细胞获得单克隆细胞系,并使用TNF-α进行了刺激验证;为证明该细胞系具备通用和改造能力进一步感染了FGF家族受体FGFRⅡ,筛选获得单克隆然后用FGF类药物进行刺激验证。结果表明,在TNF-α刺激实验中,响应值与TNF-α浓度呈现剂量依赖效应,且信噪比可达100倍以上,表明细胞系建立成功。FGF类药物刺激验证实验中,响应值与药物浓度可拟合成剂量依赖的"S"型曲线,表明该细胞系可用于FGF类药物活性检测。获得了NF-κB-RE-Luc2P HEK293和以此细胞系为基础改造得到的细胞系FGFRⅡ/NF-κB-RE-Luc2P HEK293,由于NF-κB是细胞内众多信号通路的交汇点,因此针对NF-κB信号通路,该细胞系具备通用性。(本文来源于《生物技术通报》期刊2019年07期）
龙起樟,黄永兰,唐秀英,王会民,芦明[4]（2019）在《模式籼稻品种Kasalath转基因胚性悬浮细胞系的建立》一文中研究指出Kasalath是一种公认的组培再生性优异的模式籼稻品种。为建立具有G418抗性的Kasalath悬浮细胞系,通过农杆菌转化法获得转入G418抗性基因和GUS报告基因的Kasalath愈伤组织,然后利用获得的胚性转基因愈伤在NBL培养基中进行初步悬浮培养,后转至AA培养基进行终培养,在继代过程中通过持续的小颗粒愈伤筛选最终建立了Kasalath转基因悬浮细胞系;本研究获得的悬浮细胞系分散性良好,增值快(10 d可增殖约3.8倍),而且可从悬浮细胞中分离到高活性的原生质体,分离效率可达6.3×107个原生质体每毫升自然沉降细胞。本研究展示了Kasalath是一种建立悬浮细胞系的优良材料,为进一步进行栽培稻和野生稻的原生质体融合提供依据,建立的悬浮细胞系亦可用于生理生化研究或供分离原生质体以进行蛋白质亚细胞定位等试验。(本文来源于《江西农业大学学报》期刊2019年01期）
陶鹏飞,赵悦,宋喜君,黄汉昌[5]（2019）在《表达APPswe_(695)基因细胞系的构建及Aβ分泌水平的分析》一文中研究指出为探究β-淀粉样前体蛋白(amyloid-βprecursor protein, APP)在阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease, AD)发病过程中的作用及构建应用于AD发病机理研究的实验细胞模型,该研究构建了过表达APP695瑞典型突变体(APPswe_(695))的SH-SY5Y细胞系(APPswe_(695)细胞)并分析了该细胞系中Aβ的分泌水平。采用慢病毒介导转染方法,将APPswe_(695)表达质粒转染至SH-SY5Y细胞,抗性药物筛选阳性转染细胞。分别采用RT-PCR、Western blot技术验证APPswe_(695) mRNA、APP蛋白的表达, ELISA分析Aβ1-40和Aβ1-42的分泌水平。结果显示,转染慢病毒包装的APPswe_(695)质粒后,细胞的APPswe_(695)mRNA表达呈现阳性;与野生型细胞和转染质粒空白细胞相比,转染APPswe_(695)基因细胞表达APP695的瑞典型突变蛋白(APPswe_(695))。APPswe_(695)具有与内源性APP770相同的细胞分布。转染APPswe_(695)基因后,细胞内分泌Aβ水平增加(P<0.05)而细胞外液中Aβ含量并没有显著变化。由此说明, APPswe_(695)细胞能够表达被转染的APPswe_(695)基因, APPswe_(695)细胞倾向于产生更多的胞内而不是胞外Aβ,APPswe_(695)细胞可应用于阿尔茨海默病发病机理及药物治疗的研究。(本文来源于《中国细胞生物学学报》期刊2019年01期）
王亮亮,孙婧,刘强和,邓铭,彭文丽[6]（2018）在《联合G418筛选构建GFP转基因骨髓基质干细胞系的实验研究》一文中研究指出目的联合G418筛选构建绿色荧光蛋白(GFP)转基因SD大鼠骨髓基质干细胞(BMSCs)系,用于骨髓基质干细胞体外培养及向内耳神经细胞诱导分化的进一步研究。方法制备大鼠骨髓基质干细胞,选用脂质体Lipofectamine~(TM)2000转染方法将含有pcDNA3.1-GFP的重组质粒转染至大鼠骨髓基质干细胞中,荧光显微镜检测GFP蛋白表达,通过G418筛选法建立稳定、含pcDNA3.1-GFP的单克隆骨髓基质干细胞系。结果 500μg/mL的G418压力筛选后,获得了具有G418抗性的绿色荧光蛋白(GFP)转基因SD大鼠骨髓基质干细胞系。结论成功地培育了G418抗性的GFP转基因大鼠骨髓基质干细胞系,为进行下一步体外特异微环境下的诱导分化提供实验基础。(本文来源于《海南医学》期刊2018年20期）
刘晓华,文冬梅,余庆,邓凯,陆凤花[7]（2018）在《组蛋白甲基化抑制剂UNC0638对水牛转基因细胞外源基因表达的影响》一文中研究指出本研究旨在探讨不同浓度的组蛋白甲基化抑制剂UNC0638对转基因水牛成纤维细胞外源基因表达水平的影响,为外源基因表达机制研究及提高转基因水牛生产效率提供理论依据。试验首先使用不同浓度的UNC0638(0(对照组)、0.5、1.5、2.5、5.0μmol·L~(-1))处理水牛胎儿成纤维细胞(BFFs)8d,绘制细胞生长曲线,并在UNC0638(0(对照组)、0.5、1.5、2.5μmol·L~(-1))处理BFFs 48h后,检测细胞核型,同时利用细胞免疫荧光技术分析组蛋白H3K9me2甲基化水平,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测UNC0638对水牛转基因细胞外源基因表达效率的影响。结果表明:1)BFFs经不同浓度UNC0638处理后,生长曲线与对照组相似,均呈"S"形分布,0.5、1.5、2.5μmol·L~(-1 )UNC0638处理组与对照组相比细胞增殖效率没有发生显着变化,5.0μmol·L~(-1)UNC0638抑制BFFs增殖;2)各处理组细胞核型正常率与对照组间差异不显着;3)此外,UNC0638处理组的细胞组蛋白H3K9me2甲基化水平显着低于对照组(P<0.05);4)UNC0638(0、0.5、1.5、2.5μmol·L~(-1))处理水牛转基因胎儿成纤维细胞24h,2.5μmol·L~(-1)组细胞eGFP的相对表达量显着高于对照组(P<0.05);处理48h,0.5、1.5、2.5μmol·L~(-1)组eGFP的表达量与对照组相比显着提高(P<0.05)。综上表明,UNC0638可有效降低水牛成纤维细胞组蛋白H3K9me2甲基化水平并提高水牛转基因细胞外源基因的表达效率。(本文来源于《畜牧兽医学报》期刊2018年10期）
曹程程,夏光,高英卓,吕庆杰[8]（2018）在《姜黄素联合LY294002对鼠卵巢癌转基因细胞系T1、T2、T3的抑制作用》一文中研究指出目的探讨姜黄素与PI3K抑制剂LY294002及两者联合用药对鼠卵巢癌转基因细胞系T1、T2、T3的增殖抑制作用及其作用机制。方法体外培养鼠卵巢癌转基因细胞系T1、T2、T3,0～80μmol/L姜黄素与相同浓度LY294002单独及联合用药分别作用12、24、48 h,MTT方法检测T1、T2、T3细胞的增殖活性;Western blot法检测细胞内Akt、p-Akt蛋白表达水平。结果姜黄素能显着抑制T1、T2、T3细胞增殖,呈时间与剂量依赖性,其中对T2、T3抑制作用更明显;姜黄素明显降低T2、T3细胞内p-Akt蛋白的表达,对Akt蛋白表达改变不明显;姜黄素与LY294002联合用药明显加强姜黄素对T2、T3细胞增殖抑制作用。结论姜黄素能显着抑制Akt转基因型细胞系T2和T3的生长;小剂量PI3K抑制剂LY294002即能明显增强其对Akt转基因型细胞系T2、T3的增殖抑制作用,其作用机制可能是通过PI3K/Akt通路下调p-Akt表达来实现的。(本文来源于《临床与实验病理学杂志》期刊2018年09期）
于雷[9]（2018）在《转基因细胞法检测重组人脑利钠肽生物学活性研究》一文中研究指出重组人脑利钠肽(Brain Natriuretic Peptide,BNP)为国家一类新药,2005年获CFDA批准上市,临床用于患有休息或轻微活动时呼吸困难的急性失代偿心力衰竭的治疗。中检院重组药物室前期开发了一种转基因细胞测活的方法替代原有的兔主动脉条法,简化操作步骤的同时大大提高了准确度和精密度,相关成果发表于PLOS ONE杂志并获得国家发明专利。目前该法已在国内相关实验室推广,应用良好。在此基础上,本课题组又利用promega公司开发的Glosensor技术,建立了更加简便易行的报告基因测活方法,相关成果发表于JPA杂志。本报告主要介绍了两种转基因细胞测活方法的基本原理、方法建立和方法学验证内容,并以此为例展示了转基因细胞法在生物活性检测领域的应用前景以及中检院在该领域的创新研究成果。(本文来源于《第六届生物技术药物理化特性分析与质量研究技术研讨会资料汇编》期刊2018-07-22）
李宗帅[10]（2018）在《CRISPR/Cas9介导的双峰驼转基因细胞的构建及其用于iPS细胞诱导的探索》一文中研究指出双峰驼作为我国西北地区特有物种,由于环境等诸多因素的影响,野生双峰驼的数量正在急剧减少。选择合适的方法对其种质资源进行保护具有重要的意义。考虑到双峰驼较为特殊是生理特性,利用诱导性多功能干细胞(induced pluripotent stem cells,iPS cells)保护双峰驼的遗传资源是可行的,但iPS细胞的分离方法较为繁琐复杂。CRISPR/Cas9技术是最新的一种基因编辑技术。CRISPR全称为规律成簇间隔短回文重复序列(clustered regularly interspaced short palindromic repeats9,CRISPR)。理论上可实现全基因组的基因切割,并在多个物种上得到了证实。结合以上两种比较成熟的技术,本试验成功构建了双峰驼转基因细胞,为后期优化筛选iPS细胞的方法提供了生物材料,并对其诱导为iPS细胞的条件进行了初步探索,主要结果如下:1、表达载体的构建根据Nanog基因只在多能性细胞中表达的现象设计了上下游同源臂,长度分别是2341bp和1775bp。同时,克隆了eGFP基因和neo基因。本试验先将上、下游同源臂连入到pUC,然后连入具有真核启动子的neo基因,最后连入eGFP基因,成功获得了表达载体pUC-up-eGFP-pgk-down。2、切割载体的构建利用在线软件,根据20+NGG的原则在Nanog基因的终止密码子附近设计了叁对sgRNA。将其连入到pX330-eGFP中。3、双峰驼转基因细胞的获得将叁对切割载体转染到双峰驼胎儿成纤维细胞中,利用T7E1酶切检测各自的切割效率。选取切割效率最高的切割载体和表达载体共转染双峰驼胎儿成纤维细胞,通过G418筛选,获得基因敲入成功的细胞,并将其用于后续的iPS细胞诱导。4、双峰驼转基因细胞诱导为iPS细胞条件的探索用逆转录病毒将Oct4、Sox2、Klf4和c-Myc四个基因转入到双峰驼转基因细胞中,用不同培养方案在低氧环境下进行诱导培养。16d后对其进行碱性磷酸酶检测,表明诱导条件尚需优化。综上所述,本试验在双峰驼胎儿成纤维细胞的Nanog基因后定点敲入了两个基因(eGFP基因和具有真核启动子的neo基因)。成功构建了双峰驼转基因细胞,为后期优化筛选iPS细胞的方法提供了生物材料,并对其诱导为iPS细胞的条件进行了初步探索。(本文来源于《甘肃农业大学》期刊2018-06-01）
转基因细胞系论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的构建并表征tau及突变tau蛋白细胞和动物模型,检测模型tau蛋白及磷酸化tau蛋白表达情况及微管的形态,为tau蛋白及相关疾病的研究提供疾病模型。方法将不同的质粒分别转染到HEK293细胞中,构建过表达野生型tau以及P301L/P301S突变tau的细胞模型。引进并繁育rTg4510小鼠(P301L突变tau转基因小鼠)以及PS19小鼠(P301S突变tau转基因小鼠)。通过Western blotting法检测总tau及磷酸化tau蛋白的表达,应用免疫组织化学的方法检测转基因小鼠脑内磷酸化tau蛋白的表达情况,应用免疫荧光的方法检测HEK293细胞微管形态的变化。结果本研究成功构建过表达tau蛋白的细胞模型,繁育了两种tau转基因小鼠,在这些模型中tau蛋白表达及tau蛋白的磷酸化水平显着高于对照组。在不同突变类型的细胞和动物模型中,tau蛋白不同位点的磷酸化水平变化以及微管形态变化略有差异。结论本研究成功构建了P301L/P301S突变tau蛋白的细胞和动物模型,这些模型均表现了显着的tau蛋白过度磷酸化的病变,并引起了细胞微管形态或tau蛋白病理的变化,进而为包括AD在内的tau蛋白病变提供了实验模型。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
转基因细胞系论文参考文献
[1].朱姿英,卢克焕,Steve.L.Stice,陆阳清.转基因诱导永生化鸡细胞系的建立[J].基因组学与应用生物学.2019
[2].马登磊,张旭,罗艺,黄蕊,李雅莉.微管相关蛋白tau转基因细胞和动物模型的建立及tau蛋白病变表征[J].首都医科大学学报.2019
[3].郑海亮,王东方,方雅,刁小伟,文勇.通用型NF-κB荧光素酶报告基因细胞系的构建[J].生物技术通报.2019
[4].龙起樟,黄永兰,唐秀英,王会民,芦明.模式籼稻品种Kasalath转基因胚性悬浮细胞系的建立[J].江西农业大学学报.2019
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[6].王亮亮,孙婧,刘强和,邓铭,彭文丽.联合G418筛选构建GFP转基因骨髓基质干细胞系的实验研究[J].海南医学.2018
[7].刘晓华,文冬梅,余庆,邓凯,陆凤花.组蛋白甲基化抑制剂UNC0638对水牛转基因细胞外源基因表达的影响[J].畜牧兽医学报.2018
[8].曹程程,夏光,高英卓,吕庆杰.姜黄素联合LY294002对鼠卵巢癌转基因细胞系T1、T2、T3的抑制作用[J].临床与实验病理学杂志.2018
[9].于雷.转基因细胞法检测重组人脑利钠肽生物学活性研究[C].第六届生物技术药物理化特性分析与质量研究技术研讨会资料汇编.2018
[10].李宗帅.CRISPR/Cas9介导的双峰驼转基因细胞的构建及其用于iPS细胞诱导的探索[D].甘肃农业大学.2018
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