Burkholderia cepacia中具有解脂作用的胆固醇酯酶的酶学特性

论文摘要

为了更好地应用于工业领域,系统研究Burkholderia cepacia ZWS15胆固醇酯酶(EC 3. 1. 1. 13 cholesterol esterase,CHE)的酶学特性。通过DEAE离子交换从该菌发酵液中获得一种CHE,并探讨其有机溶剂与表面活性剂耐受性,以及底物水解特性。CHE在p H 5. 5～9. 0保持稳定,最适反应温度为40℃,在70℃温育2 h仍能保留70%以上的酶活,具有显著耐热性;在50%(体积分数)有机溶剂或5%(体积分数)表面活性剂存在下也具有较高酶活。飞行时间质谱鉴定该酶分子质量为37 k Da,其与胆固醇酯酶(源于洋葱伯尔霍尔德菌,Burkholderia cepacia)及脂肪酶(源于假单胞菌属,Pseudomonas sp.)具有较高匹配度。与商品化酶相比,CHE不仅具有胆固醇酯酶活性(对长链胆固醇酯类底物有明显偏好性),还具有解脂功能(可作用于三酰基甘油酯及对硝基苯酯)。该酶的优良性能可为其在食品、诊断、制浆造纸等领域的工业应用提供参考与借鉴。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 材料与试剂
•     1.1.1 生产菌株
•     1.1.2 培养基
•     1.1.3 试剂
•   1.2 实验方法
•     1.2.1 菌种培养及发酵
•     1.2.2 酶活测定方法
•       1.2.2. 1 胆固醇酯酶酶活测定方法
•       1.2.2. 2 解脂能力测定方法
•     1.2.3 胆固醇酯酶的纯化
•     1.2.4 蛋白浓度的测定及聚丙烯酰胺凝胶电泳
•     1.2.5 飞行时间质谱分析
• 2 结果与分析
•   2.1 B.cepacia胞外胆固醇酯酶的分离提取
•   2.2 B.cepacia胆固醇酯酶的酶学性质测定
•     2.2.1 胆固醇酯酶的最适pH和pH稳定性分析
•     2.2.2 胆固醇酯酶的最适温度和温度稳定性分析
•     2.2.3 表面活性剂对B.cepacia胆固醇酯酶稳定性的影响
•     2.2.4 有机溶剂对B.cepacia胆固醇酯酶稳定性的影响
•   2.3 B.cepacia胆固醇酯酶的肽谱分析
•   2.4 胆固醇酯酶与商品化酶的酯酶活性和解脂能力的比较分析
• 3 结论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 孙柳青,吴梦棋,张玲,武迪,辛瑜,杨海麟

关键词: 胆固醇酯酶,解脂作用,热稳定性,有机溶剂耐受性

来源: 食品与发酵工业 2019年14期

年度: 2019

分类: 工程科技Ⅰ辑

专业: 一般化学工业

单位: 工业生物技术教育部重点实验室(江南大学)

基金: 江苏省产学研(BY2016022-40),国家轻工技术与工程一流学科自主课题资助(2018-23)

分类号: TQ925

DOI: 10.13995/j.cnki.11-1802/ts.020089

页码: 9-14

总页数: 6

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