Sulfolobus acidocaldarius DNA聚合酶Ⅳ跨越损伤合成能力的酶学特征

论文摘要

【目的】以嗜酸嗜热硫化叶菌Sulfolobus acidocaldarius的DNA聚合酶Ⅳ （Saci0554）为例,表征其跨越模板上损伤碱基的DNA合成效果。【方法】将DNA聚合酶Ⅳ （SacpolⅣ）在大肠杆菌中进行重组表达,经亲和层析纯化得到SacpolⅣ蛋白;利用人工合成的带有不同损伤的寡核苷酸片段作为模板DNA,用尿素变性聚丙烯酰胺凝胶电泳技术,鉴定SacpolⅣ在体外跨越各种损伤碱基进行跨损伤合成的催化能力。【结果】SacpolⅣ重组蛋白能够不同程度地跨越嘌呤和嘧啶损伤,跨越能力的高低取决于损伤碱基与正常碱基形成氢键的能力。本研究还发现,SacpolⅣ能够在DNA链中掺入核糖核苷酸,但掺入核糖核苷酸的效率低于脱氧核糖核苷酸。【结论】本研究证实SacpolⅣ具有很强的跨越损伤合成能力,能够跨越多种氢键配对能力减弱的损伤碱基,为其在细胞内的跨越损伤合成功能提供了生化证据。

论文目录

• 1 材料和方法
•   1.1 材料
•   1.2 表达载体构建
•   1.3 重组蛋白的诱导表达和纯化
•   1.4 SacpolIV跨越损伤活性测定与比较
• 2 结果和分析
•   2.1 SacpolIV表达纯化及活性鉴定
•   2.2 S.acidocaldarius聚合酶IV对不同嘧啶损伤的跨越能力的比较
•   2.3 S.acidocaldarius聚合酶IV对不同嘌呤损伤的跨越能力的比较
•   2.4 S.acidocaldarius聚合酶IV掺入dNMP与rNMP能力的比较
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 王伟玮,王风平,刘喜朋

关键词: 嗜热古菌,嗜酸嗜热硫化叶菌,聚合酶,跨越损伤合成,损伤碱基

来源: 微生物学报 2019年03期

年度: 2019

分类: 基础科学

专业: 生物学

单位: 上海交通大学生命科学技术学院微生物代谢国家重点实验室

基金: 国家自然科学基金(31371260)~~

分类号: Q936

DOI: 10.13343/j.cnki.wsxb.20180176

页码: 478-488

总页数: 11

文件大小: 1577K

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