小麦淀粉分支酶CRISPR/Cas9基因敲除系统gRNA表达载体构建

论文摘要

本研究以小麦淀粉分支酶（starch branching enzyme, SBEIIa）为研究对象,选取SBEIIa基因外显子5’端的第一及第二个外显子区域的4个SBEIIa-gRNA参试靶点进行靶位点活性检测,确定最佳基因敲除靶点。采用试剂盒法,以选定基因敲除靶点序列设计gRNA引物,通过oligo二聚体（Oligoduplex）合成、oligo二聚体插入载体、转化及鉴定等步骤,构建具有表达小麦淀粉分支酶gRNA （guide RNA）的CRISPR/Cas9基因敲除系统,获得小麦淀粉分支酶基因敲除载体。根据载体中插入序列,进行测序分析;测序结果能够确认gRNA已经完整准确地连入载体。研究构建的小麦淀粉分支酶基因敲除载体能对小麦SBEIIa基因表达量进行负向调控,对后续小麦淀粉分支酶基因及向其它相关基因编辑调控研究提供科学依据。

论文目录

• 1 结果与分析
•   1.1 参试靶点的获得
•   1.2 参试SBEIIa-g RNA靶点的活性检测
•   1.3 小麦淀粉分支酶基因SBEIIa基因敲除载体构建
• 2 讨论
• 3 材料与方法
•   3.1 试验材料
•   3.2 gRNA靶位点选择
•   3.3 参试SBEIIa-gRNA靶点活性检测
•   3.4 小麦淀粉分支酶SBEIIa基因敲除载体构建
• 作者贡献

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 李苗,陈晓军,马斯霜,白海波,郑国保,朱金霞,张源沛

关键词: 小麦,系统,淀粉分支酶基因,载体构建

来源: 分子植物育种 2019年20期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学

单位: 宁夏农林科学院农业生物技术研究中心

基金: 宁夏回族自治区农业育种专项(2013NYYZ02),宁夏回族自治区重点研发计划项目(对外科技合作)共同资助

分类号: Q943.2

DOI: 10.13271/j.mpb.017.006668

页码: 6668-6672

总页数: 5

文件大小: 686K

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